【摘要】：目的:基于水通道蛋白對院內制劑“清竅膠囊”治療分泌性中耳炎(SOM)小鼠模型機制的初步研究,試圖為清竅膠囊治療分泌性中耳炎提出新的理論依據,同時探討清竅膠囊對SOM小鼠模型外周血及中耳黏膜水通道蛋白(Aquaporin)AQP1,4,5表達水平的影響,部分詮釋清竅膠囊治療分泌性中耳炎的蛋白組學機制。方法:采用隨機、對照、前瞻性研究的方法,將80只健康、耳廓反射良好且無噪聲暴露史的小鼠隨機納入健康對照組10只,實驗組、空白對照組各35只。實驗組及空白對照小鼠統(tǒng)一采用卵清蛋白分別于第1、第8天行腹腔注射全身致敏,第15天卵清蛋白鼓室內注射耳內激發(fā),3天內觀察鼓室內出現(xiàn)液平面或液氣平面,顯示分泌性中耳炎小鼠模型制備成功,淘汰各組造模未成功及不合格的小鼠;實驗組予清竅膠囊藥末混懸液0.5ml(0.02mg/kg)灌胃,每日2次;空白對照組予等量生理鹽水灌胃;實驗組及空白對照組分別于d1、3、5、7、9隨機取2只小鼠,行心臟采血及快速斷頭刮取中耳黏膜,余各組小鼠于第10日予以心臟采血及快速斷頭刮取雙側中耳黏膜,以雙側中耳黏膜為一個實驗標本,并分組編號,血清予以常規(guī)高速離心取上清液,中耳黏膜予以強蛋白裂解液冰點充分裂解后高速離心取上清液,各組均采用ELLSA方法對各組小鼠外周血清及中耳黏膜裂解液中的水通道蛋白AQP1,4,5含量進行定量檢測并統(tǒng)計分析。統(tǒng)計學方法:采取SPSS 17.00統(tǒng)計軟件包分析數據,計量數據以(x±s)表示,組間比較采用兩獨立樣本t檢,以P0.05表示比較差異有統(tǒng)計學意義。結果:(1)實驗組SOM小鼠模型血清AQP1,5表達濃度明顯高于空白對照組(P0.01),差異具有統(tǒng)計學意義,而AQP4表達濃度較空白對照組顯著降低(P0.05);(2)實驗組小鼠模型中耳黏膜裂解液中AQP1,5表達濃度較空白對照組明顯升高(P0.01),AQP4表達濃度與空白對照組相比略微降低,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)實驗組中SOM小鼠血清AQP1,5及中耳黏膜AQP1,4的隨時間的表達濃度顯著高于空白對照組,而中耳黏膜中AQP5隨時間的表達水平明顯低于空白對照,并且血清中AQP4隨時間的表達水平則與空白對照組相比無顯著差距。結論:(1)清竅膠囊能明顯提高SOM小鼠血清中AQP1,5的表達量,提高小鼠中耳黏膜中AQP1,5的表達水平,加快SOM小鼠血清中AQP1,5及黏膜中AQP1,4的表達,但對中耳黏膜AQP4及血清中AQP4的表達水平的提高作用有限,對中耳黏膜中AQP4無明顯干預。(2)顯示清竅膠囊可能通過提高SOM小鼠模型血清和中耳黏膜中水通道蛋白AQP1,5的表達水平,從而干預分泌性中耳炎(SOM)中耳黏膜水液的輸布,提高中耳黏膜AQP1,4對水液的轉運效率,調節(jié)中耳黏膜水平衡,從而促進中耳積液的清除,其對縮短SOM的病程及改善分泌性中耳炎的轉歸有著積極明顯的作用。(3)清竅膠囊對小鼠中耳黏膜及外周血水通道蛋白AQP4的調節(jié)效果有限,且可能下調AQP5的表達,預示著中耳黏膜及血清當中的AQP1,4,5之間可能存在著協(xié)調表達,各亞型之間可能存在表達、分布的相互平衡,但具體清竅膠囊如何干預AQP1,4,5的表達,各水通道蛋白如何協(xié)調表達及之間的信號通路尚需更深一步的研究。
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5;R-332

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