【摘要】：背景和目的:消癌解毒方是國醫(yī)大師周仲瑛教授根據(jù)多年辨治腫瘤的臨床實踐經(jīng)驗,創(chuàng)制的治療腫瘤的有效驗方。導(dǎo)師吳勉華教授課題組通過大量的前期臨床和實驗研究,證實該方可以有效治療多種惡性腫瘤。然而,對于消癌解毒方中的有效活性成分如何發(fā)揮抗癌效果以及活性成分之間的相互作用機(jī)制尚不明確。本課題旨在研究其君藥白花蛇舌草的有效活性成分2-羥基-3-甲基蒽醌(HMA)的抗肺癌作用,并觀察消癌解毒方提取物的抗肺癌、膠質(zhì)瘤、乳腺癌和結(jié)腸癌作用,以及消癌解毒方中多種有效成分(山萘酚、熊果酸、齊墩果酸、豆留醇、麥角甾醇、常春藤皂苷元、2-羥基3-甲基蒽醌、人參皂苷Rg3、麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D')的抗膠質(zhì)瘤作用,并進(jìn)一步深入探討白花蛇舌草中的有效活性成分熊果酸(UA)和麥冬中的有效活性成分麥冬皂苷D'(OPD')的聯(lián)用抗膠質(zhì)瘤效果,以期探究消癌解毒方抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ),并評價復(fù)方中不同組分聯(lián)用的協(xié)同作用。方法:MTS、CCK-8法觀察上述提取物及化合物對細(xì)胞增殖的影響;克隆形成實驗檢測對細(xì)胞活性的影響;Annexin V-FITC/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期;劃痕實驗和Transwell實驗分別檢測細(xì)胞的遷移和侵襲能力;腫瘤干細(xì)胞自我更新實驗檢測腫瘤細(xì)胞球形成能力;蛋白芯片檢測多種相關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá);Real time-PCR法、Western Blot法分別檢測相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果:HMA可以抑制肺癌細(xì)胞A549的增殖和克隆形成能力,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,抑制A549細(xì)胞的侵襲能力,此抑制作用與下調(diào)IL-6誘導(dǎo)的MMP-1,MMP-2和MMP-9有關(guān)。HMA可以逆轉(zhuǎn)IL-6誘導(dǎo)上升的JAK2和STAT3的磷酸化水平。除此之外,還可以降低A549細(xì)胞上清中一系列炎性相關(guān)因子的表達(dá),包括IL-6、IL-6R、G-CSF、IL-8、MCP-1、RANTES和TNF-α等。消癌解毒方水提物、乙醇熱提物、乙醇冷提物、正丁醇提取物有一定的抗肺癌、膠質(zhì)瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌作用,其中對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的抑制作用最顯著。乙醇提取物和正丁醇提取物的效果優(yōu)于水提物。消癌解毒方中12種有效成分(山萘酚、熊果酸、齊墩果酸、豆甾醇、麥角甾醇、常春藤皂苷元、2-羥基3-甲基蒽醌、人參皂苷Rg3、麥冬皂苷B、短葶山麥冬皂苷C、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D')對人膠質(zhì)瘤U118、LN229、SW1783和SW1088細(xì)胞的增殖活性具有不同程度的抑制作用,其中以君藥白花蛇舌草中的有效成分UA和臣藥麥冬中的有效成分OPB、DT-13和OPD'的作用尤為顯著。UA和OPD'可顯著抑制人膠質(zhì)瘤U118、LN229、SW1783和SW1088細(xì)胞的生長,呈現(xiàn)劑量依賴性,其中以LN229細(xì)胞更為敏感。UA和OPD'聯(lián)用在抑制LN229細(xì)胞的增殖、活性、遷移侵襲能力和腫瘤干細(xì)胞自我更新能力上呈現(xiàn)協(xié)同效應(yīng),并且能協(xié)同增加LN229細(xì)胞的凋亡。OPD'能夠引起LN229細(xì)胞G2/M期阻滯,在對細(xì)胞周期的調(diào)控上UA和OPD'聯(lián)用未顯示出協(xié)同作用。此外,人凋亡因子蛋白芯片結(jié)果顯示,UA和OPD'聯(lián)用可以協(xié)同增加過氧化氫酶的水平,降低Survivin、Claspin、HO-1和HTRA2的水平。結(jié)論:消癌解毒方中有效活性成分HMA可以抑制人肺癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力,可能與其下調(diào)IL-6誘導(dǎo)的JAK2/STAT3通路有關(guān)。消癌解毒方中有效成分UA和OPD'具有顯著的抗膠質(zhì)瘤作用,二者聯(lián)用效果優(yōu)于單用組,顯示出了協(xié)同作用。我們的研究驗證了中藥復(fù)方組方的科學(xué)性,為部分闡明消癌解毒方的抗癌作用機(jī)制提供了實驗依據(jù),并為研究中醫(yī)復(fù)方中不同組分的協(xié)同增效作用提供了參考。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

