【摘要】：背景密枝圓柏(Juniperus convallium)為柏科(Cupressaceae)刺柏屬(Juniperus)植物,是我國(guó)特有樹(shù)種,主要分布在西藏和四川西部地區(qū)。刺柏又稱 徐巴‖,作為傳統(tǒng)藏藥,在我國(guó)有著悠久的用藥歷史,因其具有清熱、解毒、祛濕的功效,被廣泛用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺炎、腎炎、黃水病等疾病。文獻(xiàn)報(bào)道,風(fēng)濕及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病的發(fā)生不僅與補(bǔ)體系統(tǒng)的過(guò)度激活有關(guān),還與氧化應(yīng)激產(chǎn)生的自由基相關(guān)。現(xiàn)代藥理研究也表明,刺柏屬植物在抗炎、抗氧化、抗病毒、抗菌、抗腫瘤、殺蟲等方面均表現(xiàn)出較好的生物活性。刺柏屬植物中的化學(xué)成分多樣,主要包括揮發(fā)油、萜類、黃酮、木脂素、香豆素、甾體等。密枝圓柏為刺柏屬代表性植物之一,國(guó)內(nèi)外鮮見(jiàn)對(duì)其化學(xué)成分和生物活性方面的研究。因此,本文對(duì)密枝圓柏的化學(xué)成分及其生物活性進(jìn)行研究具有重要意義。目的六種刺柏屬植物枝葉和果實(shí)部位的揮發(fā)性成分,為研究刺柏屬植物不同部位及不同品種間的藥效差異提供參考。分離鑒定密枝圓柏乙醇提取物中化合物的結(jié)構(gòu),并測(cè)定化合物的抗補(bǔ)體、抗氧化和抗流感病毒活性,為闡明密枝圓柏的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供一定的參考。方法1.采用HS-GC-MS法對(duì)密枝圓柏、高山柏、垂枝香柏和香柏的枝葉及大果圓柏與滇藏方枝柏的枝葉和果實(shí)中揮發(fā)性成分進(jìn)行分析,利用NIST14譜庫(kù)并結(jié)合相對(duì)保留指數(shù)對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,采用面積歸一法確定各組分相對(duì)百分含量,并采用Ward's聚類法對(duì)枝葉部分的揮發(fā)性成分進(jìn)行聚類。2.采用正相硅膠、ODS-C_(18)和Sephadex LH-20及制備型高效液相色譜等方法對(duì)密枝圓柏乙醇提物進(jìn)行分離純化,結(jié)合理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。采用細(xì)胞溶血法測(cè)定各萃取部位的抗補(bǔ)體活性,并采用該方法測(cè)定化合物的經(jīng)典、旁路途徑抗補(bǔ)體活性及作用靶點(diǎn),采用DPPH、ABTS、FRAP法測(cè)定化合物抗氧化活性,采用MTT法測(cè)定體外抗流感病毒活性。結(jié)果1.從6種刺柏屬植物中共鑒定出62個(gè)化合物,占各樣品總成分的90.08%~98.82%,包括單萜烯類化合物15種、含氧倍半萜類化合物11種、倍半萜烯類化合物20種、含氧二萜類化合物2種、含氧單萜類化合物12種和異戊酸酯類化合物2種,其中α-蒎烯、β-蒎烯等單萜烯類成分含量較高。果實(shí)部位單萜烯含量高達(dá)80%以上,且主成分β-蒎烯含量超過(guò)45%,與枝葉部位揮發(fā)性成分存在顯著差異。聚類分析結(jié)果顯示,大果圓柏、滇藏方枝柏、高山柏和香柏?fù)]發(fā)性成分相似度較高,均以β-蒎烯含量最高,而密枝圓柏和垂枝香柏的主要成分分別為α-蒎烯和α-松油烯。2.密枝圓柏醇提物的乙酸乙酯和正丁醇萃取部位為抗補(bǔ)體活性有效部位,從密枝圓柏乙酸乙酯部位分離鑒定了17個(gè)化合物,包括黃酮類化合物9個(gè):穗花杉雙黃酮(1)、柏黃酮(2)、Cupressuflavone-4?-O-β-D-glucosides(3)、柚皮素-7-O-葡萄糖苷(4)、芹菜素(5)、山柰酚-3-O-(6''-O-E-肉桂酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(7)、槲皮素鼠李吡喃糖苷(8)和海波拉亭-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9);木脂素類化合物3個(gè):Isomassonianoside B(10)、異落葉松脂素-2a-O-D-葡萄糖苷(11)和異落葉松脂素-3a-O-D-葡萄糖苷(12);萜類化合物3個(gè):柳葉二醇(13)、3β-羥基山達(dá)海松酸(14)和(1R,3R,4aR,4bS,7R,10aR)-7-ethenyl-1,2,3,4,4a,4b,5,6,7,9,10,10a-dodecahydro-3-hydroxy-1,4a,7-trimethyl-1-phenanthrenemethanol(15);以及大丁苷元(16)和β-谷甾醇(17)。除16外,不同類型化合物對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)均具有不同程度的抑制活性,經(jīng)典途徑CH_(50)為0.05~3.99 mM,旁路途徑AP_(50)為0.58~19.13mM,其中,黃酮類化合物,尤其雙黃酮類,是密枝圓柏中重要的抗補(bǔ)體活性成分,并且酚羥基和糖苷基團(tuán)可能是影響其抗補(bǔ)體活性的重要因素。黃酮類化合物(1~3,5~9)和木脂素類化合物(10~12)化合物具有不同程度的抗氧化活性。黃酮類化合物2和6具有較弱的抗流感病毒活性。結(jié)論1.刺柏屬植物枝葉和果實(shí)的揮發(fā)性成分存在顯著差異,且枝葉主成分差異為不同植物分類的主要因素。HS-GC-MS法是一種能夠簡(jiǎn)便快捷地分析該屬植物揮發(fā)性成分的方法。2.化合物(1~17)均為首次從密枝圓柏中分離得到,黃酮和木脂素類是其抗補(bǔ)體和抗氧化的主要活性成分,為密枝圓柏藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制研究提供了依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284.1;R285.5
【圖文】：

