本文關鍵詞：IMM-H007臨床前藥物代謝動力學研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：IMM-H007是一種新型調血脂化合物,化學結構為腺苷類似物。藥理學研究表明,IMM-H007可抑制十八烯酸誘導的脂肪性病變HepG2細胞內脂質的堆積。體內藥效學研究發(fā)現(xiàn),IMM-H007可降低高脂血癥金黃地鼠升高的血清甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白和肝臟甘油三酯、總膽固醇水平。機制研究提示,IMM-H007可以上調十八烯酸誘導的脂肪病變HepG2細胞內或高脂血癥金黃地鼠肝細胞內AMPK的磷酸化水平,是一種新型AMP-激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)激活劑。前期藥物代謝動力學研究表明,IMM-H007在體內首先經酯酶發(fā)生水解反應,生成的水解產物M1進入細胞后經磷酸化反應生成MP(M1的5’-磷酸化產物),或發(fā)生脫氧、脫核糖環(huán)反應或Ⅱ相結合反應。由于MP的結構與內源性5’-磷酸腺苷(adenosine monophosphate, AMP)極其相似,而AMP是AMPK的有效激活劑,因此推測MP可能為IMM-H007激活靶酶AMPK的活性代謝物。由此可見, IMM-H007作為一種與他汀類藥物化學結構、作用靶點和代謝途徑不同的新型調血脂化合物,有望成為預防和治療心血管疾病的新藥。本研究按照臨床前藥代動力學研究指導原則,建立了生物樣品中IMM-H007的LC-MS/MS分析方法。應用LC-MS/MS方法進行了金黃地鼠口服和舌下靜脈注射IMM-H007后的體內吸收、分布、代謝和排泄的藥代動力學特征研究；研究了IMM-H007與不同種屬動物及人的血漿蛋白結合；鑒定了參與IMM-H007代謝的血漿酯酶及體內外主要代謝產物；探討了IMM-H007與藥物代謝酶的相互作用以及在Caco-2細胞中的轉運。為揭示藥物在體內的動態(tài)變化規(guī)律及種屬差異,闡明藥效作用的物質基礎及預測潛在的藥物相互作用提供實驗依據。研究結果表明：1.生物樣品中IMM-H007測定方法(LC-MS/MS)的建立根據臨床前藥代動力學指導原則,建立了生物樣品中IMM-H007及代謝產物M1和MP的HPLC-MS/MS分析方法。結果表明,各檢測物質在金黃地鼠全血中均未見明顯基質和雜質干擾,IMM-H007、M1和MP分別在I～500、2～1000和10～5000 ng/mL濃度范圍內線性關系良好。各待測物質日內和日間精密度相對標準差均小于15%,準確度在±14.2%之間。IMM-H007、M1和MP的低、中、高3個質控濃度的全血樣品回收率分別為83.58～102.13%、84.29～95.27%和77.72～91.13%,基質效應為69.20-109.44%。質控樣品在冰浴放置1 h、處理后樣品進樣池放置24 h、長期放置(-80℃放置20天)和反復凍融3次等條件下均穩(wěn)定。該方法簡便、可靠、靈敏度高、特異性強,可滿足IMM-H007的臨床前藥代動力學研究。2.金黃地鼠口服和舌下靜脈注射IMM-H007的體內藥代動力學研究雄雌金黃地鼠單次口服IMM-H007后吸收較快,各劑量組給藥后5 min血中即可檢測到代謝產物M1和MP,給藥后12～36 h代謝產物Ml和MP血藥濃度接近檢測限。各時間點原型藥濃度均接近和低于檢測限。