本文關(guān)鍵詞：重組人纖維蛋白原基因在畢赤酵母中的高效表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 重組人纖維蛋白原 畢赤酵母 分泌表達(dá) 分離純化

【摘要】：目的構(gòu)建含有人纖維蛋白原基因的畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)胞外高效分泌表達(dá)。方法全基因合成人纖維蛋白原3個(gè)基因FGA、FGB、FGG,構(gòu)建表達(dá)載體pGAPZαA-FGB-FGG-FGA-AOX1,線性化后電轉(zhuǎn)化導(dǎo)入畢赤酵母菌株SMD1168H,抗性篩選獲得陽性克隆。發(fā)酵液經(jīng)SDS-PAGE確定蛋白表達(dá)部位,ELISA檢測(cè)目的蛋白表達(dá)量。表達(dá)產(chǎn)物超濾濃縮后利用AKTA蛋白純化系統(tǒng)進(jìn)行分離純化,Western blot檢測(cè)蛋白表達(dá)情況并對(duì)純化產(chǎn)物進(jìn)行生物學(xué)活性測(cè)定。結(jié)果基因工程菌株搖瓶培養(yǎng)上清液表達(dá)量約15mg/L,生物學(xué)活性分析重組蛋白具有凝集活性。結(jié)論成功獲得了高效分泌表達(dá)重組人纖維蛋白原的畢赤酵母菌株,且分離純化的蛋白具有生物凝集活性。
【作者單位】： 山東省藥學(xué)科學(xué)院山東省生物藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室山東省多糖類藥物工程實(shí)驗(yàn)室多糖類藥物發(fā)酵與精制國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室;山東大學(xué)藥學(xué)院;山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)公司;
【關(guān)鍵詞】： 重組人纖維蛋白原 畢赤酵母 分泌表達(dá) 分離純化
【基金】：山東省自主創(chuàng)新成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)(2014CGZH1306) 濟(jì)南市自主創(chuàng)新產(chǎn)業(yè)化重大專項(xiàng)(201403009) 山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2015GSF121003) 山東省科技重大專項(xiàng)(重大關(guān)鍵技術(shù))(2015ZDJS04002) 山東省自然科學(xué)基金企業(yè)先導(dǎo)技術(shù)聯(lián)合基金(ZR2015QL007)
【分類號(hào)】：R915
【正文快照】： (1.山東省藥學(xué)科學(xué)院山東省生物藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室山東省多糖類藥物工程實(shí)驗(yàn)室多糖類藥物發(fā)酵與精制國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室,山東濟(jì)南250101;2.山東大學(xué)藥學(xué)院,山東濟(jì)南250012;3.山東福瑞達(dá)醫(yī)藥集團(tuán)公司,山東濟(jì)南250101)(1.Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences,Key Labo

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本文編號(hào)：836743