【摘要】：目的:利用高糖及H202建立應(yīng)激高糖H9c2心肌細(xì)胞模型,探討應(yīng)激性高糖對H9c2心肌細(xì)胞線粒體動力學(xué)相關(guān)蛋白表達(dá)、線粒體膜電位水平及細(xì)胞凋亡的影響,以及紅景天苷對應(yīng)激性高糖H9c2心肌細(xì)胞的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法:將正常培養(yǎng)的H9c2細(xì)胞隨機(jī)分為5組:①對照組(C組):用含5.5mmol/L葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h;②高糖組(G組):用含33.3mmol/L葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h;③H202組(H組):用含100 μ mol/1 H202的低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)2h后,換成低糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)22h;④高糖+H202組(G+H組):用含100 μ mol/1 H202的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)2h后,換成高糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)22h;⑤紅景天苷+高糖+H202組(S+G+H組):用含100 μ mol/lH202+0.4mg/ml紅景天苷的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)2h后,換成含0.4mg/ml紅景天苷的高糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)22h。CCK-8法測定細(xì)胞活力,確定H202的作用濃度以及紅景天苷的最適實(shí)驗(yàn)濃度及作用時間。心肌細(xì)胞分組培養(yǎng)后,利用流式細(xì)胞技術(shù)分析各組H9c2心肌細(xì)胞的凋亡率、Western blot分別檢測線粒體動力學(xué)相關(guān)蛋白Drp1、OPA1的表達(dá)水平、JC-1熒光染色法檢測各組心肌細(xì)胞的線粒體膜電位水平。結(jié)果:1.與C組比較,G組H9c2細(xì)胞Drp1蛋白表達(dá)水平明顯升高(P0.01);OPA1蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.01);線粒體膜電位下降(P0.05);細(xì)胞凋亡率升高(P0.05);與C組比較,H組及G+H組H9c2細(xì)胞Drp1蛋白表達(dá)水平明顯升高(P0.01);OPA1蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.01);線粒體膜電位明顯下降(P0.01);細(xì)胞凋亡率升高(P0.01)。2.與G+H組比較,S+G+H組Drp1蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.01);OPA1蛋白表達(dá)水平明顯升高(P0.01);線粒體膜電位升高(P0.01);細(xì)胞凋亡率降低(P0.01)。結(jié)論:1.應(yīng)激性高糖通過抑制H9c2心肌細(xì)胞線粒體動力學(xué)平衡,降低線粒體膜電位,增加心肌細(xì)胞凋亡,從而損傷心肌細(xì)胞。2.紅景天苷可抑制應(yīng)激性高糖引起的H9c2心肌細(xì)胞凋亡,其機(jī)制與增加線粒體OPA1蛋白表達(dá)、抑制Drp1蛋白表達(dá)從而改善線粒體動力學(xué)平衡,以及升高線粒體膜電位水平有關(guān),對應(yīng)激性高糖心肌細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。
【圖文】：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，０？４００ｕｍｏｌ／Ｌ邋Ｈ２０２作用于Ｈ９ｃ２細(xì)胞２ｈ后，細(xì)胞生存率隨著Ｈ２0２濃逡逑度升高降低，每組與對照組相比，均有明顯差異（Ｐ＜０．０１），處于ｌ00ｕｍｄ／Ｌ時，，細(xì)胞活逡逑力下降４９％左右，選用１００ｕｍｏｌ／Ｌ作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的濃度。（見圖２－１、表２－１）逡逑邐表２－１不同濃度Ｈ２０２對Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞活力的影響邐逡逑Ｈ２０２邋濃度（ｔｉｍｏｌ／Ｌ）邐ｎ邐存活率邐逡逑０邐６邐１００％逡逑５０邐６邐８０．９６±２．１１％＊＊逡逑１００邐６邐４９．２２±１．４２％＊＊逡逑２００邐６邐３５．６７±０．５６％＊＊逡逑４００邐６邐３丨．０５±１．７５％＊＊逡逑注：與對照組組間比較，＊＊戶＜０．０１逡逑一邋１５0ｉ逡逑２逡逑芒逡逑８逡逑＾邋ｌｏｏ－逡逑１５Ｊ邋＿邋．逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋５０邐１００邐２００邐４００逡逑Ｈ２０２濃度（ｕｍｏｌ／Ｌ）逡逑圖２－１不同Ｈ２０２濃度對Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞活力的影響逡逑注：與對照組組間相比，＊＊戶＜0．0１逡逑３．２紅景天苷不同濃度及作用時間對Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞活力的影響逡逑實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，０、０．１、０．２、０．４、０．８濃度的紅景天苷對高糖及Ｈ２０２邋（１００ｕｍｏｌ／Ｌ）逡逑環(huán)境的心肌細(xì)胞作用２４ｈ，顯示紅景天苷在０．４ｍｇ／ｍｌ，心肌細(xì)胞活力最高，與其余各組相逡逑比，具有顯著差異（Ｐ＜０．０１），選用此濃度作為最適合作用濃度；選用０．４ｍｇ／ｍｌ紅景天苷逡逑對高糖及Ｈ２０２邋（１００ｕｍｏｌ／Ｌ，２ｈ）環(huán)境的Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞分別作用１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ，結(jié)果顯逡逑示

ｒｍＭｍ逡逑０邐０．１邐０．２邐０．４邐０．８逡逑圖２－２不同紅景天苷濃度對應(yīng)激高糖Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞活力的影響逡逑注：與其余各組組間相比，＊＊Ｐ＜０．０１逡逑0４１逡逑Ｌ．邋｛逡逑芒邐＊逡逑８邋３－邐丁邐－Ｉ－逡逑名邐ＳＳＳ５５５邋｜邐｜逡逑°０邐微微逡逑Ｉ２■~枺遅 逡逑＾邐＾邐■逡逑Ｓ邐一逡逑ｕ邋0邐ＲＳＳＳＳｇｇａｉ逡逑１２ｈ邐２４ｈ邐４８邋ｈ逡逑圖２－３紅景天苷（０．４ｍｇ／ｍｌ）作用不同時間對Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞活力的影響逡逑注：與１２ｈ組間相比，＊Ｐ＜０．０５逡逑３．３紅景天苷對應(yīng)激性高糖Ｈ９ｃ２心肌細(xì)胞凋亡的影響逡逑流式細(xì)胞儀分析各組心肌細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示：與對照組相比，高糖組心肌細(xì)胞凋亡率逡逑明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（尸＜０．０５）；與對照組相比，Ｈ２０２組、高糖＋Ｈ２０２組心肌逡逑細(xì)胞凋亡率明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０１）；與高糖＋Ｈ２0２組相比，紅景天苷＋逡逑高糖＋Ｈ２０２組心肌細(xì)胞凋亡率明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（戶＜０．０１）（見表２－２
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2683226