【摘要】：丹參作為中藥中常用大宗中藥材,應(yīng)用極廣,能夠在心腦血管等多種疾病治療中起到良好療效,市場(chǎng)需求量大。但是在中藥材市場(chǎng)上,丹參的種質(zhì)來(lái)源混亂,產(chǎn)地初加工及生產(chǎn)加工不一,對(duì)于丹參從種植、產(chǎn)地初加工到生產(chǎn)成品的過(guò)程中,沒(méi)有統(tǒng)一規(guī)范化的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行指導(dǎo),從而導(dǎo)致市場(chǎng)上的丹參質(zhì)量不一,甚至出現(xiàn)大量不合格的丹參流通于市場(chǎng)。本文進(jìn)行發(fā)汗與非發(fā)汗兩種不同炮制工藝下丹參提取物在體內(nèi)外對(duì)于P-gp影響的研究,旨在為丹參的產(chǎn)地初加工提供一定的科學(xué)依據(jù)。目的:本課題選取人肝癌HepG2細(xì)胞研究發(fā)汗與非發(fā)汗丹參提取物對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)P-gp功能及表達(dá)的影響研究,接著進(jìn)行發(fā)汗與非發(fā)汗丹參提取物給藥大鼠,研究其對(duì)大鼠體內(nèi)肝、腸、腦、腎、心臟P-gp表達(dá)影響的研究。方法:體外實(shí)驗(yàn)中,MTT實(shí)驗(yàn)確定發(fā)汗與非發(fā)汗丹參總酚酸提取物和丹參酮提取物對(duì)于HepG2細(xì)胞的最佳給藥濃度,接著通過(guò)Rho-123實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)汗與非發(fā)汗丹參提取物對(duì)HepG2細(xì)胞P-gp功能影響的研究,然后通過(guò)RT-PCR和Western blot法進(jìn)行其發(fā)汗與非發(fā)汗丹參提取物對(duì)于P-gp的mRNA和蛋白表達(dá)影響的研究。體內(nèi)實(shí)驗(yàn),通過(guò)給藥大鼠發(fā)汗與非發(fā)汗丹參提取物,采用RT-PCR和Western blot法進(jìn)行其發(fā)汗與非發(fā)汗丹參總酚酸提取物和丹參酮提取物對(duì)于大鼠肝、腸、腦、腎、心臟P-gp表達(dá)影響的研究。結(jié)果:采用MTT實(shí)驗(yàn)確定發(fā)汗與非發(fā)汗丹參總酚酸提取物和丹參酮提取物對(duì)HepG2細(xì)胞的給藥濃度:丹酚酸類提取物濃度為20、100、500μg/mL;丹參酮提取物濃度為2、10、50μg/mL。Rho-123實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)汗與非發(fā)汗丹參總酚酸提取物和丹參酮提取物對(duì)HepG2細(xì)胞P-gp功能的影響,積累和外排的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明發(fā)汗與非發(fā)汗丹參總酚酸提取物類20、100μg/mL對(duì)于HepG2細(xì)胞P-gp無(wú)影響,50μg/mL時(shí)有一定的誘導(dǎo)作用,且其發(fā)汗要比非發(fā)汗丹參總酚酸提取物誘導(dǎo)作用強(qiáng);發(fā)汗與非發(fā)汗丹參酮提取物濃度2μg/mL對(duì)于HepG2細(xì)胞P-gp無(wú)影響,當(dāng)濃度為10、50μg/mL對(duì)其HepG2細(xì)胞P-gp有抑制作用,且隨著濃度的增加,抑制作用更強(qiáng),同等濃度下其發(fā)汗要比非發(fā)汗丹參丹參酮提取物抑制作用更強(qiáng)。RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Rho-123實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致。最后采用RT-PCR和Western blot法進(jìn)行其發(fā)汗與非發(fā)汗丹參總酚酸提取物和丹參酮提取物對(duì)于大鼠肝、腸、腦、腎、心臟P-gp表達(dá)影響的研究,結(jié)果表明發(fā)汗與非發(fā)汗丹參總酚酸提取物對(duì)于大鼠肝、腸、腦、腎、心臟P-gp表達(dá)無(wú)影響,發(fā)汗與非發(fā)汗丹參酮提取物對(duì)于大鼠肝、腸、腦、腎P-gp表達(dá)有抑制作用,且發(fā)汗要比非發(fā)汗丹參丹參酮提取物抑制作用更強(qiáng);但是對(duì)于心臟P-gp表達(dá)則無(wú)影響。結(jié)論:體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明發(fā)汗與非發(fā)汗丹參總酚酸提取物正常給藥濃度對(duì)于其P-gp功能和表達(dá)無(wú)影響,提高濃度可能對(duì)于P-gp功能和表達(dá)有誘導(dǎo)作用,且發(fā)汗要比非發(fā)汗丹參總酚酸提取物誘導(dǎo)作用強(qiáng)。發(fā)汗與非發(fā)汗丹參酮提取物低濃度對(duì)于P-gp功能和表達(dá)無(wú)影響,正常給藥濃度對(duì)其有抑制作用,隨著濃度的增加,抑制作用更強(qiáng),且發(fā)汗要比非發(fā)汗丹參酮提取物對(duì)P-gp抑制作用更強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)可為丹參的產(chǎn)地初加工提供一定的科學(xué)依據(jù),且能夠?yàn)榈⒓捌涮崛∥锫?lián)合使用其抗癌、抗腫瘤等多藥耐藥藥物提供一定的理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

