目的探討吡格列酮抑制西羅莫司靶蛋白(mTOR)通路促進糖尿病大鼠下肢血管新生的作用。方法以自發(fā)性糖尿病大鼠行右側股動脈結扎離斷術建立急性下肢缺血模型,并隨機分為模型組和實驗組,另取SD大鼠作為空白組。第15天時將各組大鼠處死,分離股動脈內(nèi)皮細胞�？瞻捉M和模型組給予空白血清進行培養(yǎng),實驗組給予含15%鹽酸吡格列酮血清進行培養(yǎng)。用逆轉錄聚合酶鏈反應檢測mTOR mRNA、自噬效應蛋白(Beclin-1)mRNA、自噬相關蛋白5(Atg5)和微管相關蛋白1輕鏈3(LC3)mRNA的表達水平,用噻唑藍法檢測細胞的增殖情況。結果干預48 h后,空白組、模型組和實驗組的mTOR mRNA分別為1.00±0.14,2.98±0.90和1.18±0.11,LC3 mRNA分別為1.00±0.06,0.71±0.07和0.91±0.10,Beclin-1 mRNA分別為1.00±0.28,0.72±0.16和0.93±0.17,Atg5 mRNA分別為1.00±0.18,0.75±0.19和0.97±0.19,細胞增殖情況(光密度)分別為0.80±0.02,0.59±0.01和0.72±0.03,模型組...

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【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
    2 實驗方法
        2.1 模型構建
        2.2 吡格列酮含藥血清制備[5]
        2.3 動物分組與給藥方法
        2.4 主要觀察指標
            2.4.1 用RT-PCR檢測mTOR、Beclin-1、Atg5和LC3基因的表達水平
            2.4.2 用噻唑藍(MTT)法檢測細胞增殖
        2.5 次要觀察指標
            2.5.1 用免疫熒光染色鑒定LC3蛋白
            2.5.2 用管腔結構形成實驗檢測管腔形成數(shù)
            2.5.3 用流式細胞術檢測細胞凋亡
    3 統(tǒng)計學處理
結 果
    1 吡格列酮含藥血清對股動脈內(nèi)皮細胞中mTOR mRNA和自噬相關基因表達的影響
    2 吡格列酮含藥血清對股動脈內(nèi)皮細胞增殖的影響
    3 吡格列酮含藥血清對自噬LC3蛋白質(zhì)免疫熒光的影響
    4 吡格列酮含藥血清對管腔形成數(shù)的影響
    5 吡格列酮含藥血清對股動脈內(nèi)皮細胞凋亡的影響
討 論



本文編號：3794998