【摘要】：冬蟲夏草(Ophiocordyceps sinensis(Berk.)Sacc)是冬蟲夏草菌寄生在鱗翅目蝙蝠蛾科幼蟲或幼蟲尸體形成的干燥復(fù)合體,主要分布于青藏高原地區(qū),海拔高度2800米以上的高寒草甸和灌木地帶為冬蟲夏草的集中分布區(qū)域,具有調(diào)節(jié)免疫、降血脂、抗腫瘤、抗菌、抗疲勞等多種效用。目前市場上冬蟲夏草混淆品較多,且多為蟲草屬近緣種,其性狀與化學(xué)成分(腺苷、核苷等)與正品冬蟲夏草相似度高,現(xiàn)有中國藥典方法難以進行有效的鑒別,嚴重影響了臨床用藥的安全。有必要篩選冬蟲夏草中的特異性成分作為質(zhì)量標志物,制定更科學(xué)、合理的冬蟲夏草的質(zhì)量標準。本文通過制備色譜的方法分離提取出了冬蟲夏草中的特異性成分T2和T5。通過方法學(xué)考察,T2、T5的制備方法簡便、易行,能夠有效的純化、富集T2、T5。考察了T2、T5的穩(wěn)定性,T2容易受到溫度和空氣的影響發(fā)生部分降解,在90℃的時候,降解產(chǎn)物為T4,70和50℃的時候降解產(chǎn)物為T3、T4,低溫干燥時不發(fā)生降解;與空氣接觸會促進T2的降解反應(yīng)。T5比較穩(wěn)定,不會發(fā)生降解反應(yīng)。確定了T2和T5的最佳干燥方法為冷凍干燥。運用UPLC-Q-TOF/MS的方法對T2、T5的化學(xué)結(jié)構(gòu)進行了初步的研究,結(jié)果顯示T2、T5很有可能是一種小分子的多肽。使用LC-MS/MS測序并驗證,結(jié)果表明T2、T5就是小分子的多肽。具體方法如下:在正離子模式下,挑選一級質(zhì)譜中強度排名前二十的碎片做二級質(zhì)譜,所得的碎片信息使用MASCOT軟件檢索并與NCBI數(shù)據(jù)庫進行比對,得到所有來源于冬蟲夏草及其同屬的蛋白、肽段序列的陽性結(jié)果。測序結(jié)果中排名最高的四個肽段序列,其中T2得分最高的兩個肽段SVTDPFHPGGPGLIR、IILLILK來源于冬蟲夏草,T5中ETGNLLR肽段來源于冬蟲夏草,LLLALVK來源于冬蟲夏草同屬Ophiocordyceps unilateralis。課題組下一步的工作是從測序結(jié)果中篩選出得分最高的幾個肽段SVTDPFHPGGPGLIR、IILLILK、ETGNLLR、LLLALVK,用色譜和質(zhì)譜進行比對和驗證,確定T2和T5的結(jié)構(gòu),最終建立基于T5的冬蟲夏草質(zhì)量控制的新方法,并對T2、T5的活性進行研究,以期對冬蟲夏草的質(zhì)量控制和功效說明作出貢獻。
【圖文】：

圖 1-1 冬蟲夏草 T2 特異性圖譜Fig1-1 The specificity of the T2 spectrum（注：S1 為蛹蟲草，S2 為涼山蟲草，，S3 為古尼蟲草，S4 為冬蟲夏草）材料與試劑1 實驗材料

圖1-3不同流動相的考察Fig 1-3 Different mobile phase(a. 乙腈-水溶液 b. 乙腈-0.1%甲酸水溶液 c. 甲醇-水)) 檢測波長的考察
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1

【參考文獻】

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本文編號：2663108