本文關(guān)鍵詞：心臟特異性CYP2E1基因修飾小鼠在毒理學(xué)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用保健食品中含蒽醌類成分中藥原料的安全性評(píng)價(jià)

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【摘要】：背景 藥物的毒性反應(yīng)是非臨床安全性評(píng)價(jià)的主要研究?jī)?nèi)容,其中高達(dá)26%的毒性反應(yīng)是心血管毒性。目前,外源性藥物導(dǎo)致心臟毒性的作用機(jī)制主要有氧化應(yīng)激反應(yīng)、脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和免疫炎癥反應(yīng)等。CYP2E1是機(jī)體參與內(nèi)外源性物質(zhì)催化作用的一類重要的氧化代謝酶,同時(shí)產(chǎn)生活性氧自由基(reactive oxygen free radi cal, ROS),引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡等過(guò)程,進(jìn)而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒性。人源化CYP2E1基因修飾小鼠,為研究人CYP2E1基因表達(dá)調(diào)控和功能提供了完整的生物遺傳系統(tǒng),國(guó)內(nèi)外許多研究已將其應(yīng)用于CYP2E1的代謝機(jī)制以及與CYP2E1基因有關(guān)的疾病如脂肪性肝病的病理機(jī)制研究中。本實(shí)驗(yàn)選用兩種心臟特異性CYP2E1基因修飾小鼠(心臟特異性CYP2E1轉(zhuǎn)基因小鼠,a-MHC CYP2E 1 transgenic mice, Tg(+)和心臟特異性CYP2E1基因沉默小鼠,a-MHC CYP2E1 silence mice, sTg(+)),來(lái)進(jìn)行CYP2E1基因的特異性底物--對(duì)乙酰氨基酚以及具有潛在心臟毒性藥物--西布曲明的毒性評(píng)價(jià)的初步探索,以期選擇一種敏感性更高的基因修飾動(dòng)物模型,為具有潛在心臟毒性藥物的非臨床安全性評(píng)價(jià)尋找一種更加快速、靈敏、準(zhǔn)確的動(dòng)物模型。方法(1)兩種心臟特異性CYP2E1基因修飾小鼠(Tg(+)和sTg(+))的繁殖及鑒定：PCR鑒定心臟特異性CYP2E1基因修飾小鼠的基因型,分別篩選出Tg(+)和sTg(+)小鼠進(jìn)行繁殖培育并用于本實(shí)驗(yàn)。(2)對(duì)乙酰氨基酚的急性毒性評(píng)價(jià)預(yù)試驗(yàn)：8周齡雄性Tg(+)型小鼠、sTg(+)型小鼠、野生型C57BL/6小鼠(WT),各50只,分別隨機(jī)分成2組,每組10只,溶媒對(duì)照組(灌胃給予純凈飲用水)及1個(gè)實(shí)驗(yàn)組(300 mg/kg對(duì)乙酰氨基酚)。給藥過(guò)程中進(jìn)行一般癥狀觀察；給藥3d后取血并解剖取心臟、肝臟、腎臟,測(cè)定各組實(shí)驗(yàn)小鼠血生化心臟功能指標(biāo)(乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB))、肝功能指標(biāo)(丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬門(mén)氨基酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)),腎臟功能指標(biāo)(尿素(UN)、肌酐(CREA)),以及血常規(guī)指標(biāo)；測(cè)定心臟、肝臟、腎臟臟器系數(shù)結(jié)果；并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。(3)西布曲明毒性評(píng)價(jià)：8周齡雄性Tg(+)型小鼠、sTg(+)型小鼠、野生型C57BL/6小鼠(WT),各50只,分別隨機(jī)分成5組,每組10只,溶媒對(duì)照組(灌胃給予純凈飲用水)及4個(gè)實(shí)驗(yàn)組(50、100、150、300 mg/kg西布曲明)。給藥過(guò)程中進(jìn)行一般癥狀觀察以及存活率的測(cè)定；給藥15d后取血并解剖取心臟、肝臟、腎臟,測(cè)定各組實(shí)驗(yàn)小鼠血生化心臟功能指標(biāo)(乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB))、肝功能指標(biāo)(丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬門(mén)氨基酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)),腎臟功能指標(biāo)(尿素(UN)、肌酐(CREA)):測(cè)定各臟器系數(shù)結(jié)果；并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查,以及用免疫組織化學(xué)方法觀察心臟組織縫隙蛋白43(connexin 43, CX43)的表達(dá)情況。結(jié)果(1)對(duì)乙酰氨基酚的急性毒性預(yù)試驗(yàn)：1)血生化指標(biāo)顯示,Tg(+)和WT型小鼠給藥組的肝功能指標(biāo)(ALT、AST、 ALP)、心功能指標(biāo)(CK、 LDH、 CK-MB)均不同程度地顯著高于其溶媒對(duì)照組(P0.05或P0.01),其中WT型小鼠的肝功能指標(biāo)(ALT、 AST、 ALP)升高程度最大(P0.01),而sTG(±)型小鼠的心功能指標(biāo)(CK、 CK-MB)的數(shù)值卻是降低的(P0.05)。