發(fā)布時間：2020-03-25 00:47

【摘要】：麥角甾醇(ergosterol),別名麥角固醇,主要存在于酵母菌、霉菌等真菌和某些植物中,是一種重要的菌類甾醇,不但具有多種藥理活性,還被廣泛地應用于藥品的開發(fā)中。目前,麥角甾醇的來源主要通過微生物發(fā)酵合成得到,近年來也有從一些菌絲體中提取得到。為了改善麥角甾醇的脂溶性,更有效地利用它,本文對麥角甾醇衍生化以增強其多重藥理活性進行了系統(tǒng)的研究,主要研究內(nèi)容如下:本實驗自制麥角甾醇衍生物(ErN、ErC、ErS、ErF和Er3F),對其進行HPLC含量檢測,并對其抗腫瘤及抗抑郁活性進行研究,評價其相關藥理作用機制。1.麥角甾醇及其衍生物的抗腫瘤活性研究首先建立H_(22)皮下移植瘤模型,通過檢測瘤重、臟器重量、血清學指標、腫瘤組織切片染色、相關蛋白等,分析得到抑瘤率、胸腺、脾及肝指數(shù)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、小鼠γ-干擾素(interferon-γ,IFN-γ)、白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及肝腎指標,谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、腫瘤組織和脾臟HE染色,TUNEL染色、免疫組化及western blot等結(jié)果分析麥角甾醇及其衍生物的抗腫瘤機制研究。其結(jié)果表明:麥角甾醇及其衍生物能顯著抑制H_(22)荷瘤小鼠實體瘤生長,給藥后血清細胞因子TNF-α和IFN-γ均有所升高,而IL-6、VEGF則降低。此外,從HE、TUNEL染色分析中我們可以發(fā)現(xiàn)麥角甾醇及其衍生物能夠促使腫瘤細胞凋亡,經(jīng)過對各個指標的考察與對比發(fā)現(xiàn),ErN、ErC、ErS、ErF和Er3F五種衍生物中,ErN的抗腫瘤效果最好,ErC次之,繼而對ErN組的腫瘤組織進行相應蛋白檢測,通過免疫組化及western blot對ErN C抗腫瘤活性進行分析,發(fā)現(xiàn)ErN可以調(diào)控蛋白的表達,繼而發(fā)揮抗腫瘤的作用,其機制可能與上調(diào)Bax,下調(diào)Bcl-2、VEGF有關。2.麥角甾醇及其衍生物的抗抑郁活性研究首先進行小鼠自由活動實驗(SLT),該實驗是為了排除強迫游泳實驗(FST)中不動時間的改變是由于運動活性的干擾引起的可能性,在ZZ-6小鼠自主活動測試儀器中觀察每只小鼠的自發(fā)運動活性。適應3min后,觀察記錄小鼠5min內(nèi)的活動次數(shù)。在本研究中,FST是用于評價藥物抗抑郁活性。首先進行了抗抑郁前期篩選,在范圍(0.1mg/kg-100mg/kg)篩選麥角甾醇及其衍生物抗抑郁的最佳劑量,發(fā)現(xiàn)麥角甾醇及其衍生物在抑郁癥小鼠模型中均表現(xiàn)出一定的抗抑郁活性。而ErN減少的時間最為明顯,并分別篩選出其有效劑量和亞有效劑量為5mg/kg和0.5mg/kg。繼續(xù)后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)ErN(0.5mg/kg)聯(lián)合給藥后與噻奈普汀,瑞波西汀聯(lián)用時表現(xiàn)出協(xié)同作用,而氟西汀聯(lián)用則無此作用。通過ErN(5mg/kg)在FST的抗抑郁樣對不同中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用,結(jié)果顯示:競爭性GABA拮抗劑荷包牡丹堿(4mg/kg,i.p.)有效地阻斷了ErN(5mg/kg,i.p.)的抗抑郁樣作用。我們使用NMDA(75mg/kg,ip)作為興奮性氨基酸激動劑,在FST中,能夠防止由ErN(5mg/kg,ip)處理誘導的不動時間的減少,揭示了ErN參與谷氨酸能系統(tǒng)而達到抗抑郁作用。
【圖文】：

