【摘要】：目的:觀察黃龍湯聯(lián)合美羅培南對膿毒癥模型大鼠的抗炎作用,通過對各組大鼠近回盲部回腸組織中TLR4、MyD88、NF-κB、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表達(dá)水平的檢測,探討黃龍湯聯(lián)合美羅培南對膿毒癥大鼠回腸TLR4/NF-κB和PI3K/Akt信號通路的調(diào)控作用,闡述黃龍湯聯(lián)合美羅培南對膿毒癥模型大鼠的抗炎作用機(jī)制。材料與方法:雄性SPF級SD大白鼠70只,200±20g,購自遼寧長生生物科技有限公司,實驗動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(遼)2010-0001。實驗動物購入后,飼養(yǎng)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心SPF級動物室內(nèi),許可證號:SYXK(遼)2013-0009。常規(guī)顆粒飼料喂養(yǎng),自由食水,12小時晝夜節(jié)律。大鼠購入后,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,觀察其狀態(tài)良好,對周圍環(huán)境完全熟悉,活動度良好后,開始正式實驗。黃龍湯中藥飲片,購自遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥局。注射用美羅培南,石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)(石家莊)有限公司生產(chǎn)。70只大鼠,隨機(jī)抽取10只作為假手術(shù)組,剩余60只行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù),模型復(fù)制后,再次隨機(jī)分為模型對照組,西藥組,黃龍湯聯(lián)合西藥組,共計四組。大鼠稱量體重后,經(jīng)腹腔注射10%水合氯醛溶液,3ml/kg體重,待大鼠深度麻醉后,左側(cè)腹部平3-4腰椎旁開0.8cm處剪毛,俯臥位固定于手術(shù)臺,去毛處碘伏常規(guī)消毒后,縱向切口1cm,逐層鈍性分離,直至腹腔,組織鑷探查,找到盲腸尖,小心移至切口處,距離盲腸尖1cm處結(jié)扎盲腸,并于盲腸尖部以7號針頭不重復(fù)刺穿盲腸3次,擠壓盲腸,另少許盲腸內(nèi)容物溢出,盲腸歸位,逐層縫合肌層及皮膚層,碘伏消毒。假手術(shù)組大鼠術(shù)式同上,但不做盲腸結(jié)扎和穿孔。術(shù)后24小時,于假手術(shù)大鼠和盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)大鼠中各隨機(jī)抽取2只,斷髓處死,取近回盲部3cm處的回腸組織,浸泡于4%多聚甲醛溶液中固定,次日取出制備石蠟切片,HE染色法觀察回腸病理改變,判斷模型是否復(fù)制成功。假手術(shù)組:正常飼養(yǎng),不作處理。術(shù)后次日,模型復(fù)制成功后,假手術(shù)組大鼠正常飼養(yǎng),不做處理;模型對照組大鼠經(jīng)口灌胃蒸餾水,2ml/次·只~(-1),同時經(jīng)腹腔注射生理鹽水,1ml/次·只~(-1),每日2次,連續(xù)4天;西藥組大鼠經(jīng)腹腔注射美羅培南注射液,1ml/次·只~(-1),每日2次,連續(xù)4天;黃龍湯聯(lián)合西藥組大鼠經(jīng)口灌胃黃龍湯,2ml/次·只~(-1),同時經(jīng)腹腔注射美羅培南注射液,1ml/次·只~(-1),每日2次,連續(xù)4天。末次給藥后1小時,將大鼠以10%水合氯醛經(jīng)腹腔注射麻醉,剖開腹腔,腹主動脈穿刺采集全血5ml至促凝管中,室溫靜置1小時,2000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,分離上清液用于檢測IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量。各組大鼠取血后,于近回盲部3cm處截取回腸組織2cm,預(yù)冷PBS緩沖液洗凈后,凍存于2ml凍存管中,用于檢測回腸組織中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量和TLR4、MyD88、NF-κB的表達(dá)水平。另取回腸組織2cm,浸泡于4%多聚甲醛溶液中,用于免疫組織化學(xué)法檢測回腸組織中PI3K、Akt、p-Akt的表達(dá)水平。自CLP模型復(fù)制后,每日觀察大鼠一般狀態(tài),末次給藥后,采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測各組大鼠血清、回腸組織中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量;采用western-blot法檢測回腸組織中TLR4、MyD88、NF-κB的表達(dá)水平;采用免疫組織化學(xué)法檢測回腸組織中PI3K、Akt、p-Akt的表達(dá)水平。結(jié)果:1.模型評價:假手術(shù)組CLP術(shù)后大鼠近回盲部回腸組織HE染色結(jié)果顯示:假手術(shù)組大鼠黏膜層完好,尤其是上皮層,未見受損改變,黏膜下層未見炎性細(xì)胞浸潤情況。