發(fā)布時(shí)間：2020-06-20 15:09

【摘要】：目的:探究大劑量下不同粒度的三七對(duì)秀麗隱桿線蟲的毒副作用,確定三七的安全給藥劑量;研究三七對(duì)秀麗線蟲的長(zhǎng)壽效應(yīng)及其可能的分子機(jī)制,確定最佳粉碎粒度;研究不同粒度三七中皂苷類成分體外溶出度及穩(wěn)定性,為三七粉的臨床應(yīng)用和進(jìn)一步的新劑型新制劑開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。方法:采用秀麗隱桿線蟲為模型,以10,20,40 mg/mL三七醇提物對(duì)線蟲急性暴露48 h和1,2,4 mg/mL三七醇提物對(duì)線蟲長(zhǎng)期暴露8 d后,檢測(cè)各組線蟲生存率、后代數(shù)、體長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)行為、細(xì)胞凋亡數(shù)、ROS水平等指標(biāo),確定三七的安全給藥劑量。以0.8,1.6 mg/mL三七醇提物對(duì)秀麗線蟲給藥4 d,測(cè)定各組線蟲壽命、后代數(shù),確定三七最佳給藥粒度;以三七細(xì)粉給藥,測(cè)定線蟲在急性氧化應(yīng)激和急性熱應(yīng)激條件下的生存率,測(cè)定氧化應(yīng)激1 h后線蟲體內(nèi)ROS水平,測(cè)定線蟲體內(nèi)脂質(zhì)含量、SOD活力水平和CAT活力水平,測(cè)定線蟲體內(nèi)衰老相關(guān)基因的表達(dá)水平,測(cè)定三七對(duì)轉(zhuǎn)基因線蟲CL2070體內(nèi)HSP-16.2∷GFP和轉(zhuǎn)基因線蟲CF1553體內(nèi)SOD-3∷GFP表達(dá)的影響,測(cè)定氧化應(yīng)激條件下三七對(duì)轉(zhuǎn)基因線蟲CF1038和CB1370壽命的影響,從而觀察三七對(duì)秀麗線蟲的抗衰老作用,及對(duì)IIS信號(hào)通路調(diào)節(jié)的影響。研究不同粒度三七中皂苷類成分在不同pH溶液中的溶出情況,測(cè)定不同粒度三七的加速穩(wěn)定性,為三七粉進(jìn)一步開發(fā)提供參考。結(jié)果:(1)以10,20,40 mg/mL三七醇提物對(duì)線蟲急性暴露48 h,均降低了線蟲的生存率、生殖能力和運(yùn)動(dòng)能力,增加了線蟲體內(nèi)細(xì)胞凋亡數(shù)目和自由基數(shù)量,且40 mg/mL三七細(xì)粉組表現(xiàn)最為顯著。(2)以1,2,4mg/mL三七醇提物對(duì)線蟲長(zhǎng)期暴露8 d,僅4 mg/mL組降低了線蟲的生存率、生殖能力和運(yùn)動(dòng)能力,增加了線蟲體內(nèi)細(xì)胞凋亡數(shù)和自由基數(shù)量,且以細(xì)粉組表現(xiàn)最顯著,1,2 mg/mL組各指標(biāo)均未表現(xiàn)出明顯的毒副作用。(3)以0.8,1.6 mg/mL三七醇提物對(duì)秀麗線蟲給藥,延長(zhǎng)了線蟲的壽命,同時(shí)不影響線蟲的生殖能力。以三七細(xì)粉醇提物給藥,與對(duì)照組相比,增加了線蟲在急性氧化應(yīng)激和急性熱應(yīng)激條件下的存活率,降低了線蟲體內(nèi)油脂含量和氧化應(yīng)激后體內(nèi)ROS水平,增加了線蟲體內(nèi)SOD活力和CAT活力。