雄性金黃地鼠口服不同劑量IMM-H007(50、150、450、900mg/kg)后,代謝產物M1的Cmax分別為34.18±10.46、81.95±28.28、122.6±32.9和205.8±60.0 ng/mL, T1/2分別為1.38±0.08、4.25±1.17、6.20±0.66、3.68±0.84 h,AUC(0-t)分別為143.4±13.0、412.7±121.8、991.3±232.3和2344.1±859.1μg/L*h, MRT(0-t)分別為2.81±0.18、4.20±0.64、6.75±0.95和7.50±0.97 h；代謝產物MP的Cmax分別為437.0±57.2、1122.4±271.0、1575.2±205.8和1835.9±406.6 ng/mL,T1/2分別為1.43±0.60、5.13±0.99、7.29±0.39、4.93±0.81 h,AUC(o-t)分別為2108.1±443.2、5788.8±1024.0、13248.5±2431.0和23014.6±6846.7μg/L*h, MRT(0-t)分別為3.27±0.83、5.01±0.64、7.04±0.82和8.11±0.87 h。雄鼠口服IMM-H007后全血中代謝物M1和MP的Cmax和AUC(0-t)隨劑量增加而遞增,MRT(0-t)隨劑量增加略有延長,在50-900mg/kg劑量范圍內代謝產物M1和MP在體內基本呈線性動力學過程。雌性金黃地鼠口服不同劑量IMM-H007 (50、150、450、900mg/kg)后,代謝產物M1的Cmax分別為29.84±3.09、51.39±7.95、132.4±38.9和184.9±50.4 ng/mL,T1/2分別為1.31±0.39、1.84±0.32、2.61±0.72、3.73±0.45 h,AUC(0-t)分別為72.06±15.10、294.7±101.7、1032.5±476.3和1580.3±428.0μg/L*h, MRT(0-t)分別為1.60±0.27、3.64±0.68、5.64±1.94和6.37±1.03 h；MP的Cmax分別為425.8±72.3、909.4±144.1、1894.7±395.0和2451.5±350.6 ng/mL,T1/2分別為1.21±0.06、3.54±0.64、6.70±2.70、9.65±2.79 h,AUC(0-t)分別為1307.1±268.4、5960.1±1866.5、16121.6±3884.7和24132.5±5026.8μg/L*h, MRT(0-t)分別為2.12±0.26、4.62±0.46、6.71±1.36和7.21±0.67 h。雌鼠口服IMM-H007后全血中代謝物M1和MP的Cmax和AUC(0-t)隨劑量增加而遞增,T1/2和MRT(0-t)隨劑量增加略有延長,在50～900 mg/kg劑量范圍內代謝產物Ml和MP在體內基本呈線性動力學過程,未見明顯的性別差異。以M1和MP之和計算雄性金黃地鼠口服IMM-H007 (50 mg/kg)后的生物利用度為6.96%,雌性金黃地鼠的生物利用度為8.88%。雄雌性金黃地鼠口服IMM-H007 (50 mg/kg)后體內分布廣泛。雄鼠給藥0.25 h后原型藥在各組織中濃度自高向低排序為：小腸胃附睪肌肉心臟肺脾肝腎睪丸脂肪腦全血,給藥2h后原型藥在各組織中濃度自高向低排序為：肌肉肺脾小腸胃腦心臟附睪睪丸腎=脂肪肝,全血中藥物濃度低于最低定量限,給藥8h后原型藥在各組織中濃度自高向低排序為：腎脾胃附睪肝,心臟、小腸、腦、脂肪、睪丸、肌肉、肺和全血中藥物濃度低于最低定量限；給藥0.25 h后M1在各組織中濃度自高向低排序為：小腸胃肝腦腎心臟肺附睪脂肪附睪脾肌肉全血,給藥2h后M1在各組織中濃度自高向低排序為：肝小腸腦腎胃心臟肺脾附睪全血肌肉睪丸脂肪,給藥8h后M1在各組織中濃度自高向低排序為：肝腦小腸胃腎心臟脾肺附睪睪丸脂肪肌肉,全血中藥物濃度低于最低定量限；給藥0.25 h后MP在各組織中濃度自高向低排序為：肝全血小腸胃腎肺肌肉脾,心臟、腦、脂肪、睪丸、附睪中藥物濃度均低于最低定量限,給藥2h后MP在各組織中濃度自高向低排序為：全血肝臟肌肉脾,其它組織中藥物濃度均低于最低定量限,給藥8h后MP在各組織中濃度自高向低排序為：脾肝肌肉全血腎腦附睪,胃、心臟、小腸、睪丸、脂肪、肺中藥物濃度均低于最低定量限。