研究背景:在缺血性實(shí)體瘤內(nèi),葡萄糖的獲取和利用經(jīng)常受到限制。盡管腫瘤細(xì)胞長(zhǎng)期處于這種應(yīng)激條件下,但其仍可以通過(guò)啟動(dòng)未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response,UPR)來(lái)維持細(xì)胞內(nèi)動(dòng)態(tài)平衡,從而促進(jìn)細(xì)胞的存活。目的:針對(duì)糖剝奪條件下乳腺癌細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的UPR活化現(xiàn)象,我們擬篩選抑制UPR的新型喹啉酮類(lèi)衍生物,并研究其抗乳腺癌細(xì)胞增殖作用機(jī)制。方法:建立糖剝奪或2-脫氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)誘導(dǎo)的應(yīng)激環(huán)境,研究喹啉酮類(lèi)衍生物(2-hexyl-3-methyl-4(1H)-quinolinone,HHQ-4)抑制乳腺癌細(xì)胞(MCF-7和MDA-MB-231)的增殖作用。通過(guò)基因轉(zhuǎn)染、基因活性剪切形式分析,蛋白磷酸化及表達(dá)水平檢測(cè)等方法,進(jìn)一步研究在糖剝奪條件下,HHQ-4對(duì)乳腺癌細(xì)胞內(nèi)發(fā)生UPR反應(yīng)關(guān)鍵調(diào)控蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)通路的影響,并進(jìn)一步研究該調(diào)控作用與HHQ-4體外抗乳腺癌細(xì)胞增殖作用的相關(guān)性。結(jié)果:在糖剝奪應(yīng)激條件下,HHQ-4對(duì)乳腺癌...

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
1 引言
    1.1 乳腺癌發(fā)展及治療現(xiàn)狀
    1.2 腫瘤異質(zhì)性
    1.3 糖剝奪誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
    1.4 葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白GRP78 與腫瘤耐受
2 HHQ-4 在糖剝奪條件下對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖作用的影響
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 一抗來(lái)源
        2.2.4 主要儀器
        2.2.5 主要試劑配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 細(xì)胞活力檢測(cè)
        2.3.3 EDU摻入實(shí)驗(yàn)
        2.3.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.3.5 細(xì)胞增殖代數(shù)分布分析
        2.3.6 凋亡檢測(cè)
        2.3.7 免疫印跡檢測(cè)
        2.3.8 熒光素酶報(bào)告基因分析
        2.3.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 HHQ-4 對(duì)乳腺癌細(xì)胞活力的影響
        2.4.2 HHQ-4 對(duì)應(yīng)激誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞增殖作用的影響
        2.4.3 HHQ-4 對(duì)乳腺癌細(xì)胞克隆形成能力和細(xì)胞增殖代數(shù)分布的影響
        2.4.4 HHQ-4 對(duì)應(yīng)激誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響
    2.5 討論
3 HHQ-4在糖剝奪條件下抑制乳腺癌細(xì)胞增殖作用的分子機(jī)制研究
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        3.2.2 主要試劑
        3.2.3 一抗來(lái)源
        3.2.4 主要儀器
        3.2.5 主要試劑配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.2克隆形成實(shí)驗(yàn)
        3.3.3 胞漿和胞核蛋白提取
        3.3.4 免疫印跡檢測(cè)
        3.3.5 XBP-1活性形式剪切分析
        3.3.6 RNA逆轉(zhuǎn)錄和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)分析
        3.3.7 表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        3.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 HHQ-4 對(duì)應(yīng)激誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白影響的時(shí)效關(guān)系
        3.4.2 HHQ-4 對(duì)應(yīng)激誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白影響的量效關(guān)系
        3.4.3 HHQ-4 抑制乳腺癌細(xì)胞增殖依賴(lài)于GRP78 蛋白表達(dá)的下調(diào)
        3.4.4 無(wú)糖應(yīng)激環(huán)境對(duì)PERK/eIF2α/ATF4 通路的影響
        3.4.5 HHQ-4 對(duì)無(wú)糖誘導(dǎo)的PERK/eIF2α/ATF4 通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        3.4.6 HHQ-4 抑制GRP78 表達(dá)和細(xì)胞增殖是部分通過(guò)阻斷PERK/eIF2α/ATF4 信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)
        3.4.7 HHQ-4 對(duì)無(wú)糖應(yīng)激誘導(dǎo)的ATF6 蛋白表達(dá)的影響
        3.4.8 HHQ-4 抑制GRP78 表達(dá)和細(xì)胞增殖是部分通過(guò)阻斷ATF6 信號(hào)通路
        3.4.9 無(wú)糖應(yīng)激環(huán)境對(duì)IRE1/XBP1 通路的影響
        3.4.10 HHQ-4 對(duì)無(wú)糖應(yīng)激誘導(dǎo)的IRE1/XBP1 信號(hào)通路的影響
        3.4.11 HHQ-4 抑制GRP78 表達(dá)和細(xì)胞增殖是部分通過(guò)阻斷IRE1/XBP1 信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)
    3.5 討論
4 全文總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
附圖1
附圖2
附圖3
個(gè)人簡(jiǎn)歷、在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及取得的研究成果



本文編號(hào)：3765895