目的探索依托咪酯對脂多糖(LPS)誘導Kupffer細胞(KCs)炎癥反應及核苷酸結合寡聚化結構域樣受體蛋白3(NLRP3)/白細胞介素-1β(IL-1β)通路的影響。方法用SD大鼠分離和培養(yǎng)KCs,并將細胞隨機分為空白組、模型組、對照組和低、高濃度實驗組。空白組在正常條件下培養(yǎng);模型組給予1μg·mL^-1 LPS刺激3 h;對照組在模型組的基礎上,給予0.1μmol·mL^-1右美托咪定培養(yǎng)24 h;低、高濃度實驗組在模型組的基礎上,分別給予0.1和0.2μg·mL^-1依托咪酯培養(yǎng)24 h。用實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測KCs中極化基因的表達水平,用Western blotting法檢測KCs細胞NLRP3小體相關蛋白表達,用酶聯(lián)免疫吸附法檢測細胞培養(yǎng)上清液中IL-1β和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平。結果分離KCs的ED1陽性率為(96.32±4.82)%。干預后,低、高濃度實驗組和空白組、模型組、對照組的TNF-αmRNA分別為3.72±0.63,2.46±0.59,0.92±0.11,4.73±0.54和3.6...

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【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        動物
        藥品與試劑
        儀器
    2 實驗方法
        2.1 SD大鼠KCs細胞分離和培養(yǎng)
        2.2 用免疫熒光化學檢測KCs純度
        2.3 分組與給藥方法
        2.4 用RT-PCR檢測KCs極化基因水平
        2.5 用Western blotting法檢測KCs細胞NLRP3小體相關蛋白表達
        2.6 用酶聯(lián)免疫吸附法檢測細胞培養(yǎng)上清液中IL-1β和TNF-α水平
    3 統(tǒng)計學處理
結 果
    1 SD大鼠分離出的KCs細胞觀察
    2 KCs中極化基因mRNA表達水平的差異
    3 KCs中NLRP3相關蛋白表達水平的差異
    4 KCs細胞培養(yǎng)液中炎癥因子水平的差異
討 論



本文編號：3752214