【摘要】：背景帕金森病(Parkinson's disease,PD)發(fā)病率呈現(xiàn)逐年增長的趨勢,且臨床治療面臨著巨大挑戰(zhàn)。越來越多的證據(jù)揭示了腸道菌群參與了帕金森病的發(fā)生發(fā)展。中藥單體白藜蘆醇(Resveratrol,RV)具備抗炎、抗腫瘤、抗氧化、神經(jīng)保護等多種藥理作用,是一種防治帕金森病的潛在藥物。然而,目前關于白藜蘆醇對帕金森病相關癥狀及腸道菌群的作用尚不明確。目的探討白藜蘆醇對1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)聯(lián)合丙磺舒(Probenecid,P)誘導的帕金森病小鼠相關癥狀及腸道菌群的影響。方法1.50只雄性C57BL/6小鼠隨機分成以下五組:空白對照組(CK,正常飲食)、白藜蘆醇對照組(RV,每日灌胃白藜蘆醇30 mg/kg)、帕金森病模型組(PD,MPTP/P誘導的帕金森病)、白藜蘆醇防治組(PD_RV,實驗第一天每天灌胃白藜蘆醇30mg/kg)、白藜蘆醇治療組(PD_RV6,實驗第六周開始灌胃白藜蘆醇30 mg/kg)。2.通過轉棒實驗和爬桿實驗對小鼠的神經(jīng)行為學進行測試,采用免疫組化技術檢測小鼠腦黑質和紋狀體的病變情況,綜合神經(jīng)行為學和腦組織病變情況評估小鼠的發(fā)病情況以及白藜蘆醇對帕金森病的保護和治療作用。3.測量小腸傳導率評估白藜蘆醇對帕金森病小鼠的胃腸道功能的保護作用。4.通過測量結腸長度,利用Real-time PCR技術定量檢測結腸上皮細胞中炎性細胞因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的豐度,評估白藜蘆醇對緩解帕金森病小鼠腸道炎癥的效果。5.通過檢測結腸組織中ZO-1蛋白的表達量和血清內毒素的含量評估白藜蘆醇對帕金森病小鼠腸道黏膜屏障的改善效果。6.提取實驗第0、5、8周小鼠糞便樣品中微生物基因組DNA,采用Real-time PCR定量分析總細菌、丁酸鹽產生菌的豐度演變規(guī)律。通過高通量測序技術檢測第8周糞便樣品中細菌16S rRNA基因多樣性,分析各組小鼠腸道菌群結構差異,闡明腸道菌群與白藜蘆醇防治帕金森病的關系。結果1.從小鼠的體重變化趨勢可知造模藥物和白藜蘆醇的應用對小鼠體重沒有影響。2.神經(jīng)行為學測試結果表明帕金森病小鼠存在顯著的運動障礙,免疫組織化學結果表明帕金森病小鼠腦組織存在病理改變,白藜蘆醇的應用可顯著改善帕金森病小鼠的運動功能障礙,延緩腦組織的病理改變。3.與正常小鼠相比,帕金森病小鼠存在腸道功能障礙、輕度結腸炎癥和腸道黏膜屏障受損癥狀,白藜蘆醇的干預可顯著改善上述癥狀。4.基于16S rRNA的高通量測序結果表明,帕金森病小鼠存在顯著的腸道菌群結構失調:與CK組小鼠相比,門水平上帕金森病小鼠腸道菌群厚壁菌門(Firmicutes)和Deferribacteres豐度顯著增加(P0.05),擬桿菌門(Bacteroidetes)豐度顯著降低(P0.05);科水平上帕金森病小鼠腸道疣微菌科(Ruminococcaceae)和脫鐵桿菌科(Deferribacteraceae)豐度顯著增加(P0.05),普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)豐度顯著降低(P0.05);在屬水平上帕金森病小鼠腸道Prevotellaceae_UCG-001顯著降低(P0.05),Oscillibacter顯著升高(P0.05)。白藜蘆醇的干預可在一定程度上逆轉這種改變,即白藜蘆醇防治帕金森病過程中對腸道菌群有一定的影響。結論1.白藜蘆醇可有效改善帕金森病小鼠相關癥狀;2.白藜蘆醇在防治帕金森病過程中對腸道菌群有一定的影響,可能通過增加丁酸鹽產生菌和普雷沃氏菌的豐度延緩帕金森病的發(fā)展。
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實驗方法1 實驗分組處理及帕金森病小鼠模型的建立50 只雄性 C57BL/6 小鼠，7-8 周齡，SPF 級，體重 22-24 g，購自北京維通利華動物技術有限公司。隨機分成 5 組，正常對照組（CK，每日灌胃無菌水），白醇對照組（RV，每日灌胃白藜蘆醇 30 mg/kg），帕金森病模型組（PD，每日灌菌水），白藜蘆醇防治的模型組（PD_RV，每日灌胃白藜蘆醇 30 mg/kg），白醇治療的模型組（PD_RV6，實驗第六周開始灌胃白藜蘆醇 30 mg/kg）。模型組實驗前 5 周每周三、周日上午腹腔注射丙磺舒（250 mg/kg 小鼠體重）和 MPTP（g/kg 小鼠體重），連續(xù) 5 周；對照組注射上述體積的生理鹽水。

圖 2. 轉棒實驗定在木制底座上的一個高 50 cm，直徑形，，木棍外層包有兩層紗布以防止小鼠行爬桿實驗，爬桿實驗參照 Heng 等的，記錄小鼠自桿頂爬至桿底部后肢著地少 10 min，如果小鼠出現(xiàn)中途停頓或
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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