發(fā)布時(shí)間：2017-05-09 11:16

  本文關(guān)鍵詞：毛細(xì)管電泳對(duì)支鏈氨基酸分離檢測(cè)方法的研究及應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：支鏈氨基酸(BCAAs)是一類能夠促進(jìn)人體肌肉合成和緩解疲勞,提高免疫力的重要氨基酸,是運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑中關(guān)鍵的功效成份,定量分析運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑中以及運(yùn)動(dòng)員尿樣中BCAAs的含量不僅能夠達(dá)到對(duì)運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑的質(zhì)量監(jiān)控和功效評(píng)價(jià)的目的,并且還能通過運(yùn)動(dòng)員BCAAs攝入量和排泄量的關(guān)系來為運(yùn)動(dòng)員營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑使用方案的開發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。另外,人體尿樣中BCAAs濃度的升高還是一些疾病的生物標(biāo)志(如楓糖尿病)。在眾多的氨基酸拆分方法中,毛細(xì)管電泳(CE)技術(shù)因其分析速度快、分離能力強(qiáng)、試劑消耗少等優(yōu)點(diǎn)而被廣大研究者廣泛應(yīng)用。紫外(UV)檢測(cè)器擁有價(jià)格低廉,應(yīng)用廣泛的優(yōu)勢(shì)。本課題旨在開發(fā)簡(jiǎn)便的BCAAs的CE-UV分析方法以期應(yīng)用于上述方面。第一章中主要介紹了CE系統(tǒng)的構(gòu)造與基本原理,并重點(diǎn)闡述了BCAAs補(bǔ)充對(duì)運(yùn)動(dòng)員的重要作用和過度補(bǔ)充BCAAs(或蛋白質(zhì)類運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑)對(duì)人體的危害以及BCAAs需求量和最大可耐受攝入量的測(cè)定方法。提出了CE應(yīng)用于BCAAs分析以及運(yùn)動(dòng)員營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑使用方案開發(fā)的良好前景。第二章主要對(duì)六種背景吸光電解質(zhì)的紫外吸收性質(zhì)以及與幾種重要氨基酸的電泳淌度進(jìn)行了考察與比對(duì),并結(jié)合這六種電解質(zhì)的穩(wěn)定性,最終選擇了適用于bcaas間接紫外檢測(cè)的背景電解質(zhì)對(duì)氨基水楊酸(pas)。通過添加edta,亮氨酸(leu)和異亮氨酸(ile)能夠?qū)崿F(xiàn)部分分離,但l-ile的色譜峰卻始終與leu重疊,無法通過edta的添加實(shí)現(xiàn)分離。因此,后續(xù)的工作重點(diǎn)在于選擇合適的背景添加劑使leu和ile完全分離。第三章是bcaas的ce-間接紫外檢測(cè)方法的開發(fā)。通過對(duì)ph值、背景添加劑濃度以及背景紫外吸光電解質(zhì)濃度等影響條件的優(yōu)化以及影響機(jī)理的討論,最終確定了最優(yōu)分離條件為2.0mmna2hpo4,10.0mmpas,40.0mmβ-環(huán)糊精(β-cd),ph=12.2。在此條件下,leu和l-ile的分離度為1.0(樣品濃度均為0.5mm),方法的重現(xiàn)性良好(峰面積的rsd2.1%,n=5),靈敏度雖低于熒光、質(zhì)譜等檢測(cè)器,但本章中bcaas的分析方法可以避免繁雜的柱前衍生過程,并且價(jià)格低廉,可應(yīng)用范圍廣。第四章是基于bcaas在較低的紫外波長(zhǎng)下(220nm)有一定的紫外吸收的原理,開發(fā)了bcaas低波長(zhǎng)直接紫外檢測(cè)方法,在40.0mm硼砂,40.0mmβ-cd,ph=10.2的條件下,bcaas能夠得到完全分離。方法的背景電解質(zhì)組成更加簡(jiǎn)單,同時(shí)檢測(cè)的靈敏度也要高于文獻(xiàn)報(bào)道的相似工作。第五章是間接檢測(cè)法和直接檢測(cè)法在運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑以及運(yùn)動(dòng)員尿液中bcaas分析中的應(yīng)用。間接檢測(cè)法獲得的補(bǔ)劑中bcaas含量的數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道接近,而直接檢測(cè)法中l(wèi)-ile峰則受到了干擾。而運(yùn)動(dòng)員尿樣中未能檢測(cè)出bcaas,原因一方面可能是靈敏度不足,另一方面可能是因?yàn)檫\(yùn)動(dòng)員補(bǔ)充的BCAAs未達(dá)到可耐受攝入量。本章最后提出了BCAAs萃取的標(biāo)準(zhǔn)方法,有望解決以上所述的問題。
【關(guān)鍵詞】：毛細(xì)管電泳 支鏈氨基酸 營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑 紫外檢測(cè)
【學(xué)位授予單位】：東華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R927;O658.9
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 第一章 緒論11-28
• 1.1 毛細(xì)管電泳概述11-17
• 1.2 支鏈氨基酸與運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)的關(guān)系17-24
• 1.3 支鏈氨基酸需求量及可耐受攝入量的測(cè)定24-26
• 1.4 毛細(xì)管電泳在支鏈氨基酸可耐受攝入量測(cè)定中的應(yīng)用前景26-28
• 第二章 背景吸光電解質(zhì)性質(zhì)考察及支鏈氨基酸的分離初探28-40
• 2.1 引言28-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑和方法29-30
• 2.3 結(jié)果與討論30-39
• 2.4 本章小結(jié)39-40
• 第三章 毛細(xì)管電泳分離-間接紫外檢測(cè)支鏈氨基酸40-48
• 3.1 前言40-41
• 3.2 實(shí)驗(yàn)儀器、藥品與方法41-42
• 3.3 結(jié)果與討論42-47
• 3.4 本章小結(jié)47-48
• 第四章 毛細(xì)管電泳低波長(zhǎng)紫外檢測(cè)支鏈氨基酸48-55
• 4.1 前言48-49
• 4.2 實(shí)驗(yàn)儀器、藥品與方法49-50
• 4.3 結(jié)果與討論50-54
• 4.4 本章小結(jié)54-55
• 第五章 營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑和尿樣中支鏈氨基酸的分析及前處理方法研究55-64
• 5.1 前言55-56
• 5.2 實(shí)驗(yàn)儀器、藥品與方法56-57
• 5.3 結(jié)果與討論57-63
• 5.4 本章小結(jié)63-64
• 參考文獻(xiàn)64-74
• 附錄一74-75
• 附錄二75-76
• 碩士期間發(fā)表的論文76-77
• 致謝77

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