發(fā)布時間：2017-05-09 08:10

  本文關(guān)鍵詞：5-硝基-2-3-苯丙胺苯甲酸（NPPB）對脂多糖誘導(dǎo)的小鼠巨噬細胞RAW264.7炎癥因子表達的作用及機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:5-硝基-2-3-苯丙胺苯甲酸(NPPB)屬芳香族酸類非特異性氯通道阻斷劑,同時其也是G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)家族中GPR35的激動劑,而氯離子通道與G蛋白偶聯(lián)受體均與炎癥有著密切的關(guān)系。近來的研究表明:炎癥因子可激活血管內(nèi)皮細胞氯電流,并且此電流依賴于Cl C-3氯通道的表達;而氯通道阻斷劑、沉默Cl C-3氯通道蛋白以及Cl C-3基因敲除均可明顯抑制內(nèi)皮細胞粘附分子的表達,抑制單核細胞向內(nèi)皮細胞的粘附;Cl C-3基因敲除可抑制炎癥因子誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)的活化,這些均提示Cl C-3氯通道參與了炎癥的過程,其調(diào)控的炎癥通路可能為NF-κB信號通路。而GPR35在多種免疫細胞均有表達,與MAPK炎癥通路的激活密切相關(guān),且參與了某些炎癥相關(guān)性疾病的發(fā)生,提示GPR35可能起到促進炎癥的作用。NPPB兼有氯通道阻斷劑和GPR35激動劑的雙重作用,其在血管內(nèi)炎癥應(yīng)答的作用機制已有較多的研究報道,而在巨噬細胞炎癥應(yīng)答中的作用及其機制究竟如何,目前尚未報道。因此本課題旨在探討NPPB對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的巨噬細胞炎癥因子的作用,并明確其作為氯通道阻斷劑和GPR35激動劑對炎癥因子的內(nèi)在調(diào)控機制。方法:1.Western blot和熒光定量PCR檢測NPPB對LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞炎癥因子的作用;2.熒光定量PCR檢測Cl C家族氯通道蛋白m RNA在巨噬細胞上的表達情況;3.免疫熒光法檢測Cl C-3氯通道蛋白在巨噬細胞中的分布情況;4.si RNA沉默Cl C-3氯通道蛋白檢測其對LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞炎癥應(yīng)答的影響;5.Western blot檢測其它氯通道阻斷劑對LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞細胞炎癥因子表達的影響;6.Western blot檢測NPPB對LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞NF-κB、p38 MAPK、ERK、JNK、c-Jun蛋白磷酸化水平的影響;7.Western blot檢測GPR35激動劑對LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞炎癥因子的作用。結(jié)果:1.NPPB可上調(diào)由LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細胞RAW264.7炎癥因子蛋白質(zhì)、m RNA的表達。2.Cl C-3氯通道蛋白在RAW264.7細胞上的表達明顯高于其它Cl C氯通道亞型。3.沉默Cl C-3氯通道蛋白可抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞TNF-α的表達。4.不同氯通道阻斷劑對LPS誘導(dǎo)的TNF-α表達的影響不同。5.NPPB下調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞NF-κB磷酸化水平。6.GPR35激動劑可上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞TNF-α的表達。7.NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞p38 MAPK磷酸化水平。結(jié)論:1.NPPB在基因、蛋白水平均可上調(diào)由LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細胞RAW264.7炎癥因子的表達。2.Cl C-3氯通道可能不是NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細胞TNF-α表達的靶點。3.NPPB促進LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞TNF-α的表達可能是通過激活GPR35,其調(diào)控通路為p38 MAPK炎癥通路。
【關(guān)鍵詞】：5-硝基-2-3-苯丙胺苯甲酸 腫瘤壞死因子-α 氯通道 G蛋白偶聯(lián)受體35 絲裂原激活的蛋白激酶p38
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-21
• 1. 研究背景9-19
• 1.1 巨噬細胞、脂多糖與炎癥反應(yīng)的相關(guān)性9-14
• 1.2 氯離子通道與炎癥反應(yīng)的關(guān)系14-17
• 1.3 G蛋白偶聯(lián)受體與炎癥反應(yīng)的關(guān)系17-18
• 1.4 5-硝基23-苯丙胺苯甲酸（NPPB）18-19
• 2．本課題的思路、研究目的和意義19-21
• 材料與方法21-33
• 1 材料21-27
• 1.1 小鼠巨噬細胞系RAW264.721
• 1.2 主要儀器和設(shè)備21-22
• 1.3 主要藥品和試劑22-27
• 2 方法27-33
• 2.1 細胞培養(yǎng)27
• 2.2 Western blot檢測目的蛋白表達27-30
• 2.3 熒光定量PCR檢測炎癥因子m RNA的表達30-31
• 2.4 熒光定量PCR檢測Cl C家族氯通道蛋白m RNA的表達情況31
• 2.5 免疫熒光檢測Cl C-3 氯通道蛋白的分布情況31-32
• 2.6 si RNA細胞轉(zhuǎn)染下調(diào)Cl C-3 氯通道蛋白表達32
• 2.7 統(tǒng)計分析32-33
• 結(jié)果33-45
• 1. NPPB對LPS誘導(dǎo)的小鼠巨噬細胞RAW264.7 炎癥因子表達的作用33-36
• 1.1 NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞的TNF-α蛋白質(zhì)表達33-34
• 1.2 NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞的TNF-α m RNA表達34-35
• 1.3 NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞的IL-6 m RNA表達35-36
• 2. NPPB作為氯通道阻斷劑在LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞炎癥應(yīng)答中的作用36-42
• 2.1 不同氯通道阻斷劑對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞TNF-α的表達影響有差異36-37
• 2.2 RAW264.7 細胞Cl C氯通道家族m RNA表達情況37-38
• 2.3 RAW264.7 細胞Cl C-3 氯通道蛋白分布情況38-39
• 2.4 沉默Cl C-3 氯通道蛋白對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞TNF-α的表達的作用39-41
• 2.5 NPPB下調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞NF-κB磷酸化水平41-42
• 3. NPPB作為GPR35激動劑在LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞炎癥應(yīng)答中的作用42-45
• 3.1 GPR35受體激動劑上調(diào)LPS誘導(dǎo)炎癥因子TNF-α的表達42-43
• 3.2 NPPB上調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞p38 MAPK磷酸化水平43-44
• 3.3 NPPB對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 炎癥應(yīng)答中MAPK信號通路其它關(guān)鍵蛋白的作用44-45
• 討論45-49
• 全文結(jié)論49-50
• 總結(jié)與展望50-51
• 參考文獻51-58
• 附錄 主要縮略詞表58-59
• 在校期間發(fā)表論文及科研情況59-60
• 致謝60-61

