【摘要】：鹿皮膠是以鹿科動(dòng)物梅花鹿(Cervus nipport T.)或馬鹿(Cervus elaphus L.)的皮為原料熬制而成,具有補(bǔ)血益氣、補(bǔ)腎壯陽(yáng)等功能。目前主要存在的問(wèn)題是鹿皮膠的原料難以鑒定、熬制工藝、藥理作用以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究工作還不完善。鑒于上述問(wèn)題,本文利用DNA條形碼技術(shù),對(duì)不同鹿種的鹿皮進(jìn)行鑒定區(qū)分,建立了新的鑒別方法;同時(shí)對(duì)鹿皮膠的熬制工藝進(jìn)行了改進(jìn);并對(duì)鹿皮膠的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行深入研究,具體的研究結(jié)果如下:1.鹿皮種類及真?zhèn)蔚腄NA條形碼鑒定基于樣品的COI條形碼序列,建立NJ樹(shù)分析正品鹿皮與混偽品的區(qū)別。NJ樹(shù)結(jié)果顯示,正品梅花鹿鹿皮和馬鹿鹿皮分別聚集為獨(dú)立的一支,支持率為100%,有明顯的單系性�；靷纹窐悠芬卜謩e聚集為單獨(dú)的一支,支持率為100%。本研究證明基于COI序列的DNA條形碼技術(shù)可以有效鑒別鹿皮真?zhèn)巍?.鹿皮膠的熬制工藝研究以出膠率、總蛋白含量和綜合評(píng)分為主要考察指標(biāo),通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選,通過(guò)直觀分析及方差分析可知,煎煮次數(shù)(B因素)水平變化對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響,結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)需要,熬制條件調(diào)整為A_2B_3C_1,即:加10倍量水,煎煮5次,每次2小時(shí),即為煎煮5次,每次加入10倍量水,每次2小時(shí)。3.驗(yàn)證鹿皮膠的免疫調(diào)節(jié)作用采用腹腔注射環(huán)磷酰胺(Cy)法建立小鼠免疫低下模型,研究鹿皮膠的免疫調(diào)節(jié)作用,結(jié)果顯示鹿皮膠對(duì)免疫低下小鼠的臟器指數(shù),脾淋巴細(xì)胞增殖都有促進(jìn)作用,可以增強(qiáng)小鼠腹腔MΦ能量代謝水平和吞噬中性紅的能力,提高外周血CD4~+、CD8~+細(xì)胞數(shù),和CD4~+/CD8~+的比值,實(shí)驗(yàn)證明鹿皮膠具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。4.鹿皮膠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立參照2015版《中華人民共和國(guó)藥典》阿膠項(xiàng)下檢測(cè)指標(biāo),我們對(duì)自制10批鹿皮膠樣品的水分、重金屬、水不溶物及氨基酸含量進(jìn)行了測(cè)定,綜合10批樣品檢測(cè)結(jié)果,暫定鹿皮膠水分含量不超過(guò)15%;Pb的含量不超過(guò)1.36mg/kg,Cd的含量不超過(guò)0.1mg/kg,As的含量不超過(guò)0.1mg/kg,Hg的含量不超過(guò)0.1mg/kg,Cu的含量不超過(guò)0.83mg/kg;水不溶物含量不超過(guò)2%;氨基酸總含量不低于80%。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R283;R285
【圖文】：

圖 1.1 各樣品 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Fig 1.1 The results of PCR amplification of each sample上而下第 1 條條帶的序列長(zhǎng)度；圖中編號(hào)分別對(duì)應(yīng)表 1 中實(shí)驗(yàn)材料編號(hào)。得 20 個(gè)樣品的 COI 序列，其中鹿種樣品的平均（C+G）+T 的含量明顯高于（C+G）的含量，牛皮的（C+G）含。COI 序列信息請(qǐng)?jiān)斠?jiàn)表 1-3。

序列作為外類群。鹿屬、馴鹿屬、炃鹿屬、牛屬各聚為一支與形態(tài)分類學(xué)一致。馴鹿 3樣本序列和炃鹿（TL014、TL015、TL016、TL017、TL018）5 個(gè)樣本的所有個(gè)體各形一個(gè)單系，節(jié)點(diǎn)支持率分別為 77.1%和 100%，馴鹿位于系統(tǒng)樹(shù)鹿科基部，炃鹿位于其方。馬鹿（ML007、ML008、ML009、ML010）共 4 個(gè)樣本，其于數(shù)據(jù)庫(kù)數(shù)列 GQ329009.1一支節(jié)點(diǎn)支持率為 98.8%。梅花鹿（MHL001、MHL002、MHL003、MHL004、MHL005、HL006）共 6 個(gè)樣本，于 4 個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)序列（EU835712.1、KM047663.1、GQ329015.1、385847.1）聚為一支節(jié)點(diǎn)支持率為 99.9%，新西蘭赤鹿（CL011、CL012、CL013）聚一支。證明基于 COI 序列的 DNA 條形碼技術(shù)可以有效鑒別鹿皮真?zhèn)�。�?jiàn)圖 1.2。

表 3-4 鹿皮膠對(duì)免疫低下小鼠血常規(guī) WBC、RBC、PLT 等指數(shù)的影響Table 3-4 Effect of deer skin glue on blood routine WBC, RBC and PLT in immunocompromised mi組別 劑量（mg/kg） WBC(103/mm3) RBC(108/mm3) PLT(103/mm3)空白組 Control 11.08±2.75 10.38±1.35 1167.8±125.48模型組 Cy 100mg/kg 9.02±2.56#7.84±1.15##831.4±86.97###陽(yáng)性組 CCA 3g/kg 15.2±2.94** 10.7±1.62** 1177.75±134.96**低劑量 DG 1.5mg/kg 12.22±2.88* 8.71±1.83* 916.2±72.1*中劑量 DG 3mg/kg 15.44±3.58*** 10.18±1.16** 1038.8±98.09**高劑量 DG 6mg/kg 13.02±2.39* 9.2±1.33* 958.6±104.52*注：所有數(shù)據(jù)均表示為為 x ±S(n=8)，與空白組相比：#P<0.05，##P<0.01；與模型組相比：*P<0.05，**P<0.All data were expressed as x ±S (n=8). Compared with control group:#P<0.05,##P<0.01; Compared with Cy<0.05, **P<0.01.

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