【摘要】：【目的】1.通過整理缺血性中風恢復期證素相關(guān)文獻,總結(jié)恢復期證素之間的關(guān)聯(lián),了解其病因病機的演變,并為后續(xù)實驗研究提供一定依據(jù)。2.觀察健脾補土組方對體外胎鼠原代皮層神經(jīng)細胞低氧損傷后凋亡及INT-FAK通路下游凋亡相關(guān)Bax、Bcl-2、MEK、Erk2表達的影響,探討健脾補土方對神經(jīng)細胞凋亡的干預機理�！痉椒ā�1.基于文獻研究對缺血性中風恢復期證素進行關(guān)聯(lián)分析:采用計算機檢索方法,檢索2007年~2017年中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫(CBM)、相關(guān)期刊論文(CNKI)、維普期刊資源整合服務平臺(VIP)中關(guān)于缺血性腦中風恢復期證素的相關(guān)文獻進行收集整理,應用SQL Server 2012MAddin數(shù)據(jù)挖掘軟件、采用Apriori算法對缺血性中風恢復期的證素進行關(guān)聯(lián)規(guī)則分析處理,總結(jié)缺血性腦中風恢復期常見證素及其之間的關(guān)聯(lián)。2.分離孕17d SD大鼠的胎鼠原代神經(jīng)元,接種于六孔板中培養(yǎng),并分為A正常血清對照組、B低氧損傷模型組、C低氧+神經(jīng)生長因子組、D低氧+健脾補土血清組、E低氧+健脾補土血清+FAK抑制劑組5組。采用培養(yǎng)箱低氧/復氧的方法誘導后四組標本神經(jīng)元凋亡形成腦缺血損傷模型,運用流式細胞術(shù)檢測神經(jīng)元凋亡情況,RT-q PCR法檢測Bax、Bcl-2、MEK、Erk2 mRNA的表達,Western blot和免疫細胞化學法檢測Bax、Bcl-2、MEK、Erk2蛋白的表達�！窘Y(jié)果】1.關(guān)聯(lián)分析結(jié)果:缺血性中風恢復期常見的病位證素主要有5個,分別為:腦、心、脾、腎、肝;病性證素主要有4個,分別為:氣虛、血瘀、痰濁、陰虛。(1)病位證素關(guān)聯(lián):腦與心的關(guān)聯(lián)性最高,其次依次為腦與腎、腦與脾、心與脾等。(2)病性證素關(guān)聯(lián):關(guān)聯(lián)性最高的是氣虛與血瘀,其次依次為血瘀與痰濁、氣虛+痰濁與血瘀、氣虛與痰濁、陰虛與血瘀。2.體外實驗:(1)神經(jīng)元凋亡率:與正常血清對照組比較,低氧損傷模型組凋亡率明顯增加,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);與低氧損傷模型組比較,低氧+神經(jīng)生長因子組和低氧+健脾補土血清組均顯著減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與低氧+神經(jīng)生長因子組比較,健脾補土組相對減少,差異無明顯統(tǒng)計學意義(P0.05);與低氧+健脾補土血清組比較,低氧+健脾補土血清+FAK抑制劑組神經(jīng)元凋亡率顯著增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)Bax、Bcl-2、MEK、Erk2 mRNA與蛋白表達情況:與正常血清對照組比較,低氧損傷模型組神經(jīng)元Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表達顯著升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表達明顯減少,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01);與低氧損傷模型組比較,低氧+神經(jīng)生長因子組和低氧+健脾補土血清組中神經(jīng)元Bcl-2 mRNA及蛋白表達顯著升高,Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表達明顯減少,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);與低氧+神經(jīng)生長因子組比較,健脾補土組神經(jīng)元Bcl-2 mRNA及蛋白表達稍升高,Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表達稍減少,差異無明顯統(tǒng)計學意義(P0.05);與低氧+健脾補土血清組比較,低氧+健脾補土血清+FAK抑制劑組神經(jīng)元Bax、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表達顯著升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表達明顯減少,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)�！窘Y(jié)論】1.通過整理缺血性中風恢復期的文獻,采用數(shù)據(jù)挖掘之關(guān)聯(lián)分析的方法,揭示缺血性中風恢復期的中醫(yī)證素分布具有一定的規(guī)律,其病位證素主要為腦、心、脾、腎,病性證素主要為氣虛、血瘀、痰濁、陰虛。各病位病性相互聯(lián)系,隨著疾病的演變,相互夾雜或轉(zhuǎn)化,其規(guī)律更清楚地展現(xiàn)了缺血性中風恢復期的證素特點及病機演變,并發(fā)現(xiàn)“腦”與“脾”強關(guān)聯(lián)及“氣虛”、“血瘀”、“痰濁”之間演變與“脾”功能相關(guān)的特點,從病因病機上為課題組健脾補土方治療缺血性中風提供了一定的理論及文獻支持。2.通過體外神經(jīng)元低氧/復氧損傷后凋亡模擬腦缺血性再灌注損傷模型,研究健脾補土方對神經(jīng)元凋亡以及特定基因FAK表達被阻斷情況下的Bax、Bcl-2、MEK、Erk2 mRNA及蛋白表達情況,探討健脾補土組方對體外神經(jīng)元凋亡的干預機理,其結(jié)論如下:A.健脾補土方能減少體外神經(jīng)元凋亡。B.其作用機制可能通過激活I(lǐng)NT-FAK通路,上調(diào)FAK的表達,通過Raf/MEK/ERK激酶信號途徑,發(fā)生進一步級聯(lián)反應,抑制凋亡相關(guān)MEK、Erk2、Bax表達,增加Bcl-2表達,從而達到抑制神經(jīng)元細胞凋亡,起到保護腦缺血損傷的作用。
【學位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R255.2;R285.5
【圖文】：

Raf/MEK/ERK信號通路

土方抗神經(jīng)細胞凋亡實驗研究進展組在既往探討健脾補土方對缺血性中風治療機制中發(fā)現(xiàn)的作用。李花等在探討健脾補土方對改善腦缺血再灌注大圖 8 健脾補土方方解示意圖

【參考文獻】

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本文編號：2722452