目的:研究鈣激活中性蛋白酶(Calpain)抑制劑Calpeptin對雌二醇(E2)誘導人乳腺上皮細胞MCF-10A轉(zhuǎn)化及干性標志物表達的影響,并探討其作用機制。方法:以人乳腺上皮細胞MCF-10A為研究對象,采用E2誘導制備轉(zhuǎn)化細胞模型。將細胞分為對照組[0.1%二甲基亞砜(DMSO)]、E2轉(zhuǎn)化組(50 nmol/L)、E2轉(zhuǎn)化+Calpeptin組(50 nmol/L E2+1μmol/L Calpeptin),以相應含藥培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)15代。然后采用MTT法檢測細胞的增殖率(24、48 h),采用平板克隆試驗檢測細胞的克隆形成率,采用懸浮成球試驗檢測細胞的成球數(shù);采用實時熒光定量-聚合酶鏈式反應法檢測細胞中干性標志物(CD44、Nanog、OCT4)和細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)m RNA表達水平,并采用Western blotting法檢測細胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK和磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表達水平。另取E2轉(zhuǎn)化細胞分為對照組(0.1%DMSO)和U0126(ERK抑制劑)組(10μmol/L),按上述方法測定細胞的克隆形成率、成球數(shù)以及細胞中CD44...

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圖1各組細胞的形態(tài)學特征顯微圖（×200)

細胞形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，E2轉(zhuǎn)化組細胞形態(tài)發(fā)生了明顯變化，細胞呈長梭形貼壁生長，細胞體積變大，具有一定的間質(zhì)細胞樣特征；E2轉(zhuǎn)化+Calpeptin組細胞形態(tài)與對照組接近。各組細胞形態(tài)學特征顯微圖見圖1。3.2Calpeptin對E2轉(zhuǎn)化細胞增殖能力的影響

圖2各組細胞克隆形成情況平板圖

與對照組比較，E2轉(zhuǎn)化組細胞的克隆形成率顯著升高（P<0.01）；與E2轉(zhuǎn)化組比較，E2轉(zhuǎn)化+Calpeptin組細胞的克隆形成率顯著降低（P<0.01）。各組細胞克隆形成情況平板圖見圖2，克隆形成率測定結(jié)果見表3。3.4Calpeptin對E2轉(zhuǎn)化細胞自我更新能力的影響

圖3各組細胞成球情況顯微圖（×40)

與對照組比較，E2轉(zhuǎn)化組細胞的成球數(shù)顯著增加（P<0.01）；與E2轉(zhuǎn)化組比較，E2轉(zhuǎn)化+Calpeptin組細胞的成球數(shù)顯著減少（P<0.05）。各組細胞成球情況顯微圖見圖3，成球數(shù)測定結(jié)果表4。3.5Calpeptin對E2轉(zhuǎn)化細胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK....

圖4各組細胞中CD44、Nanog、OCT4、ERK、p-ERK蛋白表達電泳圖

與對照組比較，E2轉(zhuǎn)化組細胞中CD44、Nanog、OCT4和p-ERK蛋白的表達水平均顯著升高（P<0.01）；與E2轉(zhuǎn)化組比較，E2轉(zhuǎn)化+Calpeptin組細胞中CD44、Nanog、OCT4、p-ERK蛋白的表達水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01);3組細胞中ER....

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