發(fā)布時(shí)間：2020-05-01 13:02

【摘要】：目的:本研究以bEnd.3細(xì)胞建立氧糖剝奪模型模擬椎-基底動(dòng)脈缺血乏氧狀態(tài),初步探討血定眩膠囊含藥血清對(duì)缺血乏氧環(huán)境對(duì)bEnd.3細(xì)胞自噬和相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,為活血定眩膠囊的臨床應(yīng)用及進(jìn)一步推廣提供科學(xué)依據(jù),最終在細(xì)胞及蛋白水平上為中醫(yī)藥防治椎動(dòng)脈型頸椎病提供研究思路。方法:制備活血定眩膠囊含藥血清;培養(yǎng)bEnd.3細(xì)胞并傳代,將傳至3代的bEnd.3細(xì)胞建立OGD模型,并設(shè)置分組:空白組,OGD模型組,活血定眩膠囊含藥血清高、中、低劑量組(15%、10%、5%),西藥組,按照相應(yīng)條件進(jìn)行給藥并干預(yù)6h。在顯微鏡下觀察正常細(xì)胞形態(tài);采用單丹磺酰尸胺染色觀察bEnd.3細(xì)胞自噬小體;硝酸根還原酶法檢測(cè)一氧化氮含量;微量酶標(biāo)法檢測(cè)乳酸脫氫酶釋放量;采用Western blot技術(shù)檢測(cè)bEnd.3細(xì)胞p62、Bcline-1、LC3蛋白的表達(dá)水平;觀察活血定眩膠囊含藥血清對(duì)bEnd.3細(xì)胞自噬及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:1對(duì)P1代bEnd.3細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇,于第二天時(shí)可見(jiàn)其貼壁生長(zhǎng),呈長(zhǎng)條形或梭形或多邊形,胞漿豐富,形態(tài)飽滿。在適宜的條件下第三天時(shí)細(xì)胞增殖分裂加快,長(zhǎng)滿瓶底,呈鋪路石樣。2單丹磺酰尸胺染色在熒光顯微鏡下觀察自噬小體,表現(xiàn)為大小不一、形狀不等、致密濃染的熒光顆粒。3活血定眩膠囊含藥血清對(duì)bEnd.3細(xì)胞中NO含量的影響:與空白組相比,OGD模型組由于乏氧饑餓,細(xì)胞活性減低,細(xì)胞受損,NO分泌減少,兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與模型組相比,活血定眩膠囊含藥血清組及西藥組NO的含量較高,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);活血定眩膠囊含藥血清中劑量組與西藥組之間無(wú)明顯差異,兩組療效相當(dāng),且含藥血清中劑量組高于活血定眩膠囊含藥血清高劑量、低劑量組;4活血定眩膠囊含藥血清對(duì)bEnd.3細(xì)胞中LDH釋放量的影響:與空白組相比,模型組LDH釋放量明顯增多,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);與模型組相比,活血定眩膠囊含藥血清高、中、低劑量組與西藥組LDH釋放量較低,且與模型組相比,活血定眩膠囊含藥血清組高、低劑量組與西藥組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);5活血定眩膠囊含藥血清對(duì)自噬相關(guān)蛋白Bcline-1、LC3、p62的影響:與空白組比較,OGD模型組p62、Becline-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達(dá)水平均升高,Becline-1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表達(dá)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),p62蛋白表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P0.05);與模型組相比,活血定眩含藥血清中劑量組和西藥組p62表達(dá)明顯下降,Becline-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達(dá)明顯升高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),p62蛋白表達(dá)中活血定眩膠囊含藥血清中劑量組與西藥組見(jiàn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且p62與Becline-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ兩組之間表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:1活血定眩膠囊可明顯改善乏氧饑餓條件對(duì)bEnd.3細(xì)胞造成的損傷,增加NO的分泌量并且抑制LDH的釋放量,改善血管內(nèi)皮細(xì)胞活性;2活血定眩膠囊含藥血清通過(guò)影響p62、Bcline-1、LC3相關(guān)自噬蛋白的表達(dá)水平從而調(diào)控乏氧饑餓環(huán)境下bEnd.3細(xì)胞自噬,進(jìn)一步改善血流,調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能,促進(jìn)血管新生,為活血定眩膠囊防治CSA提供新思路。
【圖文】：

活血定眩膠囊含藥血清對(duì) OGD 環(huán)境下 bEnd.3 細(xì)胞自噬及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用 SPSS22.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，其中正態(tài)分布或接近正態(tài)分布的均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ X±S）表示。組間比較用 t 檢驗(yàn)，多組之間比較采用單因素方差分析，P＜0.05即有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 bEnd.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)結(jié)果對(duì) P1 代 bEnd.3 細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇，于第二天時(shí)可見(jiàn)其貼壁生長(zhǎng)，，呈長(zhǎng)條形或梭形或多邊形，胞漿豐富，形態(tài)飽滿。在適宜的條件下第三天時(shí)細(xì)胞增殖分裂加快，長(zhǎng)滿瓶底，呈鋪路石樣。如圖 1 所示：

MDC染色
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2646675