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔣一帆;力弘;陳道峰;章蘊毅;;多黏菌素B對內(nèi)毒素誘導(dǎo)的RAW264.7細胞分泌一氧化氮的影響[J];中國臨床藥學(xué)雜志;2013年05期

2 Rajendra Karki;Cheol-Ho Park;Dong-Wook Kim;;Extract of buckwheat sprouts scavenges oxidation and inhibits pro-inflammatory mediators in lipopolysaccharide-stimulated macrophages (RAW264.7)[J];Journal of Integrative Medicine;2013年04期

3 龐戰(zhàn)軍,周玫,陳瑗;氧化劑對RAW264.7細胞M-CSF基因表達的調(diào)控[J];中國病理生理雜志;2001年01期

4 汪娟;蔣維;王毅;;降香中黃酮類化合物對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7細胞抗炎作用研究[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年07期

5 王旭亮;王德興;倪杰;�；�;司艷紅;商戰(zhàn)平;;洛伐他汀對RAW264.7體外生長抑制作用的研究[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年08期

6 陳濤;梁瀟;賀明;烏宇亮;袁祖貽;;RAW264.7細胞M1/M2亞型的誘導(dǎo)和鑒定[J];中國分子心臟病學(xué)雜志;2011年02期

7 卞夢瑤;方勇;裴斐;趙立艷;辛志宏;安辛欣;楊方美;胡秋輝;;生姜油樹脂對過氧化氫引起RAW264.7巨噬細胞損傷的保護作用[J];食品科學(xué);2014年01期

8 張同欣;胡厚源;永福;;肝X受體激動劑對RAW264．7細胞攝取Ac-LDL能力的影響[J];中國藥師;2007年02期

9 劉超;袁紅艷;焦淑凡;余磊;常雅萍;;hCAP-18/LL-37基因轉(zhuǎn)染對RAW264.7細胞活化功能的影響[J];中國生物制品學(xué)雜志;2011年02期

