【摘要】：目的:研究紫草素預(yù)處理對(duì)大鼠肢體缺血再灌注損傷中炎性介質(zhì)、凋亡基因的表達(dá)及大體形態(tài)的影響,探討紫草素預(yù)處理對(duì)骨骼肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及相關(guān)作用機(jī)制,為探索缺血再灌注損傷新的治療理念提供理論依據(jù)。方法:取南華大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供健康SD雄性大鼠40只,體重350-370g/只,飼養(yǎng)期間自由進(jìn)食。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組,每組10只�？瞻捉M(A)10只,術(shù)前7天每天尾靜脈滴注生理鹽水(100ml),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不做其他任何處理。假實(shí)驗(yàn)組(B):術(shù)前7天每天尾靜脈滴注生理鹽水(100ml),實(shí)驗(yàn)分離股動(dòng)脈,不予以動(dòng)脈夾夾畢。對(duì)照組(C):術(shù)前7天每天尾靜脈滴注生理鹽水(100ml),實(shí)驗(yàn)分離股動(dòng)脈,動(dòng)脈夾夾畢股動(dòng)脈,4小時(shí)后松動(dòng)脈夾行血液灌注。實(shí)驗(yàn)組(D):術(shù)前7天每天尾靜脈滴注紫草素(10g/kg),溶劑共100ml,實(shí)驗(yàn)分離股動(dòng)脈,動(dòng)脈夾夾畢股動(dòng)脈,4小時(shí)后松動(dòng)脈夾行血液灌注。常規(guī)飼養(yǎng)適應(yīng)后,四組術(shù)前禁飲禁食6小時(shí)。20%烏拉坦0.07ml/10g腹腔內(nèi)注射麻醉。取右下腹正中切口,按實(shí)驗(yàn)分組內(nèi)容行分離股動(dòng)脈,同號(hào)動(dòng)脈夾選擇性?shī)A閉股動(dòng)脈,松動(dòng)脈夾共恢復(fù)血流灌注24小時(shí)等實(shí)驗(yàn)操作,制成缺血再灌注模型。同時(shí)尾靜脈取血,檢測(cè)造模成功后0min-24H時(shí)IL-1、IL-6、TNF-α、HMGB1、ICAM-1等介質(zhì)指標(biāo)。4組大鼠分別在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行解剖,取實(shí)驗(yàn)側(cè)腓腸肌肌肉標(biāo)本半定量檢測(cè)Bcl-2-m RNA和Bax-m RNA轉(zhuǎn)錄水平,腓腸肌HE染色,光鏡下觀察組織細(xì)胞大體形態(tài)學(xué)及細(xì)胞變化。以SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,所有數(shù)據(jù)均以?X±s表示,樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析,P0.05為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.炎性介質(zhì)結(jié)果:A、B兩組炎性介質(zhì)水平基本維持正常穩(wěn)定狀態(tài),C組HMGB1、ICAM-1水平和炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1、IL-6水平較其他組均高(P0.05),D組血清HMGBl、ICAM-1水平和炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-1等水平較C組顯著降低(P0.05)。2.RT-PCR結(jié)果:A、B兩組骨骼肌Bcl-2基因表達(dá)明顯強(qiáng)于Bax,Bcl-2/Bax的比值降低,(A與B組比較,P0.05);C組再灌注后Bcl-2基因表達(dá)降低、Bax基因表達(dá)進(jìn)一步增高,Bcl-2/Bax的比值進(jìn)一步降低,(C組與A組,C組與B組比,P0.01)。用紫草素預(yù)處理后,Bcl-2基因表達(dá)較C組增高、Bax基因表達(dá)較C組下降,Bcl-2/Bax的比值大于C組(D組與C組比,P0.05)3.HE染色光鏡結(jié)果:A:骨骼肌肌纖維規(guī)則排列,肌細(xì)胞未見(jiàn)明顯變性、水腫、斷裂;周?chē)M織間質(zhì)無(wú)明顯紅細(xì)胞滲出及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。B:骨骼肌肌纖維規(guī)則排列,肌細(xì)胞未見(jiàn)明顯變性、水腫、斷裂;周?chē)M織間質(zhì)無(wú)明顯紅細(xì)胞滲出及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。C:骨骼肌肌纖維變性水腫、斷裂,部分肌細(xì)胞溶解,肌細(xì)胞破壞嚴(yán)重,未見(jiàn)明顯肌細(xì)胞結(jié)構(gòu),斷裂溶解肌纖維間可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞和紅細(xì)胞浸潤(rùn);D:骨骼肌肌纖維排列欠規(guī)則,仍可見(jiàn)水腫變性,但未見(jiàn)斷裂溶解,肌細(xì)胞明顯腫脹,肌纖維中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及紅細(xì)胞滲出不明顯,但仍可部分聚集于損傷血管區(qū)域。結(jié)論:1.紫草素預(yù)處理后可通過(guò)下調(diào)HMGB1、ICAM-1的表達(dá)抑制炎癥反應(yīng),減輕四肢骨骼肌缺血再灌注損傷。2.紫草素預(yù)處理后可通過(guò)增強(qiáng)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)和抑制促凋亡基因Bax的表達(dá)來(lái)降低凋亡的發(fā)生,減輕四肢骨骼肌缺血再灌注損傷。
【圖文】：

6.3 肢體缺血應(yīng)用紫草素預(yù)處理后， D 組 Bcl-2 基因 mRNA 表達(dá)比 A 組降低(P<0. 05)，，而 D 組 Bax 基因 mRNA 表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05);6.4 肢體缺血應(yīng)用紫草素預(yù)處理后，D 組 Bcl-2 基因 mRNA 較 C 組表達(dá)增高(P<0. 05)，Bax 基因 mRNA 表達(dá)較 C 組開(kāi)始降低(P<0. 05)，表 6. Bcl-2、Bax、β-actin 基因 RT-PCR 產(chǎn)物電泳條帶光強(qiáng)度值 值項(xiàng)目 A 組 B 組 C 組 D 組Bcl-2/β-actin 1.7828±0.0532 1.6932±0.1325 0.9132±0.0774 1.5283±0.0538Bax/β-actin 1.1325±0.0512 1.0998±0.0653 2.4958±0.1938 1.9866±0.0532Bcl-2/Bax 1.6019±0.0109 1.5932±0.0309 0.3978±0.0092 0.8672±0.0101
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2617504