本文關(guān)鍵詞：不同兒茶素對人體血小板聚集活性的影響

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【摘要】：隨著人們生活水平的提高和飲食習(xí)慣的改變,血栓性疾病已成為威脅人們健康的首要疾病,血小板的異常激活是此類疾病的病理基礎(chǔ),抗血小板藥物成為了治療相關(guān)血栓性疾病的主要手段。流行病學(xué)及許多臨床研究表明,長期飲茶對于心血管疾病如動(dòng)脈粥樣硬化等能起到預(yù)防和治療作用,茶葉中的茶多酚尤其是兒茶素對此發(fā)揮了重要的作用。茶葉中的兒茶素按照化學(xué)結(jié)構(gòu)及空間構(gòu)型的不同,分為很多種不同的種類,其中,研究最為廣泛且在茶葉中含量最多的是表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate, EGCG)。本文基于前人的研究,選取包含EGCG在內(nèi)的六種兒茶素,分別為兒茶素(Catechin, C),表兒茶素(Epicatechin, EC),表沒食子兒茶素Epigallocatechin, EGC),兒茶素沒食子酸酯(Catechin gallate, CG),表兒茶素沒食子酸酯(Epicatechin gallate, ECG),從結(jié)構(gòu)上了比較六種兒茶素單體對血小板功能影響的差異,并對其可能的作用機(jī)制進(jìn)行了深入探索。 利用血小板激活劑ADP,凝血酶,膠原及U46619誘導(dǎo)血小板聚集,通過添加不同濃度的兒茶素預(yù)孵育血小板,測定其對血小板的聚集活性的影響。結(jié)果表明：在0-150μM的濃度范圍內(nèi),EGC、CG、ECG和EGCG呈現(xiàn)濃度依賴性地抑制由ADP引起的血小板聚集,其中,EGCG抑制作用最強(qiáng)；在由凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集中,EGCG在50μM時(shí)對血小板聚集產(chǎn)生抑制作用,其它五種兒茶素沒有表現(xiàn)出顯著的抑制效果；在U46619引起的血小板聚集中,CG和EGCG都能在50μM表現(xiàn)出對血小板的抑制作用,且作用效果CGEGCG;用膠原誘導(dǎo)血小板聚集時(shí),CG, ECG和EGCG對血小板聚集產(chǎn)生了明顯抑制,有效抑制濃度都是50μM,抑制效果：CGECGEGCG。 我們研究發(fā)現(xiàn),兒茶素對ADP引起的血小板聚集抑制效果較好,因此在ADP信號通路上繼續(xù)研究其可能存在的抗血小板作用機(jī)制。六種兒茶素分別與阿司匹林共同作用于血小板,EGC和ECG可能和阿斯匹林具有相似的作用通路,通過作用于COX-1抑制TxA2的生成起到抗血小板的作用,而CG和EGCG則可能通過除COX途徑的其它信號通路對血小板活性產(chǎn)生影響；同時(shí),EGC、CG、ECG和EGCG在100μM下都能夠顯著抑制血小板在纖維蛋白原上的鋪展,表明四個(gè)物質(zhì)可以抑制血小板從外到內(nèi)的信號通路(Outside-in signaling);用流式細(xì)胞儀檢測PAC-1和P-選擇素在血小板上的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn),只有EGCG能顯著抑制P-選擇素在血小板上的表達(dá),ECG和EGCG可以抑制PAC-1的表達(dá),抑制作用EGCGECG;免疫蛋白實(shí)驗(yàn)對ADP的信號通路進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)EGC. CG. ECG和EGCG可以抑制Akt473/308、p38、Erk和PKC基質(zhì)的部分蛋白的磷酸化；CG, ECG和EGCG可以抑制由ADP誘導(dǎo)的血小板cAMP的下降。 本研究結(jié)果表明,所選取的六種兒茶素,含有沒食子�；膬翰杷�(CG, ECG, EGCG)和不含沒食子酸但是在B環(huán)含有三羥基的ECG都具有抗血小板聚集的功效,這種特異性結(jié)構(gòu)可能成為開發(fā)一種新的抗血小板藥物的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：兒茶素單體 血小板聚集 抑制作用 ADP
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96;TQ464
【目錄】：

