【摘要】：目的:中藥決明子,為豆科植物決明Cassia obtusifolia L.或小決明Cassia tora L.的干燥、成熟的種子。具有名目、保肝、通便等功效�，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),決明子具有降血壓、降血脂、抗衰老、抗氧化以及免疫和抗腫瘤等作用。其在全國(guó)各地及海外均有廣泛種植,但是由于各地栽培環(huán)境的不同,加工運(yùn)輸?shù)炔町?導(dǎo)致了該藥材的質(zhì)量存在一定的差異�！吨袊�(guó)藥典》(2015年版)規(guī)定將其中所含的蒽醌類(lèi)成分橙黃決明素和大黃酚的含量測(cè)定作為決明子藥材的質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)。但是由于其藥理作用廣泛,主要的藥效成分較多,僅憑兩個(gè)成分的含量測(cè)定作為其質(zhì)量控制的指標(biāo)不能完全反應(yīng)其質(zhì)量。因此需要對(duì)其質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)繼續(xù)進(jìn)行補(bǔ)充和完善。本實(shí)驗(yàn)建立決明子超高效液相色譜指紋圖譜、五種蒽醌類(lèi)成分的含量測(cè)定方法并結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)來(lái)對(duì)決明子中所含的化學(xué)成分進(jìn)行分析,對(duì)現(xiàn)有的決明子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行補(bǔ)充,并采用斑馬魚(yú)的高脂血癥模型,以斑馬魚(yú)尾部血脂染色強(qiáng)度作為定量指標(biāo),初步評(píng)價(jià)不同批次間決明子藥材的藥理活性,為中藥質(zhì)量控制體系進(jìn)行補(bǔ)充和完善。中藥鉤藤,為茜草科植物鉤藤Uncariarhynchophylla(Miq.)Miq.ex Havil、大葉鉤藤Uncariamacrophylla Wall、毛鉤藤Uncariahirsute Havil、華鉤藤Uncariasinensis(Oliv)Havil.或無(wú)柄果鉤藤Uncaria sessilifiuctus Roxb.的干燥帶鉤莖枝。目前,市場(chǎng)上的鉤藤藥材品種較為復(fù)雜,而不同品種間的鉤藤藥材的化學(xué)成分、藥理作用也存在差異。《中國(guó)藥典》(2015年版)尚未收載鉤藤含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn),只有定性鑒別,嚴(yán)重影響鉤藤藥材的質(zhì)量控制及其應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)收集鉤藤品種和大葉鉤藤品種的鉤藤藥材,在同一色譜條件下建立其UPLC指紋圖譜,并測(cè)定大葉鉤藤中具有顯著藥理活性的鉤藤堿與異鉤藤堿的含量,為完善鉤藤和大葉鉤藤兩個(gè)品種藥材的區(qū)分和質(zhì)量控制提供參考。方法:(1)收集28批不同產(chǎn)地的決明子藥材,采用UPLC法結(jié)合聚類(lèi)分析、主成分分析以及相似度評(píng)價(jià)三種分析方法建立了中藥決明子的指紋圖譜。(2)采用UPLC法同時(shí)測(cè)定28批決明子藥材中大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、橙黃決明素、黃決明素五種蒽醌類(lèi)成分含量,為其現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供參考。(3)采用LC-MS對(duì)決明子藥材中所含的化學(xué)成分進(jìn)行分析,為決明子藥材的質(zhì)量控制以及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供參考。(4)采用斑馬魚(yú)的高脂血癥模型,將斑馬魚(yú)尾部血脂染色強(qiáng)度作為實(shí)驗(yàn)的定量分析指標(biāo),初步評(píng)價(jià)不同批次決明子藥材的藥理活性,為其質(zhì)量控制的補(bǔ)充提供參考。(5)收集不同產(chǎn)地的12批鉤藤藥材和10批大葉鉤藤藥材,采用UPLC法建立鉤藤和大葉鉤藤的指紋圖譜,為上述兩個(gè)品種鉤藤藥材的區(qū)分和質(zhì)量控制提供參考。(6)采用UPLC法測(cè)定10批大葉鉤藤中鉤藤堿和異鉤藤堿的含量,為大葉鉤藤的質(zhì)量控制進(jìn)行補(bǔ)充。(7)根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果,初步制定決明子和鉤藤藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)增訂草案。結(jié)果:(1)運(yùn)用UPLC的方法,建立28批不同產(chǎn)地間的決明子藥材的UPLC指紋圖譜,共計(jì)匹配出40個(gè)共有峰,通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品的比對(duì),指認(rèn)出10種成分,28批藥材的相似度較高,其相似度的范圍在0.827～0.990之間,總體來(lái)看,中藥決明子的質(zhì)量是較為穩(wěn)定的。通過(guò)聚類(lèi)分析、主成分分析得出中藥決明子雖廣泛種植于全國(guó)各地,但是海南與山東所產(chǎn)的品質(zhì)較好,可能與當(dāng)?shù)氐臍夂驐l件相關(guān)。(2)采用UPLC的方法,對(duì)決明子藥材中的五種蒽醌類(lèi)成分大黃素、大黃酚、橙黃決明素、黃決明素、大黃素甲醚進(jìn)行了含量測(cè)定,結(jié)果表明,橙黃決明素和大黃酚的含量均符合藥典規(guī)定,黃決明素含量在0.1809～1.1311 mg·g-1,大黃素含量在0.1952～0.8940 mg·g-1,大黃素甲醚含量在0.1917～0.8752mg·g-1。