(4)與對(duì)照組相比,三七細(xì)粉醇提物給藥組線蟲體內(nèi)daf-2 mRNA表達(dá)量顯著下調(diào),daf-16、sod-3、hsp-16.2 mRNA表達(dá)量顯著上調(diào),且轉(zhuǎn)基因線蟲CL2070體內(nèi)HSP-16.2∷GFP和CF1553體內(nèi)SOD-3∷GFP表達(dá)量顯著性增加,daf-2和daf-16轉(zhuǎn)基因型線蟲壽命無(wú)顯著性影響。(5)在pH=1的鹽酸溶液中,三七粉中主要含有的3種皂苷均迅速被降解,未能測(cè)出其溶出曲線;在純水、pH=4.5和pH=6.8的緩沖溶液中,三七中粉和細(xì)粉溶出率和溶出速度均高于三七粗粉,但中粉和細(xì)粉溶出度相差不大;在三種溶出介質(zhì)中,pH越高,三七總皂苷的累計(jì)溶出率越高。在加速試驗(yàn)中,不同粒度三七粉末穩(wěn)定性基本一致。結(jié)論:通過大劑量(10,20,40 mg/mL)三七醇提物對(duì)線蟲急性暴露48 h,結(jié)果表明三七大劑量給藥有一定的毒副作用,且細(xì)粉效果最顯著;通過1,2,4 mg/mL三七醇提物對(duì)線長(zhǎng)期暴露8 d,表明以三七對(duì)線蟲給藥的安全劑量在2 mg/mL以下。以0.8,1.6 mg/mL三七對(duì)線蟲給藥,結(jié)果表明三七可延長(zhǎng)線蟲的壽命,具有一定的抗衰老作用,且三七細(xì)粉抗衰老作用最強(qiáng),可能是通過調(diào)節(jié)IIS信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。三七中粉和細(xì)粉的溶出度和穩(wěn)定性基本一致,結(jié)合藥效學(xué)研究,建議使用三七細(xì)粉口服,為三七散劑進(jìn)一步開發(fā)提供參考。
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1 不同粒度三七樣品含量測(cè)定的高效液相圖譜注：a. 三七皂苷 R1，b.人參皂苷 Rg1，c.人參皂苷 Rb1存率的影響劑量（10，20，40 mg/mL）三七粗粉、中粉、細(xì)粉和極急性暴露 48 h 后，各組線蟲生存率均有所降低，見圖比，粗粉 20，40 mg/mL 劑量組和中粉 20 mg/mL 劑量組P<0.05）；中粉 40 mg/mL 劑量組、細(xì)粉和極細(xì)粉各劑著下降（P<0.01）。各劑量細(xì)粉和極細(xì)粉組線蟲生存率存率相比，均顯著降低（P<0.05），但各劑量細(xì)粉和極相比較均無(wú)顯著性差異（P>0.05）。劑量（1，2，4 mg/mL）三七粗粉、中粉、細(xì)粉和極細(xì)暴露 8 d，各組線蟲生存率情況，如圖 2，B 所示。與

圖 2 不同粒度三七醇提物對(duì)線蟲生存率的影響注：A.急性暴露 48 h，B.長(zhǎng)期暴露慢性給藥 8 d與對(duì)照組相比，* P<0.05，** P<0.01，下同。的影響量（10，20，40 mg/mL）三七粗粉、中粉、細(xì)粉醇提8 h，各組線蟲運(yùn)動(dòng)情況，如圖 3，A 和 B 所示。與對(duì)照劑量下，僅三七細(xì)粉組線蟲身體彎曲頻率和頭部擺動(dòng)；20，40 mg/mL 劑量下，三七粗粉、中粉、細(xì)粉組下降（P<0.01），頭部擺動(dòng)頻率也下降（P<0.01）。量（1，2，4 mg/mL）三七粗粉、中粉、細(xì)粉醇提物d，各組線蟲頭部擺動(dòng)頻率如圖 3，C 所示。不同粒度

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本文編號(hào)：2722598