2)病理組織學(xué)結(jié)果顯示,Tg(+)、 sTg(+)和WT型三種小鼠的給藥組均表現(xiàn)出肝臟病理變化。(2)西布曲明毒性評(píng)價(jià)：1)血生化指標(biāo)顯示,在給藥劑量50 mg/kg和100 mg/kg時(shí),Tg(+)型小鼠的心功能指標(biāo)(CK、 LDH、 CK-MB)均顯著高于WT型小鼠(P0.05或P0.01)：在給藥劑量50、100和150 mg/kg時(shí),Tg(+)型小鼠的心功能指標(biāo)(CK、LDH、 CK-MB)均顯著高于sTg(+)型小鼠(P0.05或P0.01)；而在給藥劑量300 mg/kg時(shí),Tg(±)型小鼠的心功能指標(biāo)(CK、LDH、 CK-MB)均顯著低于WT和sTg(+)型小鼠(P0.05或P0.01),且sTg(+)型小鼠減小的程度最小。2)病理組織學(xué)結(jié)果顯示,Tg(+)和WT型小鼠各個(gè)給藥組均表現(xiàn)出心臟損傷的跡象。3)免疫組織化學(xué)染色顯示,隨著給藥劑量的加大,Tg(+)、 sTg(+)和WT型三種小鼠CX43在心肌細(xì)胞閏盤(pán)處的表達(dá)數(shù)量均逐漸下降,且染色顏色逐漸變淺；而CX43在心肌細(xì)胞閏盤(pán)處的表達(dá)數(shù)量下降程度和染色顏色變淺程度由高到低分別為,Tg(+)型小鼠,其次是WT型小鼠,sTg(+)型小鼠。結(jié)論Tg(+)型小鼠在評(píng)價(jià)藥物潛在心臟毒性試驗(yàn)中可能比WT型小鼠具有更高的敏感性,而sTg(+)型小鼠則相反,可能是一個(gè)很好的心臟毒性保護(hù)模型。背景決明子(Cassiae Semen)為豆科植物或小決明的干燥成熟種子,是一味具有清熱明目、利水通便等功效的中草藥�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,決明子具有降壓、調(diào)脂、保肝等作用,常用于治療高血脂、高血壓、便秘等疾病,并被納入衛(wèi)生部頒布的“藥食同源名單”中。決明子的主要成分是蒽醌類化合物(如大黃素、大黃酚、大黃酸等),其在表現(xiàn)出廣泛藥理作用的同時(shí),也表現(xiàn)出多種毒副作用。為了研究中藥決明子原料藥的毒性,我們進(jìn)行了大鼠經(jīng)口灌胃給予不同劑量的決明子6個(gè)月及恢復(fù)期,觀察出現(xiàn)毒性反應(yīng)的靶器官,闡明長(zhǎng)期食用決明子后是否存在肝毒性、腎毒性、腸毒性等安全性隱患。方法試驗(yàn)選用SPF級(jí)SD大鼠240只,雌雄各半。購(gòu)入體重雄性：80-100g,雌性：80-100g。適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)6天后,按體重和性別隨機(jī)分為4組：高(10g生藥/kgBW)、中(2.2g生藥/kgBW、低(0.5g生藥/kgBW3個(gè)劑量組和一個(gè)對(duì)照組(純水)。給藥體積：1.0m1/100g。給藥頻率采用每周給藥6天,每天給藥1次,連續(xù)給藥6個(gè)月。給藥期間于每天上午和下午各觀察一次動(dòng)物的一般狀態(tài),定期進(jìn)行體重和攝食量的測(cè)定,在給藥第3、6個(gè)月,給藥6個(gè)月后恢復(fù)4周,禁食12～1 6小時(shí),分別剖殺20只/組,雌雄各半。腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉,從腹腔動(dòng)脈采血進(jìn)行血液學(xué)、血清生化學(xué)測(cè)定,剖檢主要臟器進(jìn)行臟器重量稱量、計(jì)算臟器重量及臟器系數(shù),并對(duì)各個(gè)劑量組全部臟器進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。結(jié)果1、大鼠連續(xù)灌胃給予決明子三個(gè)月、六個(gè)月及其恢復(fù)期的試驗(yàn)周期中,各給藥劑量組及對(duì)照組動(dòng)物給藥前、后一般狀況觀察未見(jiàn)異常,且未發(fā)生因給予決明子藥物本身引起的大鼠瀕死和死亡的毒性反應(yīng)。2、各給藥劑量組及對(duì)照組大鼠體重均增長(zhǎng),且(?)與(?)大鼠的增長(zhǎng)速度分別依次為：CN組T1組T2組T3組,并呈現(xiàn)出一定的劑量-反應(yīng)關(guān)系。3、與對(duì)照組相比,各給藥劑量組6性大鼠網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比(RET%)以及總膽紅素(TBIL)偏低,且恢復(fù)4周后,網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比(RET%)恢復(fù)正常,但T3組(?)大鼠的總膽紅素(TBIL)依舊偏低。4、T2、T3組6性大鼠的腎臟系數(shù)均不同程度地顯著性高于對(duì)照組(P0.05或P0.01)。5、連續(xù)灌胃決明子六個(gè)月后,在T1組和T2組劑量下大鼠未出現(xiàn)與供試品有關(guān)的毒理學(xué)改變,但在T3組劑量下可引起大鼠腎臟近曲小管上皮細(xì)胞內(nèi)色素沉積,并可能引起腎小管萎縮及再生,且上述現(xiàn)象在恢復(fù)4周后雖有所緩解,但仍存在。結(jié)論在本試驗(yàn)室條件下,SD大鼠連續(xù)灌胃決明子六個(gè)月,在T3組劑量下出現(xiàn)毒性的靶器官是腎臟,而T1組和T2組未出現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞色素P450 2E1 基因修飾 對(duì)乙酰氨基酚 西布曲明 藥物毒性 決明子 凍干粉 蒽醌 長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R994.4
【目錄】：

