【摘要】：目的尿路結(jié)石為臨床常見病、多發(fā)病,對患者造成巨大的痛苦,且復發(fā)率高,其發(fā)病機制尚未完全闡明。排石沖劑是湖北中醫(yī)名家的驗方,配伍嚴謹,臨床療效確切。本研究以草酸鈣結(jié)石大鼠為模型,基于P38MAPK信號通路,觀察排石沖劑對草酸、草酸鈣結(jié)晶所致大鼠腎臟氧化應激與炎癥損傷、腎臟局部RAS系統(tǒng)的改變和腎臟細胞緊密連接改變的影響,探討排石沖劑干預草酸鈣結(jié)石形成的具體作用機制,為其進一步開發(fā)應用提供理論支持和實驗依據(jù)。方法1動物分組、造模與取材1.1動物分組與造模48只雄性SPF級Wistar大鼠(體重180g-220g),隨機分為A、B、C、D組,A組(空白組),12只(普通大鼠飼料喂養(yǎng)及生理鹽水灌胃,1ml/100g/次,1次/天),B組(模型組),12只(普通大鼠飼料喂,1%乙二醇自由飲水和2%氯化銨溶液灌胃,lml/100g/次,1次/天),C組(排石沖劑組),12只[臨用前將排石沖劑配成0.58g/ml的混懸液(按照體表面積折算接近臨床人用量),造模同時予中藥混懸液灌胃,1ml/100g/次,1次/天],D組(枸櫞酸鉀組),12只(邊造模邊予枸櫞酸鉀灌胃,25%枸櫞酸鉀溶液lml/100g/次,1次/天)。1.2取材實驗第4周時,將大鼠置于代謝籠收集其24h尿液,將其分為四份并標記。分別用真空采血管采集血標本,4℃冰箱隔夜靜置后,留取淡黃色的上清液(血清),㧟80℃冰箱保存?zhèn)溆�。摘取大鼠腎臟,右腎置4%甲醛溶液中固定;左腎標記后置入液氮,后移入㧟80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?標本檢測2.1生化檢查用收集的尿液標本分別檢測尿草酸、尿生化(尿鈣、磷、鎂),分離備用的血清標本檢測BUN、Cr水平,以了解排石沖劑對結(jié)石形成的理化危險因素和腎功能的影響。2.2病理切片將固定備用的腎組織標本做成石蠟切片,觀察腎臟結(jié)晶沉淀及腎臟病理學改變(Von Kossa's染色)。2.3免疫組化法檢測各組大鼠腎組織MCP-1、TGF-β1、AngⅡ、ACE、ACE2、AT1R及p38MAPK/p-p38MAPK、occludin、ZO-1的蛋白表達。2.4 Real Time PCR檢測各組大鼠腎組織TGF-β1、MCP-1、AngⅡ、AT1R、ACE、ACE2及p38MAPK、occludin、ZO-1m RNA表達。2.5 Western blotting檢測各組大鼠腎組織p38MAPK、occludin、ZO-1蛋白表達。結(jié)果1大鼠一般情況、體質(zhì)量情況、尿液、血清生化及腎臟形態(tài)學改變1.1大鼠一般情況:B組大鼠第4周時表現(xiàn)出食欲衰減,活動減少,毛發(fā)枯槁,身體蜷縮等現(xiàn)象,其飲水及尿量減少。而D組和C組大鼠,尿量增加,精神狀況較好,飲食活動未受明顯影響,C組較D組一般情況更佳。1.2大鼠體質(zhì)量情況:大鼠體重治療前差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。大鼠治療后體質(zhì)量比較。治療后體重情況:與A組比,B組、C組體重較低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。和B組比較,C組、D組體重較高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。1.3尿液、血清生化:B組大鼠尿草酸、鈣、磷離子水平較A組均明顯升高,尿鎂水平則明顯降低。B組大鼠血清BUN、Cr水平較A組升高。與B組比較,C組、D組大鼠尿草酸、鈣、磷離子水平降低,尿鎂水平升高;BUN、Cr水平也較B組降低。1.4腎臟形態(tài)學改變:腎組織Ca Ox結(jié)晶評分,B組和C組、D組Ca Ox結(jié)晶評分均顯著高于A組(P0.01);與B組比,C組、D組評分明顯較低(P0.01)。2排石沖劑通過干預P38MAPK信號通路對大鼠氧化應激和炎癥損傷的影響:B組SOD水平降低,MDA水平增高;p/p-p38MAPK、MCP-1和TGF-β1 m RNA和蛋白表達水平增高,C組MDA、p/p-p38MAPK、MCP-1和TGF-β1等指標表達均降低,SOD水平增高。提示排石沖劑可能通過干預P38MAPK通路減輕草酸、草酸鈣晶體誘導的大鼠腎臟氧化應激和炎癥損傷。3排石沖劑通過干預P38MAPK信號通路對大鼠腎臟局部RAS系統(tǒng)改變的影響:B組較A組p/p-p38MAPK、Ang II和AT1R、ACE m RNA和蛋白水平均升高,ACE2m RNA和蛋白表達水平降低。C組較B組p38MAPK、Ang II和AT1R、ACEm RNA和蛋白水平均降低,ACE2m RNA和蛋白表達水平升高。提示排石沖劑可能通過干預P38MAPK通路影響草酸、草酸鈣晶體誘導的大鼠腎臟局部RAS系統(tǒng)的改變,減輕大鼠腎臟損傷并抑制結(jié)石形成。4排石沖劑通過干預P38MAPK信號通路對大鼠腎臟緊密連接蛋白改變的影響:B組較A組p/p-p38MAPK蛋白和m RNA表達升高,ZO-1和occludin蛋白和m RNA表達則較A組均降低;C組較B組p/p-p38MAPK蛋白和m RNA表達降低,ZO-1和occludin表達較B組升高,提示排石沖劑可能通過干預P38MAPK通路影響草酸、草酸鈣晶體誘導的大鼠腎臟緊密連接的改變。結(jié)論排石沖劑可能通過干預P38MAPK通路影響草酸、草酸鈣晶體誘導的大鼠腎臟氧化應激和炎癥損傷反應、腎臟局部RAS系統(tǒng)改變、腎臟緊密連接的改變,從而起到抑制草酸鈣結(jié)石形成和保護腎臟的作用。
【圖文】：

圖 1 大鼠體質(zhì)量情況：A 為空白組，，B 為模型組，C 為排石沖劑組，D 為枸櫞酸鉀組；與 A組比較#P＜0.05，##P＜0.01，與 B 組比較，＆P＜0.05，＆＆P＜0.01。3.2 大鼠尿 Ox、尿生化情況大鼠尿 Ox、Ca2+、P3+含量：與 A 組比較，B 組、C 組和 D 組均升高

大鼠體質(zhì)量情況：A 為空白組，B 為模型組，C 為排石沖劑組，D 為枸櫞酸鉀組；#P＜0.05，##P＜0.01，與 B 組比較，＆P＜0.05，＆＆P＜0.01。大鼠尿 Ox、尿生化情況大鼠尿 Ox、Ca2+、P3+含量：與 A 組比較，B 組、C 組和 D 組均升有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與 B 組比較，C 組、D 組均降低，計學意義（P＜0.01）。大鼠尿 Mg2+含量：與 A 組比較，B 組及 C均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與 B 組比較，C 組、高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（見圖 2）
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2591431