本文關(guān)鍵詞：新化學(xué)結(jié)構(gòu)真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物的抗腫瘤活性篩選及作用研究

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【摘要】：多硫代二酮哌嗪(ETP)類化合物是由真菌產(chǎn)生的一類次級(jí)代謝產(chǎn)物,其結(jié)構(gòu)新穎、立體化學(xué)結(jié)構(gòu)獨(dú)特、骨架類型多樣,因此ETP類化合物的生物活性研究一直備受關(guān)注�，F(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)ETP具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌以及免疫抑制等作用。ETP類化合物的抗腫瘤效應(yīng)顯示出一定的靶向性,如可以通過(guò)激活p53信號(hào)通路誘導(dǎo)細(xì)胞周期發(fā)生G2/M期阻斷、抑制酪氨酸激酶活性以及抑制腫瘤組織新生血管的形成。本所研究人員在真菌中提取到八種新化學(xué)結(jié)構(gòu)的ETP類真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物(C80、C86、C87、 662、DR56-1、DR56-52、zw-2、DS56-10),其抗腫瘤活性有待檢驗(yàn)。本研究擬在細(xì)胞水平進(jìn)行抗腫瘤活性的初步篩選,在此基礎(chǔ)上對(duì)活性較好的化合物進(jìn)行體內(nèi)外抗腫瘤作用評(píng)價(jià),并同時(shí)開(kāi)展活性化合物抗腫瘤作用機(jī)制的研究。實(shí)驗(yàn)方法：(1)以磺酰羅丹明B(SRB)法觀察ETP類化合物對(duì)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞存活率的影響,并計(jì)算50%生長(zhǎng)抑制濃度(GI50)。(2)在裸鼠異種移植瘤模型上評(píng)價(jià)化合物C87的體內(nèi)抗腫瘤作用。(3)建立以實(shí)時(shí)細(xì)胞分析(RTCA)系統(tǒng)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)情況的方法,評(píng)價(jià)化合物C87對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響。(4)以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)C87對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生、細(xì)胞周期、線粒體膜電位、以及對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。(5)通過(guò)用比色法檢測(cè)帶有生物素標(biāo)簽的AP位點(diǎn)來(lái)評(píng)價(jià)C87對(duì)DNA損傷的影響。(6)采用Western Blot方法檢測(cè)C87對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)分子蛋白表達(dá)水平的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：(1)本研究首先在HeLa、HCT116、SMMC7721、A549、 H460、H1993、H157、MDA-MB-231等多種腫瘤細(xì)胞系上,評(píng)價(jià)了八種新化學(xué)結(jié)構(gòu)的真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物(C80、C86、C87、662、DR56-1、DR56-52、 zw-2、DS56-10)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響,發(fā)現(xiàn)ETP類化合物C80、C86、C87對(duì)上述幾種細(xì)胞系均具有不同程度的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制活性,其他五種化合物則作用不明顯。(2)以化合物C87為主要研究對(duì)象,結(jié)果顯示C87能抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖,具有濃度及時(shí)間依賴性；并且能夠一定程度地抑制裸鼠體內(nèi)移植瘤的生長(zhǎng)增殖,抑瘤率為33.22%。(3)化合物C87可時(shí)間及濃度依賴性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生。伴隨給予抗氧化劑NAC后能明顯抑制C87引起的細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生,并且NAC可以明顯逆轉(zhuǎn)C87引起的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用。(4)化合物C87可以濃度依賴性誘導(dǎo)細(xì)胞周期G0/G1期阻滯,上調(diào)p53蛋白表達(dá)。(5)化合物C87可以濃度依賴性誘導(dǎo)細(xì)胞線粒體膜電位下降。(6)化合物C87可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,具有濃度及時(shí)間依賴性,伴隨給予抗氧化劑NAC后能明顯抑制C87引起的細(xì)胞凋亡。(7)化合物C87可以誘導(dǎo)細(xì)胞色素C釋放,啟動(dòng)Caspase-8,使Caspase-3活化,促進(jìn)PARP裂化。結(jié)論：從八種新化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物中篩選出抗腫瘤作用明顯的三個(gè)ETP類化合物C80、C86、C87,因其母核結(jié)構(gòu)相同且作用效果相當(dāng),因此以C87為主要研究對(duì)象,發(fā)現(xiàn)其對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用,呈濃度及時(shí)間依賴性。其抗腫瘤作用機(jī)制可能有以下幾種：(1)C87可能通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞生成過(guò)量ROS,引起細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激及DNA損傷,最終使細(xì)胞生長(zhǎng)受抑或誘發(fā)凋亡；(2)C87可能通過(guò)上調(diào)p53蛋白的表達(dá),阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期,從而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)增殖；(3)C87可能通過(guò)破壞線粒體膜電位,使線粒體通透性增加,誘導(dǎo)細(xì)胞色素C釋放,啟動(dòng)Caspase-8,使Caspase-3活化,促進(jìn)PARP的裂化,最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。
【關(guān)鍵詞】：真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物 多硫代二酮哌嗪類化合物 C87 腫瘤 生長(zhǎng)抑制
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R915
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-17
• 第一章 八種真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物抗腫瘤活性的初步篩選17-30
• 一、材料19
• 二、方法19-24
• 三、結(jié)果24-28
• 四、討論28-30
• 第二章 化合物C87體內(nèi)外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)及可能機(jī)制30-81
• 一、材料31-32
• 二、方法32-52
• 三、結(jié)果52-76
• 四、討論76-81
• 全文總結(jié)81-83
• 參考文獻(xiàn)83-90
• 綜述90-104
• 參考文獻(xiàn)96-104
• 致謝104-105
• 在讀期間發(fā)表文章105-106
• 附件106-112

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1 楊燁;王e，

本文編號(hào)：531519