硝唑尼特（NTZ）及其活性代謝產(chǎn)物替唑尼特（TIZ）具有廣譜的抗原蟲,抗腸道寄生蟲,抗病毒,抗菌等生物活性。但這些活性的機制是否與抗炎和抗氧化及其細胞自噬有關(guān)尚無研究報道,為此我們展開了相關(guān)研究以揭示其中的關(guān)系。通過給予Raw264.7細胞LPS（1μg/mL）刺激建立炎癥和氧化應(yīng)激模型,TIZ（25,50,75,100μM）作用后檢測IL-6分泌和COX-2的表達量以評估TIZ對炎癥細胞因子的作用;用DCFH-DA熒光探針檢測ROS生成;同時,用試劑盒檢測MDA的生成量,CAT、SOD、GSH-Px酶活性和GSH含量,以評估TIZ抗細胞氧化應(yīng)激的作用。結(jié)果顯示,LPS刺激后細胞表現(xiàn)出顯著性的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激效應(yīng);而給予TIZ處理后,細胞IL-6分泌和COX-2表達量隨TIZ處理呈劑量相關(guān)性的下降,ROS和MDA生成量也顯著下降,但GSH含量以及CAT、SOD、GSH-Px酶活性呈劑量相關(guān)性的顯著性上升。由此可見,TIZ能抑制LPS誘導的Raw264.7細胞炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激。但這一新的生物活性其作用機制是什么,我們還不甚了解。細胞自噬廣泛參與各種生物作用,TIZ的藥物作用過程也可能... 

【文章來源】：湘潭大學湖南省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

TIZ（A）和NTZ（B）的化學結(jié)構(gòu)式

圖 1-2 NTZ 與 PFOR 的作用機制[44]對于少數(shù)嚴格需氧菌以及兼性厭氧菌而言，NTZ的作用機制尚不完全清楚， NTZ/TIZ 對這些細菌的作用機制的研究仍在如火如荼的進行中，如：Peter 等人研究發(fā)現(xiàn) NTZ 可以通過抑制聚集粘附的毛原纖維和 1 型菌毛的功制了多種革蘭氏陰性菌的伴侶/導聯(lián)（CU）通路，他們還發(fā)現(xiàn) NTZ 通過在外膜阻止引導蛋白的正確折疊抑制尿道致病性大腸桿菌的1型和P型菌毛的繁殖[45]。Carvalho 等人研究發(fā)現(xiàn) NTZ 及其衍生物可以破壞結(jié)核分枝桿菌的膜電位和內(nèi) pH 穩(wěn)態(tài)[46]。但這機制不能解釋 NTZ 與活性氮中間體協(xié)同抑制結(jié)核桿菌。，Lam 等人提出了另外一種不同的作用機制：通過合成 NTZ 衍生物，他們發(fā)現(xiàn) NTZ 通過激活自噬的主要負調(diào)控因子哺乳動物雷帕霉素靶點蛋白信號遞，增強宿主細胞自噬水平，并最終達到抑制宿主細胞體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌的的效果。因此，推測 NQO1 可能是作為 NTZ 其靶標之一進而誘發(fā)感染結(jié)核的細胞自噬從而抑制結(jié)核桿菌的繁殖[45,47]。

50 以時間和劑量依賴性方式誘導 Raw264.7 細胞自噬。（A）western TIZ（0、25、50、75、100 μM）作用 Raw264.7 細胞孵育 12 h LC白表達水平；（B）劑量效應(yīng)圖中 LC3-ΙΙ/LC3-Ι 的定量分析；（C）actin 的定量分析；（D）western blot 檢測 75 μM 的 TIZ 作用 Raw20、3、6、9、12 h）LC3-Ι、LC3-ΙΙ 和 p62 蛋白表達水平；（E）時3-Ι 的定量分析；（F）時間效應(yīng)圖中 p62 的定量分析；（G）透射電Z（0、75、100 μM）作用 Raw264.7 細胞 12 h 的自噬情況（1 μm，00），黃色箭頭所指為吞噬泡，紅色箭頭所指為自噬體，藍色箭頭H）激光共聚焦顯微鏡觀察不同濃度的 TIZ（0、25、50、75、10Raw264.7 細胞 12 h 細胞內(nèi)自噬體的數(shù)量（×630）。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]硝唑尼特抗AD新用途化合物及嘌呤核苷類PDE2抑制劑的設(shè)計、合成與活性研究[D]. 邱曉霞.華東理工大學 2018
[2]硝唑尼特合成新工藝及其衍生物的設(shè)計、合成和初步生物活性研究[D]. 夏巧紅.山東大學 2017
[3]鹽酸小檗堿對脂多糖所致巨噬細胞炎癥的抗炎作用及其機制研究[D]. 朱喜梅.廣州中醫(yī)藥大學 2015
[4]抗寄生蟲藥硝唑尼特的合成工藝研究[D]. 單環(huán)宇.浙江大學 2014



本文編號：3489236