CLP術(shù)大鼠回腸HE染色鏡下可見上皮層變性、脫落,腸絨毛排列紊亂,甚至發(fā)生融解或缺失,黏膜下層有大量的炎性細(xì)胞浸潤,漿膜層也可見炎性細(xì)胞,偶見壞死灶一般狀態(tài)觀察2.一般狀態(tài)觀察:CLP術(shù)后,意外死亡3只,完全蘇醒后,飼養(yǎng)至次日,期間死亡12只,次日隨機(jī)抽取2只進(jìn)行模型評價,剩余CLP術(shù)后大鼠43只,隨機(jī)分為三組,模型對照組15只,西藥組14只,黃龍湯聯(lián)合西藥組14只。干預(yù)期間,模型對照組大鼠死亡7只,西藥組死亡6只,黃龍湯聯(lián)合西藥組死亡5只。假手術(shù)組未見死亡,隨機(jī)抽取2只進(jìn)行模型評價。末次給藥后,假手術(shù)組大鼠傷口愈合良好,毛色潔白,富有光澤,活動度良好,食水量正常。模型對照組大鼠狀態(tài)最差,毛色枯槁,蜷縮聚堆于鼠籠角落,活動度極少,進(jìn)水進(jìn)食量急劇減少。西藥組和黃龍湯聯(lián)合西藥組大鼠狀態(tài)明顯好于模型對照組,未見大鼠聚堆現(xiàn)象,但活動度明顯較假手術(shù)組差,傷口愈合情況尚可。3.各組大鼠血清及回腸組織中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量檢測結(jié)果顯示:與假手術(shù)組比較,其余三組大鼠血清及回腸組織中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量均顯著升高(p0.01),有統(tǒng)計學(xué)差異;與模型對照組比較,西藥組和黃龍湯聯(lián)合西藥組大鼠血清及回腸組織IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量均顯著降低(p0.01),有統(tǒng)計學(xué)差異;與西藥組比較,黃龍湯聯(lián)合西藥組大鼠血清及回腸組織IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量均顯著降低(p0.01),有統(tǒng)計學(xué)差異。4.各組大鼠回腸組織中TLR4、MyD88、NF-κB表達(dá)水平檢測結(jié)果顯示:與假手術(shù)組比較,模型對照組大鼠回腸組織中TLR4、MyD88、NF-κB表達(dá)水平顯著上調(diào),有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.01);與模型對照組比較,西藥組、黃龍湯聯(lián)合西藥組大鼠回腸組織中TLR4、MyD88、NF-κB表達(dá)水平顯著下調(diào),有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.01);與西藥組比較,黃龍湯聯(lián)合西藥組大鼠回腸組織中TLR4、MyD88、NF-κB表達(dá)水平顯著下調(diào),有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.01)。5.各組大鼠回腸組織中PI3K、Akt、p-Akt表達(dá)水平檢測結(jié)果顯示:與假手術(shù)組比較,模型對照組大鼠回腸組織中PI3K、Akt、p-Akt表達(dá)水平顯著上調(diào),有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.01);與模型對照組比較,西藥組、黃龍湯聯(lián)合西藥組大鼠回腸組織中PI3K、Akt、p-Akt表達(dá)水平顯著下調(diào),有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.01);與西藥組比較,黃龍湯聯(lián)合西藥組大鼠回腸組織中PI3K、Akt、p-Akt表達(dá)水平顯著下調(diào),有統(tǒng)計學(xué)差異(p0.01)。結(jié)論:1.大鼠盲腸穿孔術(shù)能夠引發(fā)全身較為嚴(yán)重的炎癥反應(yīng),與臨床膿毒癥的發(fā)生過程及其相似,可用于膿毒癥發(fā)病機(jī)制及藥物療效觀察等相關(guān)研究對象。2.黃龍湯聯(lián)合美羅培南對CLP模型大鼠血清及回腸組織中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8的含量。3.黃龍湯聯(lián)合美羅培南對CLP模型大鼠的抗炎作用可能通過抑制血清及感染灶局部IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8的水平而實現(xiàn)的。4.黃龍湯聯(lián)合美羅培南能夠下調(diào)膿毒癥模型大鼠回腸組織中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達(dá)水平。5.黃龍湯聯(lián)合美羅培南對膿毒癥模型大鼠的抗炎作用可能是通過抑制TLR4/NF-κB信號通路的過度活化而實現(xiàn)的。6.黃龍湯聯(lián)合美羅培南能夠下調(diào)膿毒癥模型大鼠回腸組織中PI3K、Akt、p-Akt蛋白表達(dá)水平。7.黃龍湯聯(lián)合美羅培南對膿毒癥模型大鼠的抗炎作用可能是通過抑制PI3K/Akt/NF-κB信號通路的活化而實現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

