【摘要】：海帶是一種盛產(chǎn)在低溫海水中的大型海生褐藻類植物,呈扁平帶狀,最長可達(dá)到20 m左右,因其多產(chǎn)及獨(dú)特的口感已經(jīng)被廣泛用于烹飪食材。海帶多糖也稱昆布多糖,前人的研究表明海帶多糖LJP61A能夠通過減緩主動(dòng)脈血管鈣化從而干預(yù)腎衰竭的進(jìn)程。本文主要以阿霉素誘導(dǎo)的腎損傷模型為出發(fā)點(diǎn),探討海帶多糖LJP61A對(duì)小鼠急性腎損傷的干預(yù)效果,并在體外實(shí)驗(yàn)研究LJP61A對(duì)足細(xì)胞損傷形成的干預(yù)機(jī)制,現(xiàn)取得的研究結(jié)果如下:(1)海帶多糖LJP61A對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的Balb/c小鼠腎損傷的干預(yù)研究:通過檢測(cè)小鼠的體重、腎臟病理切片觀察及血清各項(xiàng)生化指標(biāo),探究海帶多糖是否干預(yù)了腎損傷疾病進(jìn)程。組織切片病理學(xué)結(jié)果顯示LJP61A對(duì)腎小球損傷和腎臟纖維化有一定的保護(hù)作用,且呈現(xiàn)量效關(guān)系。血清的生化檢測(cè)結(jié)果顯示LJP61A能降低總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)水平,并且改善Ca2+、Mg2+、P3+等電解質(zhì)及蛋白質(zhì)的代謝紊亂狀態(tài),說明LJP61A能顯著延緩阿霉素誘導(dǎo)的腎損傷疾病的發(fā)展進(jìn)程。進(jìn)一步利用HE、Masson、PAS染色顯示LJP61A能夠顯著保護(hù)腎小球結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定,減少炎性細(xì)胞浸潤造成的損害,減緩腎小球足突融合,并通過Nephrin免疫組織化學(xué)分析,表明LJP61A能夠穩(wěn)定阿霉素對(duì)腎小球上皮細(xì)胞足突的毒性作用,保護(hù)腎小球過濾功能;qReal Time-PCR和Western blotting結(jié)果表明,LJP61A能顯著降低炎性因子IL-1β、TNF-α的基因表達(dá),抑制促炎蛋白MCP-1的蛋白表達(dá),并且顯著降低腎小球硬化信號(hào)通路相關(guān)蛋白TGF-β1/Smads的表達(dá)。以上結(jié)果顯示LJP61A對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的腎損傷有明顯的干預(yù)作用。(2)探究LJP61A對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的腎小球上皮細(xì)胞損傷的干預(yù)機(jī)制:采用TGF-β1誘導(dǎo)腎小球上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化模型,設(shè)置不同濃度組分觀察LJP61A對(duì)腎小球上皮細(xì)胞生長狀態(tài)影響,結(jié)果顯示當(dāng)LJP61A在濃度為5~25μg/m L時(shí)對(duì)細(xì)胞的生長有促進(jìn)作用。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察LJP61A能夠顯著緩解腎小球上皮細(xì)胞足突的損傷,維持細(xì)胞功能的完整。通過Western blotting結(jié)果找出16 h時(shí)為TGF-β1誘導(dǎo)Nephrin表達(dá)最低點(diǎn),qRT-PCR結(jié)果表明,LJP61A通過Smad3/p38途徑調(diào)節(jié)Nephrin及抑制纖維化蛋白α-SMA的表達(dá)從而阻斷腎小球上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為間充質(zhì)細(xì)胞。
【圖文】：

后使用截留 3500Da 分子量的透析袋流水透析 48h，再空冷凍干燥器后得到海帶粗多糖（LJP6）。的分離純化海帶粗多糖（LJP6）150mg 并加超純水 10ml 輕輕搖晃 8000 rpm，去除雜質(zhì)，將上清加入到 DEAE-CellμLose吸附分離，用超純水洗脫，，用自動(dòng)部分收集器收集不酚-硫酸比色法[62]進(jìn)行跟蹤多糖分布及吸光值測(cè)定，后透析后冷凍干燥處理最終得到海帶水洗糖(LJP61)。譜柱（1.0 × 80 cm）對(duì)其純化，超純水作為洗脫液，數(shù) 2 mL/10min 進(jìn)行收集，跟蹤檢測(cè)多糖分布及含量，將縮后透析、冷凍干燥處理得到純化的均一組分多糖 L根據(jù)出峰時(shí)間及峰值數(shù)量確定 LJP61A 的均一性。LJ具體化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖 2.1 所示。

圖 2. 7 實(shí)驗(yàn)小鼠腎臟組織的總體形態(tài)學(xué)觀察Fig 2.7 General morphological character of the kidneys of the treated mouses注：A：Control；B：Model；C：ADR+LJP61A50；D：ADR+LJP61A100；E：ADR+LJP61A200F：LJP61A50；G：LJP61A100；H：LJP61A2002.4.7 各劑量 LJP61A 對(duì)小鼠臟器的影響臟器指數(shù)可在一定程度上反映出阿霉素腎損傷小鼠與正常小鼠的臟器之間的差異，因此對(duì)于檢測(cè)臟器損傷程度具有一定的指導(dǎo)意義。肝、腎組織是藥物在血液里代謝的主要場(chǎng)所，在阿霉素尾靜脈注射后，其造成的損傷不僅限于腎臟組織，對(duì)肝組織也表現(xiàn)出一定的病變。圖 2.8A 顯示阿霉素誘導(dǎo)腎損傷能夠造成腎臟明顯的病理萎縮（P<0.01），而各劑量的 LJP61A 能夠減緩這種損傷，并隨著劑量的升高而加強(qiáng)（P<0.05 或 P<0.01）。而圖 2.8B 顯示阿霉素也會(huì)造成肝臟的腫脹，且對(duì)比正常組小鼠肝臟有顯著差異（P<0.01），LJP61A 能夠降低肝臟腫脹的程度從而保護(hù)肝臟（P<0.05 或 P<0.01）。提示海帶多糖 LJP61A 能夠緩解阿霉素所致肝、腎
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

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2 李

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