即可加入同體積完全培養(yǎng)基進(jìn)行終止消化胞完全脫落，吸取細(xì)胞混懸液于 15 mL 離心。去除上清液，加入適量完全培養(yǎng)基，輕柔吹養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿/六孔板/96 孔板。放入 37℃、5%的細(xì)胞培養(yǎng)至培養(yǎng)瓶 80-90%時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞操作，離心后棄去舊的培養(yǎng)基，加入配好的，移入細(xì)胞凍存管，旋緊凍存管蓋子，用封，隨后放入-20℃冰箱放置 2 小時(shí)，隨后放入罐長(zhǎng)期保存。學(xué)觀察與計(jì)數(shù)

圖 2 發(fā)汗與非發(fā)汗丹參酮提取物給藥培養(yǎng) 8、24、48 h 后 HepG2 細(xì)胞活力圖與空白對(duì)照相比，*P <0.05，＃P <0.001。Fig2Activity of HepG2 cells after administration of sweating and non-sweatingtanshinone extract for 8, 24 and 48 hours,Compared with the blank control group,*P <0.05，＃P <0.001.表 2 發(fā)汗與非發(fā)汗丹參酮提取物給藥培養(yǎng) 8、24、48 h 后 HepG2 細(xì)胞的存活率（Mean±SD, n=3）Tab2 Survival rate of HepG2 cells after administration of sweating and non-sweatintanshinone extracts for 8, 24 and 48 hours (Mean±SD, n=3)物度HepG2 細(xì)胞存活率（100%）NSTN 組 STN 組

圖 3 發(fā)汗與非發(fā)汗丹參提取物對(duì) HepG2 細(xì)胞內(nèi)羅丹明D、E、F、G、H、I、J 分別為空白對(duì)照組、維拉帕米酸提取物組、發(fā)汗丹參總酚酸提取物組（100 μg/mL）發(fā)汗丹參酮提取物組（2 μg/mL、10 μg/mL、50 μg/mL空白對(duì)照組相比，**p<0.01，***Fig3 Effects of sweating and non-sweating salvia miltiorof rhodamine 123 in HepG2 cells. D, E, F, G, H, I, and verapamil inhibitor group, non-sweating and sweating sa(100 μg/mL), non-sweating and sweating tanshinone eμg/mL、50 μg/mL). K is a the resulty statistical analyscontrol group, **p<0.01，***p<

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5 李W

本文編號(hào)：2793197