【摘要】：目的:胡桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)又名山核桃、核桃楸,為胡桃科胡桃屬植物。在民間,采用胡桃楸根、枝和葉水煎液治療腫瘤的方法廣為流傳,并且效果顯著;在臨床中,將胡桃楸與其他中藥材共同制成復(fù)方制劑,用于治療腫瘤。正是由于胡桃楸抗腫瘤效果明顯、應(yīng)用廣泛,使胡桃楸獲得更加廣泛的關(guān)注。隨著研究的不斷深入,被分離、鑒定的胡桃楸提取物成分已經(jīng)過(guò)百;其中部分化合物在體外研究中已經(jīng)被證實(shí)具有抑制腫瘤細(xì)胞的作用。但是,除沈陽(yáng)藥科大學(xué)孫志等人對(duì)胡桃楸乙醇提取物中8個(gè)單體成分的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行研究之外,未見(jiàn)胡桃楸體內(nèi)過(guò)程的相關(guān)報(bào)道。因此,本論文對(duì)胡桃楸水提取體內(nèi)過(guò)程及藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究,為胡桃楸抗腫瘤有效成分的研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),對(duì)開(kāi)發(fā)基于胡桃楸的抗腫瘤中藥具有重要意義。材料與方法:1實(shí)驗(yàn)材料1.1胡桃楸莖枝采摘于遼寧省大連市普蘭店蓮山鎮(zhèn)(2016年4月),并由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)翟延君教授鑒定為胡桃科植物胡桃楸(Juglans mandshurica Maxim.),憑證標(biāo)本編號(hào)為ZHI20160406,保存于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定研究室。1.2 SPF級(jí)ICR小鼠和SD大鼠,均購(gòu)于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(遼)2015-0003。2實(shí)驗(yàn)方法2.1采用回流法制備胡桃楸水提取物,應(yīng)用UHPLC-Q-TOF-MS/MS分析方法對(duì)胡桃楸水提取物中的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究。2.2采用最大給藥量法研究胡桃楸水提取物的急性毒性作用。2.3采用蛋白沉淀法處理生物樣品(血漿、心、肝、脾、肺、腎、膽汁、尿液和糞便);采用UHPLC-Q-TOF-MS/MS方法分析、鑒定樣品中胡桃楸水提取物的原型化合物和代謝物,研究胡桃楸水提取物在體內(nèi)的分布與代謝。2.4采用HPLC分析方法,研究胡桃楸水提取物中沒(méi)食子酸和丁香酸在大鼠血漿中的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果:1.按照規(guī)范方法制備胡桃楸水提取物,得率為12.5%,生藥量為8 g/g。其中共有105個(gè)化合物被鑒定,分別為54個(gè)鞣質(zhì)、30個(gè)有機(jī)酸、8個(gè)萘衍生物、8個(gè)多糖、4個(gè)黃酮和1個(gè)二芳基庚烷類(lèi)衍生物。2.灌胃給予ICR小鼠胡桃楸水提取物(9.6 g/m L,以生藥計(jì)),灌胃量為0.5m L/20g。灌胃后14天內(nèi)小鼠的一般生理狀況未見(jiàn)異常,心、肝、脾、肺和腎未發(fā)生肉眼可見(jiàn)病變,最大耐受量為226 g/kg(以生藥計(jì))。3.采用甲醇作為蛋白沉淀劑,加入p H 7.8-8.0的磷酸鹽緩沖液,渦旋后離心取上清液,氮?dú)獯蹈?殘?jiān)鼜?fù)溶后,離心,取上清液供HPLC分析。如果采用上述方法處理生物樣品,胡桃楸水提取物中大多數(shù)成分的提取回收率大于75%。4.血漿樣品中共鑒定出33個(gè)化合物,包括12個(gè)原型化合物和21個(gè)代謝物。其中,按結(jié)構(gòu)類(lèi)型分類(lèi),原型化合物可分為4類(lèi),包括鞣質(zhì)、有機(jī)酸、萘衍生物和二芳基庚烷類(lèi)衍生物;代謝物可分為4類(lèi),包括葡萄糖醛酸化物、硫酸酯化物、葡萄糖醛酸化硫酸酯化物和異構(gòu)化反應(yīng)產(chǎn)物。膽汁樣品中共鑒定出28個(gè)化合物,其中,7個(gè)原型化合物,包括鞣質(zhì)、有機(jī)酸和萘衍生物;21個(gè)代謝物,包括葡萄糖醛酸化物、硫酸酯化物、葡萄糖醛酸化硫酸酯化物和異構(gòu)化反應(yīng)產(chǎn)物。