【摘要】：目的建立專屬性強的方法用于鑒定地龍的品種,建立地龍生物效價方法并對不同來源不同加工方法的地龍的纖溶活性進行評價。方法1.采用將12批樣品進行DNA提取,用CO1通用引物進行序列擴增并雙向測序拼接,其中4批進行12S rDNA引物擴增測序拼接,得到不同樣品的序列及品種,從Genbank中下載相關種屬的序列,采用MEGA-X軟件分析處理。2.采用纖維蛋白平板的測定方法,比較不同炮制不同來源地龍樣品的纖溶活性,結果1.得到了12批的15個CO1基因序列,4批的4個12s基因序列。購買的大平二號被鑒定為安德愛勝蚓;3批廣地龍中有兩批的樣品鑒定為大腔蚓及其亞種,有一批的樣品為廣地龍正品;1批山地龍的樣品鑒定為廣地龍偽品;5批滬地龍經序列比對均為正品,3批鑒定為通俗遠盲蚓,2批鑒定為威廉腔蚓。2.不同批號的凝血酶測定藥材效價RSD值為1.71%,線性:點樣量在12.5~400U范圍內,回歸方程Y=0.9824X+97.651,R~2=0.9531�；厥章蕿�86.16%,RSD為9.65%,精密度試驗RSD為0.98%。3.不同產地,不同加工方法的地龍纖溶生物效價差異很大,結果0~3122U/mg;炮制方式中以凍干處理效價最高,凍干優(yōu)于傳統(tǒng)炮制方法。4.隨著溫度的升高,地龍的生物活性呈下降趨勢,但在60℃以下較穩(wěn)定。結論1.利用CO1和12S rDNA引物擴增短的地龍DNA條形碼序列,可實現(xiàn)對中藥地龍部分基原的快速準確鑒定。2、纖維蛋白平板法快速準確,具有高通量,操作簡便,重現(xiàn)性好,可作為地龍藥材的纖溶生物活性評價方法之一。3、不同來源,不同干燥方法的地龍效價差異很大。
【圖文】：

圖 1-4 系統(tǒng)進化樹1，2，，3 為收集的廣地龍樣品，結果為：2 與廣地龍條形碼及數據庫中其他廣地龍聚為一支，為廣地龍正品，圖中所有廣地龍最大有 23 個堿基變異位點；數據庫中大腔蚓分成兩大支的原因與序列的正反向有關，1-1 與 3 兩序列比對 97.54%，差異不大；1 與來自海南島的兩個大腔蚓亞種聚為 1 大支，1 的兩個樣品與大腔蚓

不同溫度提取對1號樣品電泳條帶影響
【學位授予單位】：山西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1

【參考文獻】

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1 黃帥;徐風;楊平;楊雪雁;劉廣學;尚明英;王璇;蔡少青;;地龍的HPLC特征圖譜研究[J];中國藥房;2015年21期

2 徐立;宋文婷;任建勛;王光蕊;朱盛;姚明江;劉建勛;;溶栓膠囊對腦缺血缺氧耐受和腦儲備能力影響的實驗研究[J];世界科學技術-中醫(yī)藥現(xiàn)代化;2015年07期

3 黃文芳;石召華;陳立軍;;指紋圖譜技術評價不同干燥方式對地龍氨基酸組分提取物的影響[J];藥物評價研究;2015年03期

4 季倩;高守紅;張漢明;張磊;;HPLC法測定各滬產地龍和廣地龍中次黃嘌呤、黃嘌呤、尿嘧啶和尿苷的含量[J];第二軍醫(yī)大學學報;2015年04期

5 馬梅;李薇;龔玲;盧瑞珊;;基于COI和16SrRNA基因的地龍藥材及其混淆品的DNA條形碼鑒定[J];中藥新藥與臨床藥理;2014年05期

6 唐秋鳳;劉順會;徐曉鵬;宋雯舒;;地龍對哮喘小鼠氣道重塑的作用[J];廣東藥學院學報;2013年05期

7 徐家s

本文編號：2617435