• 第一部分 心臟特異性CYP2E1基因修飾小鼠在毒理學(xué)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用4-41
• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-14
• 材料和方法14-20
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-34
• 討論34-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 第二部分 保健食品中含蒽醌類成分中藥原料的安全性評(píng)價(jià)41-74
• 中文摘要41-42
• 英文摘要42-44
• 前言44-47
• 材料和方法47-51
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-71
• 討論71-72
• 結(jié)論72-73
• 參考文獻(xiàn)73-74
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷74-75
• 英文縮略表75-78
• 致謝78-79

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1 孫超;李定國(guó);;基因修飾干細(xì)胞移植治療研究現(xiàn)狀[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2006年06期

2 胡貴舟;;生物技術(shù)與食品——確保用基因修飾方法生產(chǎn)食品的安全性[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));1992年02期

3 田楓;任波;張?jiān)气P;馬利偉;鄭振輝;;基因修飾小鼠飼養(yǎng)管理及使用過(guò)程中問(wèn)題探討[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2014年07期

4 ;《自然-遺傳學(xué)》:科學(xué)家闡明維C如何精確調(diào)控基因修飾[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年03期

5 萬(wàn)成松,范國(guó)昌,張文炳;基因修飾細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤治療[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年06期

6 王瀾;基因修飾細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤治療[J];生物技術(shù)通訊;2001年04期

7 趙志英,胡海濤,馮改豐,許杰華,張海英;人腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因修飾神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶的改善[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2005年05期

8 王濤;廖天安;王鴻;鄧偉;于大海;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植于放射治療后組織的實(shí)驗(yàn)研究[J];國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2014年02期

9 魏昌秀;陳松林;;腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子基因修飾骨髓間質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)癡呆大鼠記憶功能的影響[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年38期

10 李士玉,弭靜,曹雪濤,楊忠廣,朱學(xué)軍,張明徽;脾內(nèi)移植基因修飾鼠胎肝細(xì)胞的生物學(xué)特征[J];中華消化雜志;2001年07期

