目的:探討Melusin蛋白對(duì)甲基苯丙胺(METH)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的抵抗作用及作用通路,旨在為吸食METH的戒毒者探討一種心臟功能的保護(hù)方法,同時(shí)為吸食METH致死的案件法醫(yī)鑒定提供新的檢測(cè)指標(biāo)。方法:⑴建立SD大鼠METH慢性中毒動(dòng)物模型(染毒組和對(duì)照組);建立新生SD大鼠原代心肌細(xì)胞METH濃度梯度(0~2.0 mM)、時(shí)間梯度(0~48 h)中毒模型和過(guò)表達(dá)Melusin細(xì)胞模型(Mel+/-METH組和NC+/-METH組);根據(jù)納排標(biāo)準(zhǔn),收集貴州醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)司法鑒定中心確認(rèn)吸食METH且無(wú)吸食其他任何毒品致死案例為實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組案例的人心肌組織。(2)采用蛋白免疫印跡法(Western Blotting,WB)檢測(cè)動(dòng)物和細(xì)胞水平中Melusin蛋白、凋亡標(biāo)志蛋白(cleaved PARP、cleaved caspase-3)及相關(guān)調(diào)控通路關(guān)鍵蛋白(FAK、IQGAP1)和效應(yīng)蛋白(p-AKT、p-GSK3β、p-ERK)的表達(dá);利用TUNEL染色技術(shù)檢測(cè)過(guò)表達(dá)Melusin細(xì)胞模型和人體心肌細(xì)胞凋亡水平;使用蘇木素-伊紅染色法(hematoxylin and eosin,HE)觀察人體心肌組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化;運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色法(immunohistochemistry,IHC)檢測(cè)人體心肌細(xì)胞中Melusin的表達(dá)。結(jié)果:(1)在動(dòng)物水平上,染毒組與對(duì)照組相比,Melusin表達(dá)降低,cleaved PARP、cleaved caspase-3表達(dá)升高,FAK、IQGAP1、p-AKT、p-GSK3β和p-ERK表達(dá)降低,且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在大鼠原代心肌細(xì)胞METH中毒模型上,均隨濃度梯度、時(shí)間梯度的遞增,Melusin表達(dá)降低,cleaved PARP、cleaved caspase-3表達(dá)升高,FAK、IQGAP1、p-AKT、p-GSK3β和p-ERK表達(dá)降低,且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而在經(jīng)過(guò)METH處理的過(guò)表達(dá)Melusin蛋白細(xì)胞模型中,蛋白的表達(dá)情況得到了逆轉(zhuǎn),即Mel+METH組與NC+METH組相比,Melusin蛋白表達(dá)升高,PARP、cleaved caspase-3表達(dá)降低,FAK、IQGAP1、p-AKT、p-GSK3β和p-ERK表達(dá)升高,且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),TUNEL染色也顯示凋亡信號(hào)明顯降低(P0.05),細(xì)胞存活增加;在人體心肌組織中,HE染色觀察到實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,人心肌細(xì)胞呈現(xiàn)萎縮、壞死、脂肪浸潤(rùn)、局灶性出血、心肌纖維斷裂等病理改變,且IHC發(fā)現(xiàn)在心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)棕黃色著色的心肌細(xì)胞數(shù)量明顯減少,甚至消失,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),TUNEL染色技術(shù)顯示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,大量心肌細(xì)胞核被染成棕褐色,細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組明顯升高(P0.05)。結(jié)論:甲基苯丙胺通過(guò)降低Melusin引起心肌細(xì)胞凋亡,而過(guò)表達(dá)Melusin蛋白可以通過(guò)提高FAK與IQGAP1,激活A(yù)KT/GSK3β與ERK的磷酸化,降低METH誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：D919.1
【部分圖文】：

圖 1 暴露于 METH 對(duì) Melusin 蛋白表達(dá)水平的影響Fig. 1 Effects of METH exposure on the protein expression levels of Melusin注：A, B: SD 大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和 14 d METH 組(n=6/組)。WB 檢測(cè)心肌組織中 Melusin蛋白表達(dá)水平。*，與對(duì)照組比較 P<0.05(獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn))。C-F: 大鼠原代心肌細(xì)胞分別暴

圖 2 暴露于 METH 對(duì)凋亡標(biāo)志物 cleaved caspase-3、cleaved PARP 蛋白表達(dá)水平的影響Fig. 2 Effects of METH exposure on the protein expression levels of apoptotic markerscleaved caspase-3 and cleaved PARP注：A, B: SD 大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和 14 d METH 組(n=6/組)。WB 檢測(cè)心肌組織中 cleaved

圖 3 過(guò)表達(dá) Melusin 蛋白對(duì)大鼠原代心肌細(xì)胞凋亡標(biāo)志物cleaved PARP 和 cleaved caspase-3 蛋白表達(dá)的影響Fig. 3 Effects of overexpression of Melusin protein on the protein expression levels ofapoptosis markers cleaved PARPand cleaved caspase-3
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本文編號(hào)：2845043