目的:研究NADPH氧化酶（NOX4）抑制劑GLX351322抑制腫瘤相關(guān)成纖維細胞（CAFs）形成的作用和機制。方法:小鼠成纖維細胞NIH3T3和肝癌H22共培養(yǎng),5μmol/L(IC₅₀)的GLX351322進行NIH3T3預(yù)處理。CCK-8法檢測成纖維細胞的活力,PI染色后流式細胞術(shù)檢測細胞周期的改變,免疫熒光染色檢測CAFs標志物α-SMA和FAP的表達,蛋白免疫印跡（Western blot）法檢測CAFs標志物α-SMA、Desmin、FAP、TSP-1、FSP、CyclinD的表達水平以及TGF-β1、Smad1的表達。H22構(gòu)建荷瘤小鼠模型后,GLX351322處理,免疫組織化學(xué)染色檢測腫瘤組織中α-SMA的表達情況以及CAFs標志物的表達水平。結(jié)果:GLX351322預(yù)處理后可以抑制NIH3T3的增殖,細胞活力下調(diào),周期改變。同時可以下調(diào)CAFs標志物α-SMA、Desmin、FAP、TSP-1、FSP、CyclinD的表達,且TGF-β信號受到抑制。而在荷瘤小鼠模型中,GLX351322也可以顯著抑制α-SMA的表達以及CAFs標志物的表達水平...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料和細胞
    1.2 細胞培養(yǎng)及實驗分組
    1.3 成纖維細胞轉(zhuǎn)化CAFs的檢測指標
        1.3.1 CCK-8法檢測細胞活力
        1.3.2 PI染色-流式細胞術(shù)檢測細胞周期的改變
        1.3.3 細胞免疫熒光染色檢測α-SMA和FAP的表達
        1.3.4 Western blot法檢測CAF標志蛋白的表達
    1.4 荷瘤小鼠模型的構(gòu)建及GLX351322的干預(yù)
    1.5 小鼠腫瘤組織免疫組織化學(xué)染色
    1.6 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 GLX351322對于NHI3T3細胞活力及周期改變的影響
    2.2 GLX351322對于CAFs標志蛋白表達的影響
    2.3 CAFs標志物α-SMA和FAP的免疫熒光染色結(jié)果
    2.4 小鼠腫瘤組織中α-SMA的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
    2.5 小鼠腫瘤組織中CAFs標志物的表達結(jié)果
3 討論



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