圖 1-1 6 種刺柏屬植物標(biāo)本圖Fig. 1-1 The plants of 6 Juniperus species驗(yàn)方法 頂空進(jìn)樣條件分別精密稱取0.002 g干燥的6種刺柏屬植物枝葉和大果圓柏及滇藏方枝末，放入20 mL頂空瓶中，密封后置于樣品盤內(nèi)。進(jìn)樣體積：2 mL；流速in；不分流；加熱溫度：120oC；加熱時(shí)間：20 min；震動(dòng)速度：400 rpm序：加熱10 s，靜止10 s。 氣相色譜條件TG-5MS 石英毛細(xì)管非極性柱（30 m×0.32 mm×1.00 μm）；載氣 He；柱流L/min；進(jìn)樣口溫度 250oC；柱溫程序：起始柱溫 40oC（保持 8 min），以 1oC 250oC（保持 30 min）；進(jìn)樣量 1 μL，不分流。

在上述實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)正構(gòu)烷烴標(biāo)準(zhǔn)品，刺柏屬植物密枝圓柏、高山柏、垂枝香柏和香柏的枝葉以及大果圓柏和滇藏方枝柏枝葉和果實(shí)的揮發(fā)性成分進(jìn)行HS-GC-MS分析，分別得到總離子流圖，見(jiàn)圖1-2（樣品及主峰編號(hào)同表1-2）。圖 1-2 六種刺柏屬植物枝葉和果實(shí)揮發(fā)性成分總離子流圖Fig. 1-2 GC-MS chromatogram of volatile components from twigs and fruits of 6 Juniperusspecies

圖 1-3 6 種刺柏屬植物枝葉的聚類分析Fig. 1-3 Cluster analysis of the twigs of 6 Juniperus species統(tǒng)蒸餾法的比較稱取20、10、5、2 mg刺柏屬植物枝葉和果實(shí)粉末，果顯示當(dāng)樣品量為5和2 mg時(shí)，分離色譜峰效果較好本實(shí)驗(yàn)與已報(bào)道的傳統(tǒng)水蒸氣法對(duì)比，涂永勤從10發(fā)性成分，董艷芳稱取200 g垂枝香柏提取其揮發(fā)油，不需提取，操作簡(jiǎn)便快捷。結(jié)果的探討-MS法基本可以將刺柏屬植物果實(shí)和枝葉部分從揮主成分含量占比較高，對(duì)區(qū)分不同部位及不同品種

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本文編號(hào)：2770067