圖 2.1 麥角甾醇及其衍生物對 H22荷瘤小鼠腫瘤生長的影響（ x±s，n=10）Fig. 2.1 Effects of ergosterol and its derivatives on tumor growth in H22 tumor-bearing mice( x ±s, n=10)1.3.2 對荷瘤小鼠臟器指數(shù)影響胸腺和脾臟是重要的免疫器官，腫瘤生長過程中，環(huán)磷酰胺等化學藥物雖然可以一程度殺傷腫瘤細胞，抑制腫瘤細胞的增殖，另一方面也可以造成機體免疫功能的損害，以臟器指數(shù)可在一定程度上反映機體免疫功能的強弱。胸腺的主要功能是產(chǎn)生 T 淋巴胞和分泌胸腺素，主要參與細胞免疫[81]；胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)可較好的反應機體的免疫力，指數(shù)的升高表明機體免疫能力增強[82]-[83]。故臟器指數(shù)可在一定程度上反映機體免疫能的強弱[84]。麥角甾醇及其衍生物對荷瘤小鼠免疫器官影響結(jié)果見表 2-2、圖 2.2，從圖 2.2 可知小鼠接種腫瘤后出現(xiàn)胸腺免疫指標異常，表現(xiàn)為胸腺指數(shù)升高。與模型組比較，環(huán)磷酰組小鼠脾臟重量減小，脾指數(shù)明顯降低；麥角甾醇及其衍生物小鼠脾指數(shù)明顯高于模型組表 2-2 麥角甾醇及其衍生物對荷瘤小鼠免疫器官影響（ x±s，n=10）Tab. 2-2 Effects of ergosterol and its derivatives on immune organs in tumor - bearing mice( x ±s，n=10

圖 2.2 麥角甾醇及其衍生物對荷瘤小鼠免疫器官影響（ x±s，n=10）Fig. 2.1 Effects of ergosterol and its derivatives on immune organs in tumor - bearing mice( x ±s，n=10)1.3.3 對荷瘤小鼠血清學指標影響麥角甾醇及其衍生物對荷瘤小鼠血清學指標影響結(jié)果見表 2-3、圖 2.3 所示。在腫瘤生長過程中，血清中的細胞因子發(fā)揮著不可替代的作用。如血管生成在腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中起重要作用，它不僅提供了必要的營養(yǎng)和氧氣，，而且消除了許多代謝廢物[85]，VEGF 可以抑制腫瘤微環(huán)境中的血管生成[86]-[87]，IFN-γ 可抑制細胞增殖[88]，IFN-γ 是一種具有抗病毒抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的細胞因子，主要由活化的 T 細胞和自然殺傷細胞(natural killcell，NK)細胞產(chǎn)生；IFN-γ 可通過延長細胞周期以延緩腫瘤細胞的生長和繁殖，通過抑制癌基因的表達阻止或減慢腫瘤細胞的轉(zhuǎn)化過程，激活巨噬細胞、NK 細胞等以直接殺傷癌細胞或間接抑制癌基因；還可通過誘導腫瘤壞死因子、促進癌細胞腫瘤壞死因子(tumonecrosis factor，TNF)受體、主要組織相容性復合體(major histocompatibility complex Ⅱ，[89]
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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1 郭瑋;羅瓊;高虹;程薇;;麥角甾醇對S180荷瘤小鼠腫瘤血管生成和Bax、Bcl-2表達的影響[J];營養(yǎng)學報;2015年06期

2 黃挺章;李遠輝;郭圣奇;盧善善;齊梁煜;馮雪萍;黃鎖義;;薏苡莖醇提取物對荷H_(22)小鼠體內(nèi)抗腫瘤作用[J];天津醫(yī)藥;2015年11期

3 張百紅;岳紅云;;;腫瘤的發(fā)生:從有序到無序[J];醫(yī)學爭鳴;2015年04期

4 郭瑋;羅瓊;劉帥;高虹;程薇;;麥角甾醇對S180荷瘤小鼠抑瘤作用及機制[J];中國公共衛(wèi)生;2015年12期

5 任玉偉;宿華威;;Bcl-2基因家族研究進展[J];大連醫(yī)科大學學報;2015年02期

6 郭杰;王蓓;戎瑞雪;曹志然;;�；撬釋樸K所致H22荷瘤小鼠免疫器官及淋巴細胞損傷的保護作用[J];食品科學;2015年05期

7 曹龍輝;李曉s

本文編號：2599129