補(bǔ)氣益脾、養(yǎng)陰生津；麥冬養(yǎng)陰生津、潤肺清心；僵蠶息風(fēng)止痙、化痰散結(jié)；蜈蚣祛風(fēng)定逡逑驚，攻毒散結(jié)；白花蛇舌草、山慈菇清熱解毒、消癰散結(jié)；八月札理氣活血、軟堅散結(jié)（消逡逑癌解毒方藥味組成示意圖見圖１－１）。方中以白花蛇舌草抗癌解毒為君，太子參、麥冬為逡逑臣，益氣養(yǎng)陰生津；佐以山慈菇、僵蠶、蜈蚣祛風(fēng)、解毒、化痰、散結(jié)；八月札為使，既逡逑軟堅散結(jié)，又調(diào)暢氣機(jī)。全方共奏扶正怯邪、解毒抗癌之功。逡逑腫瘤的發(fā)生，是癌毒以及多種病理因素長期作用于機(jī)體，致使組織細(xì)胞分化、增生異逡逑常、浸潤轉(zhuǎn)移，損傷正常組織所致。從邪正關(guān)系看，癌毒邪氣為客觀存在，亦存在正氣虧逡逑虛。對肺癌的中醫(yī)病機(jī)認(rèn)識為正虛為本，癌毒蘊肺、痰瘀阻滯為標(biāo)。對腦膠質(zhì)瘤認(rèn)識是風(fēng)逡逑１逡逑

圖２－１．荷瘤小鼠與正常小鼠受到ＩＬ－６／ＳＴＡＴ３調(diào)控的血清差異蛋白網(wǎng)絡(luò)圖逡逑（紅色代表表達(dá)上調(diào)，綠色代表表達(dá)卜＿調(diào)）逡逑圖２－２．高劑量組得到的差異蛋白中受ＩＬ－６／ＳＴＡＴ３上游調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)圖逡逑（紅色代表表達(dá)上調(diào)，綠色代表表達(dá)下調(diào)）逡逑２材料與方法逡逑２．１實驗材料逡逑２．１．１細(xì)胞逡逑人肺癌Ｈ１２９９、Ｈ２３細(xì)胞、小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌ＬＬＣ細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（ＨＵＶＥＣ）逡逑３３逡逑

逡逑圖２－１．荷瘤小鼠與正常小鼠受到ＩＬ－６／ＳＴＡＴ３調(diào)控的血清差異蛋白網(wǎng)絡(luò)圖逡逑（紅色代表表達(dá)上調(diào)，綠色代表表達(dá)卜＿調(diào)）逡逑圖２－２．高劑量組得到的差異蛋白中受ＩＬ－６／ＳＴＡＴ３上游調(diào)控的網(wǎng)絡(luò)圖逡逑（紅色代表表達(dá)上調(diào)，綠色代表表達(dá)下調(diào)）逡逑２材料與方法逡逑２．１實驗材料逡逑２．１．１細(xì)胞逡逑人肺癌Ｈ１２９９、Ｈ２３細(xì)胞、小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌ＬＬＣ細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（ＨＵＶＥＣ）逡逑３３逡逑

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡建宏;王茂林;潘亞文;;高遷移率族蛋白B1在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制研究[J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2019年02期

2 楊海霞;李曉鳴;;外泌體與膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J];臨床與病理雜志;2017年11期

3 秦麗娟;賈永森;趙喜慶;張?zhí)?張偉;孫娜;;鴉膽子油乳注射液對膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲性的影響及其可能機(jī)制[J];四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2016年03期

4 齊玲;徐俊杰;紀(jì)朋艷;呂士杰;韓磊;王瑋瑤;;西蘭花多肽抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的機(jī)制研究[J];中國藥學(xué)雜志;2014年12期

5 萬政強(qiáng);陳晨;伏林山;孫關(guān);;吡格列酮對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的抑制研究[J];東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年01期

6 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過量鋅對鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞體外生長的影響[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

7 楊偉廉,王堯,韋永新,阮長耿,杜子威;抗膠質(zhì)瘤細(xì)胞單克隆抗體SZ-38及其識別抗原的生化特征[J];生物化學(xué)雜志;1988年06期

8 斯可哉;;在體外和體內(nèi)用利血平調(diào)節(jié)C_6膠質(zhì)瘤細(xì)胞亞系對ACNU的抗藥性[J];國外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊);1988年02期

9 楊偉廉;抗膠質(zhì)瘤細(xì)胞單克隆抗體SZ—38及其識別抗原的生化特征[J];蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1989年01期