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1 葉富根;李汴生;趙秋艷;;基因修飾食品的檢測(cè)策略與方法[A];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2001年

2 楊明;高長(zhǎng)青;李力兵;;表達(dá)VEGF_(165)基因的MSCs的血管新生作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)胸心血管外科學(xué)術(shù)會(huì)議暨2007中華醫(yī)學(xué)會(huì)胸心血管外科青年醫(yī)師論壇論文集心血管外科分冊(cè)[C];2007年

3 王利平;王健民;包曉辰;莊曉萌;程輝;宋寧霞;胡曉霞;邵宇;周虹;;可誘導(dǎo)共刺激分子基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞明顯減輕小鼠急性移植物抗宿主病[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

4 姚建仁;鄭永權(quán);趙靜;董豐收;;基因修飾食品特殊安全性評(píng)價(jià)梗概[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)第三屆全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文（摘要）集[C];2001年

5 項(xiàng)紅兵;肖建斌;招偉賢;;基因修飾星形膠質(zhì)細(xì)胞移植鎮(zhèn)痛的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)疼痛學(xué)分會(huì)第七屆年會(huì)論文摘要集[C];2007年

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1 記者 齊芳;我國(guó)科學(xué)家首次闡明維C如何精確調(diào)控基因修飾[N];光明日?qǐng)?bào);2013年

2 文苑;基因修飾食品的安全性[N];廠長(zhǎng)經(jīng)理日?qǐng)?bào);2001年

3 李杰;抗原特異TCR基因修飾T細(xì)胞技術(shù)的建立和應(yīng)用[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

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1 王偉強(qiáng);IL-37b基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)DSS誘導(dǎo)的腸炎緩解作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

2 周超穎;MTB Ag85B_(199-207)和HIV-1 Env_(120-128)雙特異TCR基因修飾CD8~+ T細(xì)胞及其活性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

3 施鎮(zhèn)江;人β-NGF基因修飾的熒光小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞腦內(nèi)移植治療帕金森病的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2005年

4 張明;哺乳動(dòng)物白細(xì)胞介素10基因修飾的骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞前體在同種移植中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

5 楊明;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165基因修飾后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植于缺血心肌的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

6 楊俊杰;基因修飾在提高脂肪來(lái)源干細(xì)胞移植治療心梗療效和指導(dǎo)體內(nèi)示蹤中的應(yīng)用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2012年

7 安慶祝;bFGF基因修飾的神經(jīng)干細(xì)胞移植對(duì)腦出血大鼠的治療作用[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

8 溫茜;HGF基因修飾BMSCs治療早期股骨頭缺血性壞死的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

9 蔡志堅(jiān);TGF-beta1基因修飾的骨髓未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞來(lái)源的exosomes對(duì)小鼠炎癥性腸病的保護(hù)效果及其機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2008年

10 陳春經(jīng);慢病毒載體介導(dǎo)胰島素樣生長(zhǎng)因子-1基因修飾肌源性干細(xì)胞移植治療雌性壓力性尿失禁大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

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1 曹曉培;HGF基因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞治療閉塞性細(xì)支氣管炎的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北北方學(xué)院;2015年

2 楊春艷;基于基因修飾的骨質(zhì)疏松小鼠模型的骨微結(jié)構(gòu)分形分析研究[D];南京大學(xué);2014年

3 張朕坡;經(jīng)hBMP-2基因修飾的兔BMSCs生物學(xué)活性研究[D];鄭州大學(xué);2016年

4 裴彥宇;心臟特異性CYP2E1基因修飾小鼠在毒理學(xué)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用保健食品中含蒽醌類成分中藥原料的安全性評(píng)價(jià)[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

5 李濤;NGF基因修飾的BMSCs對(duì)VaD大鼠的作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

6 于志勇;NGF基因修飾的雪旺細(xì)胞在慢性神經(jīng)損傷后修復(fù)中的作用[D];暨南大學(xué);2010年

7 劉磊;NGF基因修飾的成纖維細(xì)胞移植修復(fù)急性脊髓損傷的試驗(yàn)研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2007年

8 鄭國(guó)富;慢病毒載體介導(dǎo)的hbFGF基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療肢體缺血的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

9 陳解元;人前腦啡肽基因修飾的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系鎮(zhèn)痛效應(yīng)的研究[D];汕頭大學(xué);2011年

10 孫瑞婷;HGF基因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞移植干預(yù)放射性腸損的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：703172