研究背景：骨肉瘤(Osteosarcoma)源于間葉組織,是以能產(chǎn)生骨樣組織的梭形基質(zhì)細(xì)胞為特征的惡性腫瘤,是原發(fā)性惡性骨腫瘤中最常見、惡性程度最高的一類骨腫瘤,好發(fā)于兒童和青少年期。在手術(shù)切除的基礎(chǔ)上輔助阿霉素(Adriamycin, ADR)藥物為主的聯(lián)合化療是目前臨床主要治療手段。盡管新型輔助化療的應(yīng)用極大地提高了骨肉瘤患者的5年存活率,但是骨肉瘤患者的預(yù)后一直很差,長期生存率仍徘徊不前。骨肉瘤易復(fù)發(fā)、易轉(zhuǎn)移及患者對(duì)包括阿霉素在內(nèi)的化療藥物產(chǎn)生原發(fā)或繼發(fā)性耐藥是目前導(dǎo)致臨床化療失敗的主要原因。根據(jù)腫瘤干細(xì)胞理論,骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞具有自我更新、強(qiáng)致瘤性、多向分化潛能、產(chǎn)生異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞及多重耐藥性的生物學(xué)特征,因此骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞的存在可能是臨床化療失敗的關(guān)鍵原因之一。如果可以特異性的針對(duì)骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞,尤其是化療作用下骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞相關(guān)特性的改變,可為深入認(rèn)識(shí)骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展提供新方向,并以此為基礎(chǔ)尋找和發(fā)現(xiàn)靶向骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞的藥物,對(duì)于骨肉瘤的最終治愈具有不可估量的前景和價(jià)值。本論文通過考察一線化療藥物阿霉素對(duì)骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞特性和轉(zhuǎn)移能力的影響,發(fā)現(xiàn)人類Kruppel樣...

【文章頁數(shù)】：148 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
目次
緒論
第一部分 阿霉素影響骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞特性及轉(zhuǎn)移能力的作用及機(jī)制研究
    1.1 引言
    1.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        1.2.1 細(xì)胞株和病人原代樣本
        1.2.2 質(zhì)粒
        1.2.3 藥物與主要試劑
        1.2.5 實(shí)驗(yàn)儀器與主要材料
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.2 SRB法檢測
        1.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測骨肉瘤細(xì)胞表面抗原CD133表達(dá)情況
        1.3.4 干細(xì)胞球的培養(yǎng)
        1.3.5 Real-time PCR測定細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)水平的變化
        1.3.6 細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)
        1.3.7 Transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        1.3.8 Western Blotting檢測相關(guān)蛋白表達(dá)水平
        1.3.9 SiRNA技術(shù)沉默骨肉瘤KHOS/NP細(xì)胞的Klf-4
        1.3.10 慢病毒的包裝、滴度測定及靶細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.3.11 數(shù)據(jù)分析
    1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.4.1 ADR對(duì)骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞特性的影響
        1.4.2 ADR對(duì)骨肉瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響
        1.4.3 ADR對(duì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的影響
        1.4.4 Klf-4對(duì)ADR促進(jìn)的骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞特性的影響
        1.4.5 Klf-4對(duì)ADR促進(jìn)的骨肉瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響
    1.5 討論
第二部分 Klf-4調(diào)控骨肉瘤脾瘤干細(xì)胞特性及轉(zhuǎn)移能力的作用研究
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.2.1 細(xì)胞株
        2.2.2 質(zhì)粒
        2.2.3 藥物與主要試劑
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)儀器及主要材料
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測細(xì)胞增殖活性
        2.3.3 干細(xì)胞球的培養(yǎng)
        2.3.4 細(xì)胞周期和凋亡檢測
        2.3.5 細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)
        2.3.6 Transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        2.3.7 Western Blotting檢測相關(guān)蛋白表達(dá)水平
        2.3.8 SRB法檢測
        2.3.9 qRT-PCR測定相關(guān)基因表達(dá)水平的變化
        2.3.10 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.3.11 慢病毒的包裝、滴度測定及靶細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3.12 SiRNA技術(shù)沉默骨肉瘤KHOS/NP細(xì)胞的Klf-4和p38
        2.3.13 軟瓊脂糖克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.3.14 裸小鼠異位移植瘤模型評(píng)價(jià)骨肉瘤細(xì)胞成瘤能力
        2.3.15 基因芯片分析
        2.3.16 數(shù)據(jù)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 Klf-4在不同骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況
        2.4.2 Klf-4的蛋白對(duì)骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞特性的影響
        2.4.3 Klf-4的蛋白對(duì)骨肉瘤細(xì)胞周期和增殖能力的影響
        2.4.4 Klf-4的蛋白對(duì)骨肉瘤細(xì)胞化療敏感性的影響
        2.4.5 Klf-4的蛋白表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響
        2.4.6 p38 MAPK信號(hào)通路對(duì)Klf-4調(diào)控的骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞特性的影響
    2.5 討論
第三部分 辛伐他汀通過抑制Klf-4蛋白拮抗ADR促進(jìn)的骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞特性
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.2.1 細(xì)胞株
        3.2.2 質(zhì)粒
        3.2.3 藥物與主要試劑
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.5 實(shí)驗(yàn)儀器與主要材料
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測骨肉瘤細(xì)胞表面抗原CD133表達(dá)情況
        3.3.3 干細(xì)胞球培養(yǎng)
        3.3.4 Real-time PCR測定細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)水平的變化
        3.3.5 細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)
        3.3.6 Transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        3.3.7 Western Blotting檢測相關(guān)蛋白表達(dá)水平
        3.3.8 慢病毒包裝、滴度測定及靶細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.3.9 裸小鼠異位移植瘤模型評(píng)價(jià)骨肉瘤細(xì)胞成瘤能力
        3.3.10 免疫組化
        3.3.11 移植瘤的免疫熒光染色
        3.3.12 數(shù)據(jù)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 他汀類藥物可以抑制Klf-4蛋白進(jìn)而影響細(xì)胞sphere形成能力
        3.4.2 辛伐他汀藥物可以拮抗ADR促進(jìn)的骨肉瘤腫瘤干細(xì)胞特性
        3.4.3 辛伐他汀藥物可以拮抗ADR促進(jìn)的骨肉瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力
        3.4.4 辛伐他汀通過抑制Klf-4拮抗ADR所促進(jìn)的骨肉瘤細(xì)胞成瘤性
    3.5 討論
參考文獻(xiàn)
綜述 腫瘤干細(xì)胞研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
作者簡歷及在學(xué)期間所獲得的科研成果



本文編號(hào)：3886934