并進(jìn)行方法學(xué)考察,表明本實(shí)驗(yàn)所用儀器精密度良好,樣品的穩(wěn)定性和重復(fù)性以及加樣回收率均可符合藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn),為《中國(guó)藥典》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步完善提供參考。(3)采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)來(lái)推測(cè)決明子中所含有的化學(xué)成分,在正離子和負(fù)離子模式下,對(duì)實(shí)驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,并推斷出39個(gè)決明子中可能含有的化合物。結(jié)果表明,決明子中所含的蒽醌類(lèi)成分以游離型蒽醌和結(jié)合型蒽醌苷類(lèi)的形式存在,蒽醌苷類(lèi)成分由于其與糖連接的位置以及糖基種類(lèi)的不同而呈現(xiàn)出多樣化。同時(shí),萘并吡喃酮類(lèi)化合物在決明子中大量存在,種類(lèi)繁多,其藥理活性有待進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)和利用。本方法可以快速的推斷決明子藥材中所含有的化學(xué)成分。同時(shí),也可為決明子藥材的質(zhì)量控制提供一定的參考。(4)采用斑馬魚(yú)的高脂血癥模型來(lái)驗(yàn)證決明子藥材對(duì)于高脂血癥的防治作用,并對(duì)不同批次藥材的活性進(jìn)行分析,結(jié)果表明,在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi),決明子藥材的藥理活性隨著給藥濃度的增大而增強(qiáng),不同批次的決明子藥材總提物均能對(duì)斑馬魚(yú)幼魚(yú)的脂肪吸收產(chǎn)生不同程度的抑制作用。其中指紋圖譜中相似度較低的藥材S27在藥效作用的發(fā)揮上弱于S25和S26,相似度評(píng)價(jià)較高的藥材在藥效作用的發(fā)揮上更加明顯。(5)在同一色譜條件下建立12批鉤藤品種藥材和10批大葉鉤藤品種藥材的UPLC指紋圖譜。經(jīng)相似度評(píng)價(jià)軟件進(jìn)行分析,12批鉤藤品種藥材的UPLC指紋圖譜共計(jì)匹配出22個(gè)共有峰,12批鉤藤品種藥材中,11批的相似度均大于0.9,僅一批低于0.9,為0.737,10批大葉鉤藤共匹配出12個(gè)共有峰,其相似度均在0.9以上。而通過(guò)對(duì)比鉤藤和大葉鉤藤的兩個(gè)品種的對(duì)照指紋圖譜,發(fā)現(xiàn)其所含化學(xué)成分差異較大、而其中有效成分鉤藤堿、異鉤藤堿的含量亦有較大差異。大葉鉤藤中鉤藤堿和異鉤藤堿的含量較高,因此,本實(shí)驗(yàn)所建立的方法可以用于對(duì)鉤藤和大葉鉤藤兩個(gè)不同品種間的藥材進(jìn)行區(qū)分,同時(shí)也可用于兩個(gè)品種的質(zhì)量控制。(6)運(yùn)用UPLC的方法,測(cè)定大葉鉤藤藥材中的鉤藤堿和異鉤藤堿的含量,其中,鉤藤堿的含量范圍在0.2214～0.6469 mg·g-1,而異鉤藤堿的含量范圍在0.0424～0.1309 mg·g-1。二者總和的含量范圍在0.2657～0.7559 mg·g-1。通過(guò)對(duì)其進(jìn)行方法學(xué)考察,表明本實(shí)驗(yàn)精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性以及加樣回收率實(shí)驗(yàn)均可達(dá)到《中國(guó)藥典》所規(guī)定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),因此,本方法結(jié)合前期指紋圖譜的相關(guān)實(shí)驗(yàn),可為大葉鉤藤藥材的質(zhì)量控制提供參考。(7)以上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果為依據(jù),對(duì)中藥決明在現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加指紋圖譜和3個(gè)成分的含量測(cè)定項(xiàng);對(duì)大葉鉤藤增加指紋圖譜和2個(gè)成分的含量測(cè)定項(xiàng);對(duì)鉤藤增加指紋圖譜,初步制定中藥決明子和鉤藤的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)增訂草案。結(jié)論:運(yùn)用UPLC建立中藥決明子的指紋圖譜并對(duì)其中的五種蒽醌類(lèi)化學(xué)成分進(jìn)行了含量測(cè)定,同時(shí)結(jié)合LC-MS技術(shù)對(duì)決明子中的所含的化學(xué)成分進(jìn)行分析,有利于決明子的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用,實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證斑馬魚(yú)的高脂血癥模型,并初步評(píng)價(jià)不同批次間的決明子藥材的藥理活性,為中藥決明子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供了新的思路和方法。本文建立鉤藤藥材中鉤藤和大葉鉤藤的UPLC指紋圖譜,并對(duì)大葉鉤藤中的鉤藤堿和異鉤藤堿進(jìn)行了含量測(cè)定,為這兩個(gè)品種的鉤藤藥材的區(qū)分和質(zhì)量控制的完善提供參考。
【圖文】：