• 致謝6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-16
• 第1章 文獻(xiàn)綜述16-38
• 第一節(jié) 血小板及其與心血管疾病的研究16-29
• 1.1 血小板簡介16-19
• 1.1.1 血小板起源16
• 1.1.2 血小板形態(tài)16-18
• 1.1.2.1 血小板膜系統(tǒng)及其受體17
• 1.1.2.2 靜息血小板的骨架結(jié)構(gòu)17-18
• 1.1.2.3 血小板的內(nèi)含物18
• 1.1.3 血小板主要生理功能18-19
• 1.1.3.1 血小板粘附18-19
• 1.1.3.2 血小板聚集19
• 1.1.3.3 血小板釋放19
• 1.2 血小板活化機(jī)制19-24
• 1.2.1 ADP及其受體20-22
• 1.2.2 凝血酶及其受體22
• 1.2.3 膠原及其受體22-23
• 1.2.4 血栓素及其受體23-24
• 1.3 血小板活化與相關(guān)疾病24-26
• 1.3.1 血小板活化與冠心病25
• 1.3.2 血小板活化與高血壓25
• 1.3.3 血小板活化與高脂血癥25-26
• 1.4 抗血小板藥物的研究進(jìn)展26-29
• 1.4.1 阿司匹林26
• 1.4.2 西池他唑26-27
• 1.4.3 噻吩并吡啶類藥物27-29
• 第二節(jié) 茶葉中的兒茶素及其在心血管疾病的研究29-36
• 2.1 兒茶素主要特征29-33
• 2.1.1 兒茶素的基本結(jié)構(gòu)29-30
• 2.1.2 兒茶素的分類30-31
• 2.1.3 兒茶素在不同茶葉中的含量31
• 2.1.4 兒茶素在人體中的生物利用度31-32
• 2.1.5 兒茶素的結(jié)構(gòu)與生物活性之間的關(guān)系32-33
• 2.2 兒茶素與心血管疾病的研究33-36
• 2.2.1 兒茶素對心血管疾病作用的流行病學(xué)研究33
• 2.2.2 兒茶素對心血管疾病作用的機(jī)理研究33-34
• 2.2.3 兒茶素與血小板功能研究34-36
• 第三節(jié) 研究內(nèi)容及意義36-38
• 3.1 研究內(nèi)容及創(chuàng)新點(diǎn)36-37
• 3.2 研究目的及意義37-38
• 第2章 不同兒茶素對不同誘導(dǎo)劑引起的血小板聚集的影響38-53
• 2.1 材料與方法38-41
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對象38
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑38-39
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備與儀器39
• 2.1.4 試劑的配制39-40
• 2.1.4.1 抑制劑及刺激劑的配制39-40
• 2.1.4.2 血小板提取相關(guān)試劑的配制40
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)方法40-41
• 2.1.5.1 人體洗滌血小板的制備40-41
• 2.1.5.2 血小板聚集率的測定41
• 2.1.6 結(jié)果處理41
• 2.2 結(jié)果與分析41-49
• 2.2.1 不同兒茶對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的影響41-46
• 2.2.1.1 不同兒茶對低濃度ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的影響42-44
• 2.2.1.2 不同兒茶對高濃度ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的影響44-46
• 2.2.2 不同兒茶素對凝血酶,膠原及U46619誘導(dǎo)的血小板聚集的影響46-49
• 2.3 分析與討論49-52
• 2.4 小結(jié)52-53
• 第3章 不同兒茶素對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的作用機(jī)制53-71
• 3.1 試劑與方法53-61
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑53-54
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備54
• 3.1.3 相關(guān)試劑的配制54-56
• 3.1.3.1 流式細(xì)胞分析相關(guān)試劑54-55
• 3.1.3.2 蛋白提取相關(guān)試劑55
• 3.1.3.3 Western相關(guān)試劑55-56
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法56-60
• 3.1.4.1 阿司匹林和兒茶素對血小板聚集的影響57
• 3.1.4.2 血小板在纖維蛋白原上的鋪展57
• 3.1.4.3 全血流式細(xì)胞儀的分析57-58
• 3.1.4.4 免疫印跡法58-60
• 3.1.4.5 cAMP的檢測60
• 3.1.5 結(jié)果處理60-61
• 3.2 結(jié)果與分析61-68
• 3.2.1 兒茶素與阿斯匹林對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的作用61-62
• 3.2.2 不同兒茶素對血小板在纖維蛋白原上鋪展的作用62-64
• 3.2.3 不同兒茶素對P-選擇素和PAC-1的影響64-65
• 3.2.4 不同兒茶素對ADP信號通路的影響65-67
• 3.2.5 不同兒茶素對cAMP的影響67-68
• 3.3 分析與討論68-70
• 3.4 小結(jié)70-71
• 第4章 結(jié)論與展望71-74
• 4.1 結(jié)論71-73
• 4.2 展望73-74
• 參考文獻(xiàn)74-80

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：555368