尿液樣品中共鑒定出33個(gè)化合物,其中,20個(gè)原型化合物,包括鞣質(zhì)、有機(jī)酸、黃酮、多糖和萘衍生物;13個(gè)代謝物,包括葡萄糖醛酸化物、硫酸酯化物、葡萄糖醛酸化硫酸酯化物和異構(gòu)化反應(yīng)產(chǎn)物。糞便樣品中鑒定出71個(gè)化合物,其中,67個(gè)原型化合物,包括鞣質(zhì)、有機(jī)酸、黃酮、多糖、二芳基庚烷類(lèi)衍生物和萘衍生物;4個(gè)代謝物,包括硫酸酯化物和異構(gòu)化反應(yīng)產(chǎn)物。肝樣品中鑒定出蘋(píng)果酸和檸檬酸;脾和肺樣品中鑒定出檸檬酸;心和腎樣品中暫未見(jiàn)藥物分布。5.沒(méi)食子酸在0.04-5μg/m L范圍內(nèi)線性良好,最小檢測(cè)限(LOQ)為0.006μg/m L,最小定量限(LOD)為0.04μg/m L;日內(nèi)和日間精密度(RSD)分別為1.8-11.0%和3.5-9.4%,準(zhǔn)確度(RE)分別為-0.7-1.3%和-0.5-2.1%;血漿提取回收率為81.2-94.4%;藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為Cmax=0.64±0.05μg/m L,Tmax=61.80±8.03min,T1/2=184.21±12.73 min,AUC0-t=96.37±10.33μg?min/m L,AUC0-∞=121.59±8.87μg?min/m L。丁香酸在0.04-5μg/m L范圍內(nèi)線性良好,最小檢測(cè)限(LOQ)為0.008μg/m L,最小定量限(LOD)為0.04μg/m L;日內(nèi)和日間精密度(RSD)分別為4.0-6.9%和2.1-8.8%,準(zhǔn)確度(RE)分別為-1.2-4.9%和-4.8-0.8%;血漿提取回收率為84.9-93.6%;藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為Cmax=0.43±0.04μg/m L,Tmax=30.67±0.92min,T1/2=99.63±5.96min,AUC0-t=40.33±2.42μg?min/m L,AUC0-∞=47.02±3.29μg?min/m L。結(jié)論:1.胡桃楸水提取物中的化合物以鞣質(zhì)和有機(jī)酸為主,含有少量的黃酮、萘衍生物和二芳基庚烷類(lèi)衍生物。2.胡桃楸水提取物無(wú)明顯急性毒性作用。3.血漿樣品中代謝物多于原型化合物,原型化合物以鞣質(zhì)和有機(jī)酸為主,被代謝的化合物以萘衍生物、黃酮和二芳基庚烷類(lèi)衍生物為主。代謝類(lèi)型分為結(jié)合代謝和異構(gòu)化反應(yīng)產(chǎn)物,以結(jié)合代謝為主。膽汁樣品中原型化合物明顯少于代謝物,原型化合物以鞣質(zhì)和有機(jī)酸為主,被代謝的化合物以黃酮和萘衍生物為主,代謝類(lèi)型以結(jié)合代謝為主。尿液樣品中含原型化合物多于代謝物,原型化合物中含有大量的有機(jī)酸。代謝物以有機(jī)酸和萘衍生物為主,代謝類(lèi)型以結(jié)合代謝為主。糞便樣品中含有大量原型化合物,僅有4個(gè)代謝物,分別為硫酸酯化和異構(gòu)化反應(yīng)產(chǎn)物。組織中分布了2個(gè)有機(jī)酸,分別為蘋(píng)果酸和檸檬酸,其中心和腎樣品中未鑒定出原型物質(zhì)和代謝物。4.鞣質(zhì)、有機(jī)酸、萘衍生物、黃酮和二芳基庚烷類(lèi)衍生物可以被吸收進(jìn)入血液,萘衍生物和黃酮類(lèi)化合物主要從膽汁排泄,鞣質(zhì)和有機(jī)酸主要從腎排泄,二芳基庚烷類(lèi)衍生物從膽汁和腎排泄。5.應(yīng)用于胡桃楸水提取物中沒(méi)食子酸和丁香酸在大鼠血漿內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究的HPLC分析方法,專(zhuān)屬性和靈敏度均符合生物樣品分析要求。該研究有助于闡明藥物作用機(jī)制和指導(dǎo)臨床用藥。
【圖文】：

-3蘋(píng)果酸的二級(jí)質(zhì)譜圖

m/z 169.0140 為沒(méi)食子酸的分子離子峰，因此，結(jié)構(gòu)被鑒定為 1,2,6-三沒(méi)食子�；咸烟�。如圖 1-2-7、圖1-2-8 所示[M-H]-, 635.0852圖 1-2-7 1,2,6-三沒(méi)食子�；咸烟堑亩�(jí)質(zhì)譜
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2625348