本文關(guān)鍵詞：染料木黃酮對(duì)宿主和HCMV編碼的IE基因相關(guān)microRNA表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： 人巨細(xì)胞病毒 人星形膠質(zhì)細(xì)胞 染料木黃酮 染色質(zhì)免疫共沉淀 microRNA

【摘要】：目的:1應(yīng)用染料木黃酮(genistein,Gen)作藥物,探討在人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染人星形膠質(zhì)細(xì)胞(human astrocyte,AS)中,Gen對(duì)HCMV IE基因的作用及對(duì)與主要即刻早期啟動(dòng)子(major immediate early promoter,MIEP)結(jié)合的組蛋白H3乙�；挠绊�。2探討宿主和HCMV的micro RNA(mi RNA)在Gen抗HCMV感染AS中的作用。方法:1 ASs由人神經(jīng)干細(xì)胞(human neural stem cell,NSC)分化而來(lái),HCMV于人胚肺中(human embryonic lung fibroblast,HELFs)擴(kuò)增,TCID50法測(cè)其滴度。2 Cell counting kit-8(CCK-8)實(shí)驗(yàn)測(cè)不同藥物濃度下的細(xì)胞活性與細(xì)胞毒性,以選出合適的藥物濃度。3 RT-q PCR測(cè)IE1、IE2基因及細(xì)胞mi RNA200家族、病毒mi R-UL112的表達(dá)變化。4染色質(zhì)免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)檢測(cè)與HCMV MIEP結(jié)合的組蛋白H3乙酰化的改變。結(jié)果:1 CCK-8結(jié)果顯示,10μmol/L G+V組的cck-8值均高于同時(shí)間組的V組。2形態(tài)學(xué)觀察,G組與對(duì)照組無(wú)明顯差別,V組細(xì)胞病變明顯,V+G組與G+V組的細(xì)胞狀態(tài)相對(duì)V組要好,先加藥的G+V組的細(xì)胞狀態(tài)相對(duì)后加藥的V+G組要好。3 RT-q PCR結(jié)果表明,同V組相比,10μmol/L G+V與V+G組會(huì)降低IE1、IE2基因的表達(dá)。4 RT-q PCR結(jié)果表明,同V組相比,10μmol/L G+V與V+G組能逆轉(zhuǎn)部分hsami R-200 mi RNA家族及mi R-UL112的下降。5 Ch IP結(jié)果顯示,10μmol/L G+V與V+G組會(huì)降低MIEP結(jié)合的組蛋白H3的乙�；＝Y(jié)論:1 10μmol/L的Gen能一定程度抑制HCMV感染AS所致的增殖異常。2 Gen能一定程度抑制IE1、IE2基因的表達(dá),降低病毒MIEP結(jié)合的組蛋白H3的乙�；�,并能逆轉(zhuǎn)部分宿主hsa-mi R200家族及病毒mi R-UL112的下調(diào)。Gen可能通過(guò)這些作用機(jī)理,實(shí)現(xiàn)了其抑制病毒IE蛋白的效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：人巨細(xì)胞病毒 人星形膠質(zhì)細(xì)胞 染料木黃酮 染色質(zhì)免疫共沉淀 microRNA
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料9-13
• 1.1 細(xì)胞9
• 1.2 病毒9
• 1.3 藥物9
• 1.4 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備9-10
• 1.5 主要實(shí)驗(yàn)試劑10-11
• 1.6 主要試劑配制11-13
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法13-25
• 2.1 取材與細(xì)胞培養(yǎng)13-15
• 2.2 病毒制備15-16
• 2.3 實(shí)驗(yàn)分組16
• 2.4 CCK-8 實(shí)驗(yàn)16-17
• 2.5 RT-qPCR測(cè)IE1、IE2基因及細(xì)胞miRNA200家族、病毒miR-UL112的表達(dá)變化17-22
• 2.6 ChIP實(shí)驗(yàn)22-24
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析24-25
• 第三章 結(jié)果25-34
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)與擴(kuò)病毒25-27
• 3.2 CCK-8 實(shí)驗(yàn)27-28
• 3.3 形態(tài)學(xué)觀測(cè)28-29
• 3.4 RT-qPCR檢測(cè)IE1、IE2基因的表達(dá)變化29-30
• 3.5 RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞miRNA200家族、病毒miR-UL112的表達(dá)變化30-33
• 3.6 ChIP實(shí)驗(yàn)33-34
• 第四章 討論34-37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 文獻(xiàn)綜述40-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果52-53
• 致謝53-54

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：563237