10 李方園;高翼之;王世浚;;四種人癌基因在腦瘤中的擴(kuò)增和重排(摘要)[J];鐵道醫(yī)學(xué);1989年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 楊鵬宇;李強(qiáng);張建生;;雷帕霉素聯(lián)合尼莫司汀抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的研究[A];2011中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

2 俞文華;車志豪;張祖勇;許培源;陸鏞民;傅林;朱強(qiáng);陳鋒;杜權(quán);;骨橋蛋白在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá)及其信號傳導(dǎo)途徑[A];2005年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

3 潘冬生;;多基因修飾膠質(zhì)瘤細(xì)胞疫苗的抗腫瘤免疫反應(yīng)[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

4 張玉寶;孫金龍;孟祥靖;魏麟;劉廣存;崔友強(qiáng);;膠質(zhì)瘤細(xì)胞中VEGF、MMP-2、MMP-9的表達(dá)及臨床觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

5 趙世光;;膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期動力學(xué)研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會成立大會資料匯編[C];2004年

6 張瑞;胡佩珊;臧清策;岳小飛;周幟;徐曉宇;韓為;張瑞萍;再帕爾·阿不力孜;;基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞代謝組學(xué)分析[A];中國化學(xué)會第十一屆全國生物醫(yī)藥色譜及相關(guān)技術(shù)學(xué)術(shù)交流會（大會特邀報告及墻報）論文摘要集[C];2016年

7 宋楊英;劉英姿;單保恩;;IL-18基因轉(zhuǎn)染對大鼠9L膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長特性的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗實驗室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

8 楊孔賓;趙世光;劉炳學(xué);陳曉豐;戴欽舜;;K~+通道阻斷劑四乙胺對大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和凋亡影響[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

9 李格;黃益玲;;MiR-19a靶向LRIG1對腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的影響[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第十二屆全國會員代表大會暨2018年全國學(xué)術(shù)會議摘要集[C];2018年

10 李子超;姜東伯;楊舒雅;王靜;孫元杰;趙國慶;楊琨;;B細(xì)胞受體相關(guān)蛋白31對膠質(zhì)瘤細(xì)胞行為的影響[A];第十一屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2016年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 特約記者 李岳冰;中國膠質(zhì)瘤放療專家共識發(fā)布[N];健康報;2018年

2 張獻(xiàn)懷　張文;瘤區(qū)埋雷 持續(xù)殺傷[N];健康報;2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 孫超;消癌解毒方中有效成分抗腫瘤的作用機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 封林森;miR-330-5p靶向ITGA5抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的惡性表型及其機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

3 苗發(fā)安;DKC1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

4 張開鑫;MiR-940通過MTHFD2基因影響膠質(zhì)瘤細(xì)胞的代謝、增殖和侵襲能力及其機(jī)制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

5 肖瑾;多模態(tài)MRI在人腦膠質(zhì)瘤病理分級、基因型及其預(yù)后評估中的應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

6 尤昕;Nexilin表達(dá)下調(diào)對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制研究[D];延邊大學(xué);2015年

7 鄧鑫;HAX-1蛋白通過Akt1通路對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和調(diào)亡的影響及機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2018年

8 唐純海;miR-130a調(diào)控靶基因HMGB2抑制膠質(zhì)瘤增殖和EMT的分子機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

9 孫瑾;MiR-152-3p靶向調(diào)控DNMT1-NF2通路與膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡、侵襲機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

10 盧鳳飛;miR-497/Wnt3a/c-jun反饋環(huán)路調(diào)控神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長和上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化的分子機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 宋亞男;炎癥對膠質(zhì)瘤細(xì)胞中線粒體生物學(xué)性能的影響[D];鄭州大學(xué);2019年

2 譚呼;膠質(zhì)瘤患者血清MAGE-D4蛋白和抗體的檢測及臨床意義分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

3 鄔慧賢;miR-200a靶向抑制MAGED4及其對膠質(zhì)瘤遷移侵襲的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

4 王修成;人腦膠質(zhì)瘤組織中IDH-1和MGMT的表達(dá)及相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2019年

5 劉暢;膠質(zhì)瘤中啟動子甲基化和轉(zhuǎn)錄因子Sp1對MAGE-D4的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

6 吳明娜;ATF5在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及預(yù)后意義[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

7 古禹;Per2基因過表達(dá)對U87膠質(zhì)瘤干細(xì)胞放療敏感性影響的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年

8 郭忠yN;膠質(zhì)瘤分子標(biāo)志物IDH1、MGMT和Ki-67與預(yù)后關(guān)系的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年

9 馬寧飛;導(dǎo)航輔助波譜與病理結(jié)合指導(dǎo)功能區(qū)膠質(zhì)瘤切除及術(shù)后放化療[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年

10 仇誠;MicroRNA-155在膠質(zhì)瘤中的作用及其機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號：2769995