##p＜0.01，與模型對照組比較；△p＜0.05，△△p＜0.01，與西藥組比較；表 1-2 各組大鼠血清 IL-6、IL-8 含量（x±S）組別 n IL-6（pg/mL） IL-8（ng/mL）假手術(shù)組 8 15.71±1.28 0.351±0.026模型對照組 8 44.33±6.71** 0.979±0.106**西藥組 8 34.27±4.16**## 0.672±0.042**##黃龍湯聯(lián)合西藥組 9 26.08±4.36**##△△ 0.536±0.065**##△△注：*p＜0.05，**p＜0.01，與假手術(shù)組比較；#p＜0.05，##p＜0.01，與模型對照組比較；△p＜0.05，△△p＜0.01，與西藥組比較；

注：*p＜0.05，**p＜0.01，與假手術(shù)組比較；#p＜0.05，##p＜0.01，與模型對照組比較；△p＜0.05，△△p＜0.01，與西藥組比較；表 1-4 各組大鼠回腸組織 IL-6、IL-8 含量（x±S）組別 n IL-6（pg/g） IL-8（ng/g）假手術(shù)組 8 16.12±1.77 0.338±0.040模型對照組 8 49.68±5.77** 0.838±0.128**西藥組 8 38.60±3.91**## 0.674±0.107**##黃龍湯聯(lián)合西藥組 9 26.05±4.30**##△△ 0.482±0.066**##△△注：*p＜0.05，**p＜0.01，與假手術(shù)組比較；#p＜0.05，##p＜0.01，與模型對照組比較；△p＜0.05，△△p＜0.01，與西藥組比較；

圖 1-4 TNF-α/NF-κB 信號通絡(luò)模式圖和 TNF-α在炎癥反應(yīng)發(fā)生中發(fā)揮了重要生白細(xì)胞介素 6（interleukin 6,IL-6）胞因子，主要由巨噬細(xì)胞合成與分泌，發(fā)產(chǎn)生以病原體相關(guān)分子模式 (pathogen相關(guān)分子模式 (damage-associated mo灶局部的 PAMP 的信號被單核/巨噬細(xì)胞的應(yīng)（如圖 1-4）[21]。此外，IL-6 還可誘應(yīng)，增加內(nèi)皮細(xì)胞對 C5a 的反應(yīng)性，從而傷[22]。主要有巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞、靜止的 T 淋巴學(xué)效應(yīng)也十分復(fù)雜，曾被研究者成為 B

【參考文獻(xiàn)】

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1 徐麟皓;張曉明;王征;;雷帕霉素抑制糖尿病大鼠腎Akt/NF-κB信號通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的機(jī)制研究[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報;2015年09期

2 毛小元;周宏灝;劉昭前;;蛇床子素通過抑制PI3K/Akt信號通路減輕糖尿病腦病的炎癥反應(yīng)[J];中國老年學(xué)雜志;2015年17期

3 付瑜;黃煜;姜樹民;;黃龍湯對膿毒癥大鼠內(nèi)毒素及降鈣素原的影響[J];世界中西醫(yī)結(jié)合雜志;2015年01期

4 付瑜;姜樹民;黃煜;;黃龍湯對膿毒癥大鼠腸黏膜屏障功能的影響[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2015年02期

5 馬濤;閆妍;張允嶺;鄭宏;王新祥;王永炎;;補(bǔ)腎填精法對阿爾茨海默病小鼠PI3K/Akt通路激活及氧化應(yīng)激的影響[J];北京中醫(yī)藥;2014年07期

6 向鏡芬;楊祥;龔劍鋒;雷偉健;鄧艷瓊;牟丹;鐘國權(quán);孟啟勇;;PI3K/Akt信號通路在膿毒癥腎臟損傷誘導(dǎo)的自噬中的調(diào)節(jié)作用[J];中國病理生理雜志;2014年06期

7 王曉晨;吉愛國;;NF-κB信號通路與炎癥反應(yīng)[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2014年01期

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1 侯瑋琛;沒食子酰芍藥苷通過PI3K/Akt/Nrf2通路減輕腦缺血再灌注后炎癥反應(yīng)與氧化應(yīng)激損傷[D];吉林大學(xué);2017年

2 譚興;PI3K通路介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥參與高血壓交感亢進(jìn)的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

3 程可佳;PI3K/Akt/HIF-1α通路和局部變應(yīng)性炎癥在慢性鼻—鼻竇炎伴息肉發(fā)病機(jī)制中的作用研究[D];浙江大學(xué);2017年

4 高君偉;創(chuàng)傷后膿毒癥遺傳易感性的流行病學(xué)和臨床關(guān)聯(lián)性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

5 蔣旭琴;Toll樣受體2對小鼠過敏性炎癥及PI3K/Akt自噬信號通路的調(diào)控研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2017年

6 朱濤;穿心蓮內(nèi)酯通過抑制NF-κB信號通路對LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI/ARDS的保護(hù)機(jī)制的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

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1 邵帥;Sonic hedgehog/PI3K/AKt信號通路在帕金森病炎癥模型中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的研究[D];廣州醫(yī)科大學(xué);2017年

2 胡馨月;PI3K/AKT/mTOR信號通路對帕金森病模型大鼠黑質(zhì)氧化應(yīng)激的影響[D];華北理工大學(xué);2017年

3 沙哈邁德（Shah,Ahmad ）;PI3K/AKT信號通路在THP-1細(xì)胞中對NLRP3炎癥小體的調(diào)節(jié)作用[D];大連醫(yī)科大學(xué);2017年

4 代旭亮;APACHEⅡ評分對ICU膿毒癥患者預(yù)后的評估及原花青素B1通過PI3K/AKT-NF-KB通路調(diào)節(jié)THP-1細(xì)胞炎癥反應(yīng)的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2016年

本文編號：2761209