雌性金黃地鼠給藥0.25 h后原型藥在各組織中濃度自高向低排序為：小腸胃心臟卵巢肺肌肉脾子宮腎全血脂肪腦,肝臟中藥物濃度低于最低定量限,給藥1h后原型藥在各組織中濃度自高向低排序為：胃小腸子宮卵巢心臟脾肺,腦、脂肪、肌肉、腎、肝、全血中藥物濃度低于最低定量限,給藥6h后原型藥在除子宮外的其它組織中濃度均低于最低定量限；給藥0.25 h后M1在各組織中濃度自高向低排序為：小腸胃肝腎卵巢心臟肺脾肌肉子宮脂肪腦全血,給藥1h后M1在各組織中濃度自高向低排序為：肝胃小腸腎子宮肌肉心臟肺脾脂肪卵巢脾全血,給藥6h后M1在各組織中濃度自高向低排序為：肝腎小腸心臟子宮脾胃肺卵巢腦,肌肉、脂肪、全血中藥物濃度低于最低定量限；給藥0.25 h后MP在各組織中濃度自高向低排序為：肝全血脾肺腎肌肉,其它組織中藥物濃度低于最低定量限,給藥1h后MP在各組織中濃度白高向低排序為：肝全血肌肉小腸肺脾腎子宮,腦、脂肪、卵巢、心臟、腎、胃中藥物濃度低于最低定量限,給藥6h后MP在各組織中濃度自高向低排序為：肝肺肌肉全血腎脾,腦、脂肪、子宮、卵巢、心臟、胃、小腸中藥物濃度低于最低定量限。IMM-H007及其代謝產物在消化道、肌肉、心臟、肝臟、腎等組織分布較多,而在腦、脂肪、卵巢、子宮、脾、肺等組織分布較少,代謝產物M1在體內各組織中的濃度顯著高于MP。雌雄金黃地鼠的組織分布趨勢基本相同,無明顯性別差異。雄雌金黃地鼠口服IMM-H007 (50mg/kg)后糞便和尿液中的原型藥低于檢測線,可檢測到六種代謝產物,分別為M228、M244、M34、M404、M440和M536,其中M228、M244和M404含量較高,M536,M344和M440含量較少。給藥后96h內,雄雌金黃地鼠糞、尿中六種代謝產物的總回收率為90.34%和75.03%,其中糞中的排泄量占給藥量的67.70%和59.10%,尿中的排泄量占給藥量的22.64%和15.93%,提示IMM-H007主要經糞排泄。3. IMM-H007血漿主要代謝產物M1與小鼠、大鼠、猴、犬和人的血漿蛋白結合IMM-H007在血漿中不穩(wěn)定,可轉化為代謝產物M1,因此本研究考察了代謝產物M1與不同種屬動物和人的血漿蛋白結合率。實驗結果表明,M1與人、食蟹猴、比格犬、金黃地鼠、SD大鼠和C57小鼠血漿蛋白的結合率均高于90%,無明顯濃度依賴性,不同種屬未見明顯差異。4. IMM-H007體內外生物轉化研究IMM-H007、M1和MP在人工胃液、人工腸液和Tris-HCl緩沖液中穩(wěn)定性良好。IMM-H007和MP在體外不同種屬動物和人血漿中不穩(wěn)定,可水解生成M1。IMM-H007、M1和MP在體外不同種屬動物和人全血中均不穩(wěn)定,原型藥在全血中可生成M1和MP,代謝產物M1和MP會相互轉化。在體外不同種屬動物和人肝微粒體中,IMM-H007和MP的轉化與其在血漿中的結果一致,且不依賴NADPH,提示IMM-H007在肝微粒體中的轉化不依賴CYPs。本研究應用抑制劑法對不同種屬動物和人血漿催化IMM-H007水解的酯酶種類進行了初步鑒定。結果表明,金黃地鼠和大鼠血漿催化IMM-H007水解的主要酯酶為CE、Arylesterase、BChE和絲氨酸酯酶；犬血漿催化IMM-H007水解的主要酯酶為Arylesterase、BChE絲氨酸酯酶；人和猴血漿催化IMM-H007水解的主要酯酶為BChE、AChE、PON、絲氨酸酯酶和Arylesterase o前期研究結果提示,代謝產物MP是代謝產物M1在紅細胞內轉化生成。將M1與金黃地鼠、食蟹猴和人紅細胞(人血小板)懸浮液共同溫孵后,紅細胞內和溫孵液中有MP生成,紅細胞內MP生成的量顯著高于溫孵液中,血小板內和溫孵液中幾乎檢測不到MP生成,提示紅細胞可能是MP生成和儲存的主要場所。不同種屬動物和人紅細胞中MP的生成速率為食蟹猴人金黃地鼠。5. IMM-H007對金黃地鼠肝臟藥物代謝酶的誘導和抑制作用IMM-H007(50μM)對SD大鼠、金黃地鼠、食蟹猴和人肝微粒體CYP3A2/4、 CYP1A2、CYP2C6/9、CYP2D6、CYP2E1、CYP2C11/19酶活性無明顯抑制作用。金黃地鼠口服IMM-H007(50 mg/kg)每日一次連續(xù)七日后,對肝CYPs主要同工酶活性無明顯誘導和抑制作用。6. IMM-H007經Caco-2細胞的轉運IMM-H007和代謝產物M1在Caco-2細胞的轉運具有方向性,提示IMM-H007可能為P-gp的底物。
