發(fā)布時間：2020-03-25 07:56

【摘要】：目的:觀察獨活寄生湯對大白兔退變腰椎間盤髓核及終板的組織形態(tài)學變化,并檢測髓核中MMP-13蛋白含量的變化及Ⅱ型膠原蛋白m RNA的表達量,從分子學研究獨活寄生湯可能產(chǎn)生的作用機制,明確獨活寄生湯能夠延緩椎間盤退變,為今后臨床上遣方用藥提供實驗基礎(chǔ),促進祖國醫(yī)學的多元化發(fā)展。方法:選取成年健康新西蘭大白兔80只,隨機分為空白對照組、假手術(shù)組、模型對照組、中藥組以及高濃度中藥組,各組為16只大白兔。除空白對照組和假手術(shù)組外,其余各組按照纖維環(huán)穿刺法建立兔腰椎退變模型,造模成功后依據(jù)人與動物表面積換算公式計算出實驗兔所需藥物劑量,空白對照組、假手術(shù)組與模型對照組每日生理鹽水灌胃,中藥組及高濃度中藥組分別用低濃度及高濃度獨活寄生湯每日灌胃,整個灌胃過程持續(xù)8周。所有大白兔正常飼養(yǎng),每隔1周稱量大白兔體重,根據(jù)體重變化調(diào)整灌胃劑量。分別于造模后2周、灌胃4周后、灌胃6周后、灌胃8周后每組隨機抽取大白兔各4只處死取材,運用HE染色400倍光鏡下觀察椎間盤組織形態(tài)學變化;用RT-PCR法檢測髓核中膠原蛋白(COL-2a)基因表達量;Western Blot檢測髓核中MMP-13的蛋白含量。結(jié)果:RT-PCR及Western Blot檢測結(jié)果表明:空白組與假手術(shù)組中COL-2a m RNA及MMP-13蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);模型對照組椎間盤中COL-2a m RNA及MMP-13蛋白含量高于空白組和假手術(shù)組,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),說明造模成功;中藥組、高濃度中藥組COL-2a m RNA及MMP-13蛋白含量均要低于模型對照組,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),說明獨活寄生湯湯能有效延緩兔椎間盤退變;中藥組與高濃度中藥組中COL-2a m RNA及MMP-13蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),說明中藥濃度的高低對延緩兔椎間盤退變無明顯差異。結(jié)論:1、肌間隙入路纖維環(huán)穿刺法可成功造成兔椎間盤退變模型;2、退變的兔椎間盤組織結(jié)構(gòu)及病理變化與人退變椎間盤相吻合,纖維環(huán)穿刺,即外界物理刺激因素可使椎間盤的退變速度加快,能功能模仿椎間盤退變的動物模型;3、對腰椎間盤退變的大白兔予以獨活寄生湯湯灌胃后,椎間盤組織中MMP-13蛋白表達水平明顯降低,同時,Ⅱ型膠原的基因表達明顯升高,證明獨活寄生湯湯可能具有抑制MMP-13蛋白酶的活性,使椎間盤髓核內(nèi)的關(guān)鍵蛋白(Ⅱ型膠原蛋白)的表達升高,從而達到延緩椎間盤退變的作用。
【圖文】：

18COL2a-溶解曲線圖4 兔椎間盤中 MMP-13的檢測4.1 各組兔椎間盤中 MMP-13 相對蛋白表達水平造模后 2 周：空白對照組與假手術(shù)組對比，MMP-13 水平差異不明顯（P >0.05），差異不具有統(tǒng)計學意義，說明手術(shù)不是造成兔椎間盤退變的外在因素；與空白對照組相比，模型對照組、中藥組及高濃度中藥組 MMP-13 水平明顯上升(P<0.05)，說明纖維環(huán)穿刺法能造出兔椎間盤退變模型；灌胃 4 周、6周及 8 周后：與模型對照組相比，，中藥組及高濃度中藥組 MMP-13 水平有所下降（P<0.05），說明獨活寄生湯灌胃能抑制盤內(nèi) MMP-13 的合成，從而抑制或減緩椎間盤退變；與中藥組相比
【學位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2599636