發(fā)布時間：2020-04-12 22:26

【摘要】：許多的藥理研究和大量的臨床研究證實(shí),黃連素具有顯著抗癌的作用。但是關(guān)于其抗癌的具體靶點(diǎn)以及機(jī)理卻鮮有報道。黃連素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式與秋水仙堿結(jié)構(gòu)類似,而秋水仙堿的抗癌機(jī)理與微管相關(guān)。所以,我們利用細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn)以及移植性腫瘤動物模型實(shí)驗(yàn)來探究黃連素抗癌的具體機(jī)理是否與微管相關(guān)。首先進(jìn)行分子對接模擬實(shí)驗(yàn),探索黃連素和微管的結(jié)合位點(diǎn)。然后利用生物膜干涉儀器、等溫滴定量熱儀為研究手段,檢測到黃連素和微管之間的相互作用。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步采用MTT法檢測黃連素對8種腫瘤細(xì)胞系存活率的影響,篩選出合適的細(xì)胞系、藥物濃度以及時間之后,我們通過電轉(zhuǎn)染質(zhì)粒α-tubulin實(shí)驗(yàn),用10μg/ml黃連素處理細(xì)胞24h和48h之后,在倒置顯微鏡下觀察腫瘤細(xì)胞中微管的狀態(tài)。通過western blotting實(shí)驗(yàn),觀察乙�；摩�-tubulin的表達(dá)情況。根據(jù)體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,又進(jìn)行了移植性腫瘤動物模型實(shí)驗(yàn),將6到8周齡的雄性裸鼠分為三組,對照組(生理鹽水)、順鉑組(1mg/kg)、黃連素組(10mg/kg),每組6只,并對裸鼠的體重進(jìn)行監(jiān)測。在最終處死裸鼠后,對摘取的肝臟、脾臟、腫瘤進(jìn)行稱量,并對腫瘤進(jìn)行拍照和對比。研究發(fā)現(xiàn)黃連素和微管能夠在微管Gln8的位點(diǎn)結(jié)合;在8種腫瘤細(xì)胞系中,黃連素對表皮鱗癌細(xì)胞A431的抑制效果最好,黃連素的濃度在為2μg/ml時,處理48h之后,對A431細(xì)胞抑制率達(dá)到50%以上;黃連素能夠打亂A431腫瘤細(xì)胞中微管的正常聚合和解聚的過程;黃連素促進(jìn)乙�；摩�-tubulin的高表達(dá),可能具有促進(jìn)微管穩(wěn)定的作用;黃連素處理組與對照組相比,裸鼠的體重、肝臟以及脾臟沒有顯著性的差異,腫瘤的重量以及腫瘤體積的大小具有減小的趨勢,但是也都沒有顯著性差異。綜上所述,我們得出黃連素通過靶向微管抑制表皮鱗癌A431細(xì)胞增殖,并且?guī)缀鯖]有毒副作用。本實(shí)驗(yàn)為黃連素這種中藥的應(yīng)用開辟更廣的領(lǐng)域,也為相關(guān)的類似藥物的抗癌機(jī)理研究提供理論參考。
【圖文】：

內(nèi)的其他的蛋白共同組裝成紡錘體以及鞭毛等多種細(xì)胞器[19]。它的結(jié)構(gòu)如圖1-1所示。圖1-1微管的結(jié)構(gòu)Fig1-1the structure of the microtubule在正常情況之下，細(xì)胞內(nèi)的微管聚合和解聚保持一種循環(huán)動態(tài)平衡，微管在正常的聚合和解聚的平衡動態(tài)的狀態(tài)下，具有維持細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞有絲分裂的過程，以及細(xì)胞營養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸?shù)戎匾恼{(diào)節(jié)功能。細(xì)胞的分裂是一種有秩序的和高度可以控制的過程。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入分裂期時，細(xì)胞內(nèi)的微管以兩種形式存在細(xì)胞內(nèi)[20]，一種形式是胞質(zhì)微管，另一種則是形成紡錘體的微管。在細(xì)胞分裂的前期，細(xì)胞內(nèi)的微管會發(fā)生解聚，解聚的微管能夠迅速的聚合成為紡錘體，在細(xì)胞有絲分裂過程中，紡錘體會牽引著染色體向細(xì)胞的兩極移動，最終它們會進(jìn)入至兩個子細(xì)胞中，即完成了一次細(xì)

[20]，然后會在新的細(xì)胞內(nèi)重復(fù)這樣微管聚合和解聚循環(huán)的動態(tài)平衡。這個過程如圖1-2所示。一旦細(xì)胞微管動態(tài)循環(huán)平衡遭到破壞，腫瘤細(xì)胞的有絲分裂過程就會被阻滯，進(jìn)而使腫瘤細(xì)胞生長以及增殖受到抑制，進(jìn)一步誘導(dǎo)其凋亡[21]。圖1-2微管在細(xì)胞有絲分裂過程中的作用Fig1-2 The role of microtubules during mitosis很多的研究證實(shí)微管是目前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一，，而且是目前開發(fā)抗癌藥物的重要靶點(diǎn)之一。腫瘤細(xì)胞區(qū)別于正常細(xì)胞的一個非常重要的特點(diǎn)就是可以無限制的
【學(xué)位授予單位】：云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2625247