【關鍵詞】：IMM-H007 藥代動力學 生物轉化
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R969.1
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 摘要7-11
• Abstract11-17
• 前言17-19
• 第一節(jié) 生物樣品中IMM-H007測定方法(LC-MS/MS)的建立19-36
• 1. 實驗材料19-20
• 2. 實驗方法20-23
• 3. 實驗結果23-35
• 3.1 專屬性23-27
• 3.2 線性范圍和靈敏度27-30
• 3.3 精密度與準確度30-32
• 3.4 回收率32
• 3.5 基質效應32-33
• 3.6 穩(wěn)定性33-35
• 4. 討論35-36
• 第二節(jié) 金黃地鼠口服和舌下靜脈注射IMM-H007的體內藥代動力學研究36-62
• 1. 實驗材料36
• 2. 實驗方法36-37
• 3. 實驗結果37-60
• 3.1. 金黃地鼠口服IMM-H007后的全血藥代動力學37-46
• 3.2. 金黃地鼠舌下靜脈注射IMM-H007后的全血藥代動力學及生物利用度46-49
• 3.3. 金黃地鼠口服IMM-H007后體內各主要臟器和組織的分布49-57
• 3.4. 金黃地鼠口服IMM-H007后自糞便、尿液的排泄57-60
• 4. 討論60-62
• 第三節(jié) IMM-H007在血漿中主要代謝產物與人、食蟹猴、比格犬、金黃地鼠、SD大鼠、C57小鼠的血漿蛋白結合62-65
• 1. 材料62
• 2. 實驗方法62-64
• 3. 實驗結果64
• 4. 討論64-65
• 第四節(jié) IMM-H007體外生物轉化研究65-92
• 1. 材料65
• 2. 實驗方法65-70
• 3. 實驗結果70-90
• 3.1. IMM-H007在金黃地鼠體內生物樣品代謝產物鑒定70-74
• 3.2. IMM-H007及其代謝產物的體外穩(wěn)定性74-85
• 3.3. 不同種屬血漿中IMM-H007轉化為M1的酯酶歸屬85-86
• 3.4. 不同種屬動物和人紅細胞中MP的生成86-90
• 4. 討論90-92
• 第五節(jié) IMM-H007對金黃地鼠肝臟藥物代謝酶的誘導和抑制作用92-102
• 1. 材料92
• 2. 實驗方法92-94
• 3. 實驗結果94-100
• 3.1. IMM-H007體外對SD大鼠、金黃地鼠、食蟹猴和人肝微粒體CYPs的抑制作用94-99
• 3.2. IMM-H007口服給藥對金黃地鼠肝微粒體CYPs的誘導作用99-100
• 4. 討論100-102
• 第六節(jié) IMM-H007經Caco-2細胞的轉運102-107
• 1. 材料102-103
• 2. 實驗方法103-105
• 3. 實驗結果105
• 4. 討論105-107
• 結論107-108
• 參考文獻108-111
• 附錄111-112
• 致謝112-113

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  本文關鍵詞：IMM-H007臨床前藥物代謝動力學研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：462771