10 白生賓;陳紅香;鐘近潔;馮樹梅;李甜;羅學(xué)港;;MTT法檢測RAW264.7細胞活力及可能因素分析[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2011年23期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Shuhua Cui;Qinhui Tuo;DuanFang Liao;;Effect of Daxx on apoptosis of RAW264.7 cells induced by cholesterol:model of β-cyclodextrin[A];第11屆全國脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

2 柳忠輝;李楠;葛敬巖;崔雪玲;;單核巨噬細胞系RAW264,7細胞腫瘤模型鼠的建立[A];2012全國臨床微生物與感染免疫學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

3 聶建巍;楊蓉婭;叢林;王文嶺;夏志寬;李海濤;;IFN-γ對小鼠RAW264.7巨噬細胞吞噬、殺傷T.asahii的增強作用[A];2012全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

4 高愛超;王習(xí)超;于海燕;李娜;于小琳;于維先;;牙齦卟啉單胞菌脂多糖(Pg-LPS)調(diào)控RAW264.7表達EphA2的研究[A];第十次全國牙周病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2014年

5 程秀麗;丁帆;閆莉;谷婧麗;郝維;高雪;曹濟民;;促離子型谷氨酸受體介導(dǎo)RAW264.7巨噬細胞釋放TNF-α[A];第八屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會論文集[C];2011年

6 聶建巍;楊蓉婭;叢林;王文嶺;夏志寬;李海濤;;IFN-γ對小鼠RAW264.7巨噬細胞吞噬、殺傷T.asahii的增強作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

7 Qinhui Tuo;Shuhua Cui;Guozuo Xiong;Tianping Li;Juan Wen;duanfang Liao;;Effect of overexpressed Daxx on apoptosis of RAW264.7 cells induced by Chol:MβCD[A];第十二屆全國脂質(zhì)與脂蛋白學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

8 陸紅玲;趙凱;衛(wèi)濤濤;;Expression of inducible nitric oxide synthase potentiates the respiratory burst in RAW264.7 macrophages[A];全國自由基醫(yī)學(xué)與毒理學(xué)學(xué)術(shù)交流大會論文（摘要）集[C];2011年

9 辛文妤;張?zhí)焯?杜冠華;;DL0309對LPS誘導(dǎo)小鼠RAW264.7細胞NO生成及iNOS表達的影響[A];第十三屆中國科協(xié)年會生物醫(yī)藥博士論壇論文集[C];2011年

10 陳旭林;郭峰;王飛;王永杰;;不同濃度的AngⅡ?qū)AW264.7巨噬細胞AT1受體表達的影響[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉澤申;RAW給你的照片點顏色看！[N];中國計算機報;2005年

2 南城;RAW格式在后期調(diào)整上的YES或NO[N];中國攝影報;2013年

3 張善夫;專業(yè)攝影師為何厚愛RAW[N];中國攝影報;2006年

4 黃琮;RAW 讓BI更智能[N];通信產(chǎn)業(yè)報;2004年

5 曹巍嵩;走出圖像與信息的誤區(qū):RAW原始數(shù)據(jù)文件初識[N];中國攝影報;2010年

6 長人;用Camera RAW找回丟失的細節(jié)[N];中國攝影報;2010年

7 付鴻波;深度理解RAW文件格式的強大優(yōu)勢[N];中國攝影報;2009年

8 ;DC拍照，請忘掉JPG[N];中國計算機報;2005年

9 王曉晨;用RAW“色彩通道法”轉(zhuǎn)高質(zhì)量黑白照[N];中國攝影報;2009年

10 i周刊記者 趙欣;保存50年沒問題！[N];中國計算機報;2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 王曉慧;1.抑制糖皮質(zhì)激素受體表達導(dǎo)致小鼠巨噬細胞系RAW264.7增殖加快的分子機制　2.非基因毒應(yīng)激對RhoB的誘導(dǎo)作用及其生物學(xué)意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 顏冬菁;Daintain在巨噬細胞RAW264.7中的功能研究[D];華中科技大學(xué);2011年

3 劉淑清;TLR2介導(dǎo)TB10.4激活RAW264.7通路及細胞因子表達的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

4 李

本文編號：352158