１逡逑．邋））））））＾逡逑２６｛２５｛２４（ｇ２２｛２１（２０（１９（１６（１？（１４（１３（１２（１１（１０（９（１６（１（１（１３（１２（ｔ１（１邐，ｓ邋ｉ逡逑２２２２２２２１１１１１１９＾５：１逡逑

模式圖的生成方式，運(yùn)用多點(diǎn)校正的方法手動(dòng)調(diào)節(jié)了第１４號(hào)共有峰，并對(duì)２８批樣品的逡逑色譜峰進(jìn)行了全譜峰的匹配，建立了中藥決明子指紋圖譜共有模式，得到４０個(gè)共有峰，逡逑結(jié)果見(jiàn)圖２－１、圖２－２。逡逑通過(guò)與對(duì)照品進(jìn)行比對(duì)，初步可以確認(rèn)樣品中的１０個(gè)化合物，分別為決明子苷Ｂ２，逡逑決明子苷（：２，紅鏈霉素－６－０－Ｐ－龍膽二糖苷，決明子苷Ｃ，橙黃決明素，大黃酸，黃決明逡逑素，，大黃素，大黃酚，大黃素甲醚，結(jié)果見(jiàn)圖２－３。逡逑４４逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R284.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳偉明;李志峰;歐陽(yáng)輝;許燕;何明珍;陳杰;馮育林;楊世林;;鉤藤化學(xué)成分分析[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2015年18期

2 駱宜;張樂(lè);王衛(wèi)華;劉斌;;高效液相色譜-離子阱-飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定決明子化學(xué)成分[J];藥物分析雜志;2015年08期

3 畢月;隋佳琪;喬瑞紅;謝明杰;;大黃素對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的抑菌作用機(jī)制研究[J];中國(guó)生化藥物雜志;2015年08期

4 黃華;李宇聲;金鑫;汪江濤;李娜;黃幀檜;丁伯平;;鉤藤堿對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心室重構(gòu)過(guò)程中TGF-β_1/Smad通路的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2015年08期

5 王淑紅;楊春娟;劉璐;孫佳慧;吳立軍;;HPLC測(cè)定決明子中6種游離蒽醌含量[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年01期

6 何永志;嚴(yán)治學(xué);Ernestina Amponsem;任曉亮;常艷旭;;HPLC-UV法測(cè)定草決明中五種蒽醌類(lèi)化合物含量及其指紋圖譜的建立[J];河北醫(yī)學(xué);2014年12期

7 吳宿慧;劉亞敏;李寒冰;李根林;;基于自由基學(xué)說(shuō)研究決明子水煎液對(duì)小鼠靜止代謝率和抗氧化活性的影響[J];中成藥;2015年06期

8 杜睿;翁朝澤;高璐璐;傅圣斌;劉利萍;;決明子的HPLC指紋圖譜及3種游離蒽醌含量的同步測(cè)定[J];藥物生物技術(shù);2014年05期

9 盧金清;黎強(qiáng);李肖爽;戴藝;梁歡;;決明子研究進(jìn)展[J];湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年04期

10 王樂(lè)奇;劉春明;任浚萁;張語(yǔ)遲;;鉤藤化學(xué)成分的高效液相色譜-電噴霧質(zhì)譜研究[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2014年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 吳曉輝;決明子的化學(xué)成分、質(zhì)量控制以及體內(nèi)代謝研究[D];華中科技大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 呂浩然;決明子調(diào)脂減肥的活性成分研究[D];華南理工大學(xué);2012年

2 張葉;決明子的質(zhì)量控制及在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

3 蘇會(huì)娟;決明子大極性成分和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2011年

4 于海林;決明子藥理活性及餓螞蝗保肝活性研究[D];河南大學(xué);2011年

5 段少卿;鉤藤化學(xué)成分及抗氧化活性研究[D];廣西師范大學(xué);2010年

6 謝達(dá)溫;決明子品質(zhì)評(píng)價(jià)、種子檢驗(yàn)規(guī)程及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2693483