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知母多糖的分離純化與結(jié)構(gòu)分析

發(fā)布時間:2020-03-25 05:36
【摘要】:知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)是百合科知母屬中藥,具有清熱泄火,滋陰潤燥的功效。多糖是知母的主要活性成分之一,具有降血糖、抗炎、增強免疫等功能。目前對知母多糖的研究主要集中在藥理活性方面,對其結(jié)構(gòu)特征的研究報道較少。為了更好地研究知母多糖的構(gòu)效關系,有必要深入分析其組成與結(jié)構(gòu)。因此,我們設計了本論文的研究內(nèi)容,具體的研究結(jié)果如下:利用熱水煮提、乙醇醇沉等方法得到知母多糖WABP,得率為8.2%。WABP的糖含量為55.2%,糖醛酸含量為19.2%,蛋白質(zhì)含量為0.8%,經(jīng)完全酸水解及HPLC分析可知WABP的主要單糖組成及其所占的摩爾比為Man:GalA:Glc:Ara:Gal=32.3:23.6:14.1:14.1:11.2。將WABP利用DEAE-纖維素離子交換柱層析分級,分別用蒸餾水及0.5 M NaCl水溶液洗脫,得到中性糖級分WABP-N和酸性糖級分WABP-A,得率分別為54.3%和21.7%。進一步將WABP-A利用離子交換柱層析分級,采用不同濃度的鹽溶液洗脫,得到WABPAH、WABP-A2、WABP-A3和WABP-A5四個級分,其中WABP-A2和WABP-A3為主要級分,得率分別為56.6%和30.3%。WABP-A2經(jīng)Sepharose CL-6B凝膠柱層析分級得到WABP-A2a,WABP-A2b和WABP-A2c三個均一級分,WABP-A3經(jīng)Sepharose CL-6B凝膠柱層析分級得到WABP-A3a和WABP-A3b兩個均一級分。對均一級分WABP-A2a、WABP-A2b和WABP-A3a進行單糖組成測定、紅外光譜、甲基化以及核磁共振分析,結(jié)果表明這三個級分均為I型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-I)果膠結(jié)構(gòu)域,以α-1,4-GalpA和α-1,2-Rhap連接構(gòu)成主鏈,側(cè)鏈連有高度分支的阿拉伯聚糖和I型阿拉伯半乳聚糖(AG-I),此外WABP-A2b的側(cè)鏈中還含有少量的II型阿拉伯半乳聚糖(AG-II)。對另外兩種均一級分WABP-A2c和WABP-A3b進行單糖組成測定,結(jié)果顯示二者主要由GalA構(gòu)成,含量分別為79.2%和72.7%。紅外光譜及核磁共振分析結(jié)果表明,WABP-A2c和WABP-A3b主要為α-1,4-GalpA連接構(gòu)成的聚半乳糖醛酸(HG)結(jié)構(gòu)域,部分GalA發(fā)生甲酯化和乙酰化修飾。果膠酶酶解實驗表明WABP-A2c和WABP-A3b中除HG結(jié)構(gòu)域外,還含有少量RG-I和II型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-II)結(jié)構(gòu)域,不同的結(jié)構(gòu)域可能通過共價鍵連接。本論文對知母多糖的結(jié)構(gòu)進行了詳細研究,知母酸性糖中含有HG型、RG-I型、RG-II型和AG型果膠,AG型果膠作為RG-I型果膠側(cè)鏈存在,各種類型果膠共價連接為果膠大分子,研究結(jié)果為知母多糖的藥理活性及構(gòu)效研究提供了結(jié)構(gòu)基礎。
【圖文】:

示意圖,果膠結(jié)構(gòu),示意圖


圖 1-2 RG-I 型果膠結(jié)構(gòu)示意圖[4]果膠通常存在于植物壁中,由至少 8 個 1,4-連接的 α-D式和類型均不同的糖殘基組成側(cè)鏈(A-D),結(jié)構(gòu)示意圖如鑒定了 RG-II 型果膠的不同結(jié)構(gòu)亞基,但是主鏈上連接支點以及它們的空間取向仍然是科學家應對的巨大挑戰(zhàn)不僅是最復雜的而且是最保守的細胞壁多糖,對正常的

示意圖,果膠結(jié)構(gòu),示意圖


圖 1-2 RG-I 型果膠結(jié)構(gòu)示意圖[4](2)RG-II 型果膠通常存在于植物壁中,由至少 8 個 1,4-連接的 α-D-GalpA 殘基組架,由連接方式和類型均不同的糖殘基組成側(cè)鏈(A-D),結(jié)構(gòu)示意圖如圖 1-3 所示,F(xiàn)在幾乎完全鑒定了 RG-II 型果膠的不同結(jié)構(gòu)亞基,但是主鏈上連接的 A 和 C 側(cè)相對位置和分支點以及它們的空間取向仍然是科學家應對的巨大挑戰(zhàn)[5]。目前研究 RG-II 型果膠不僅是最復雜的而且是最保守的細胞壁多糖,對正常的植物生長和發(fā)關重要。
【學位授予單位】:東北師范大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2019
【分類號】:R284

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本文編號:2599478

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