本文關(guān)鍵詞：GBEE對(duì)獲得性S180MDR細(xì)胞株逆轉(zhuǎn)作用的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：模擬臨床PFC(順鉑+氟尿嘧啶+環(huán)磷酰胺)聯(lián)合化療給藥方案,通過(guò)體內(nèi)劑量遞增法誘導(dǎo)S180腹水瘤小鼠,獲得S180腫瘤多藥耐藥(Multi-drug resistance, MDR)細(xì)胞株并研究銀杏外種皮提取物(Ginkgo biloba exocarp extracts, GBEE)對(duì)該細(xì)胞株體內(nèi)外的逆轉(zhuǎn)耐藥作用及其機(jī)制。方法：按臨床PFC化療方案,采用體內(nèi)劑量遞增法誘導(dǎo)S180腹水瘤小鼠,建立獲得性S180MDR模型,采用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)動(dòng)態(tài)測(cè)定低、中、高劑量所誘導(dǎo)細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥倍數(shù)、細(xì)胞內(nèi)阿霉素(Adriamycin, ADR)積累量及細(xì)胞膜P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)功能活性以監(jiān)測(cè)所誘導(dǎo)細(xì)胞的耐藥強(qiáng)度；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)法測(cè)定不同劑量所誘導(dǎo)細(xì)胞MDR-1mRNA、多藥耐藥相關(guān)蛋白-1(multidrug resistance-associated protein 1, MRP-1) mRNA的表達(dá)量。取高劑量誘導(dǎo)的S180MDR細(xì)胞研究GBEE的體內(nèi)外逆轉(zhuǎn)耐藥作用。體外實(shí)驗(yàn)：采用MTT法測(cè)定GBEE對(duì)S180MDR細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)指數(shù),采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定GBEE對(duì)S180MDR細(xì)胞內(nèi)ADR積累量、P-gp功能活性的影響；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：建立ICR小鼠S180MDR細(xì)胞腹水瘤和實(shí)體瘤模型,將小鼠隨機(jī)分為14組,每組10只,即空白組,模型組,親本細(xì)胞順鉑(cis-dichlorodiamineplatinum,DDP)3mg/kg、ADR3mg/kg單獨(dú)用藥組,耐藥細(xì)胞DDP3mg/kg、ADR3mg/kg、GBEE50、25、12.5mg/kg、維拉帕米(Verapamil, VER) 15mg/kg單獨(dú)用藥組,GBEE50、25、12.5mg/kg+DDP3mg/kg聯(lián)合用藥組以及VER15mg/kg+DDP3mg/kg聯(lián)合用藥組,藥物干預(yù)1周。監(jiān)測(cè)腹水瘤小鼠的存活時(shí)間、計(jì)算實(shí)體瘤小鼠的腫瘤抑制率；采用RT-qPCR法檢測(cè)腹水瘤模型各組小鼠腫瘤細(xì)胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表達(dá)量；采用雙抗夾心ELISA法測(cè)定實(shí)體瘤模型小鼠血清白介素3 (Interleukin 3,IL-3)、白介素18 (Interleukin 18, IL-18)及γ-干擾素(Interferon-y,IFN-y)的濃度。結(jié)果：建模實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與親本細(xì)胞比較,低、中、高劑量所誘導(dǎo)的S180細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥倍數(shù)隨誘導(dǎo)劑量的增高而逐漸增大,細(xì)胞內(nèi)ADR積累量隨之逐漸減少,細(xì)胞P-gp功能活性隨之逐漸增強(qiáng)；所誘導(dǎo)S180細(xì)胞不僅對(duì)DDP、氟尿嘧啶(Fluorouracil,FU)產(chǎn)生了較強(qiáng)的耐藥性,且對(duì)未接觸過(guò)的、作用機(jī)制不同的ADR也具有一定程度的交叉耐藥性。所誘導(dǎo)S180細(xì)胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表達(dá)量與誘導(dǎo)劑量呈正相關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：GBEE30、15、7.5μg/mL與S180MDR細(xì)胞體外培養(yǎng)后對(duì)DDP的逆轉(zhuǎn)指數(shù)分別為8.48、11.34、9.88;GBEE各劑量能顯著增加S180MDR細(xì)胞內(nèi)ADR蓄積量并抑制P-gp功能活性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：GBEE50.25、12.5mg/kg灌胃給藥能顯著提升DDP的抗腫瘤作用,延長(zhǎng)S180MDR腹水瘤小鼠存活時(shí)間并抑制小鼠S180MDR實(shí)體瘤生長(zhǎng),其中GBEE25mg/kg聯(lián)合DDP用藥組對(duì)腹水瘤小鼠的生命延長(zhǎng)率達(dá)37.41%,對(duì)小鼠實(shí)體瘤抑制率達(dá)65.43%(P0.01或P0.001)；GBEE各劑量能顯著抑制小鼠S180MDR腹水瘤細(xì)胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表達(dá),且能明顯提升S180MDR荷瘤小鼠血清IL-3、IL-18及IFN-γ等細(xì)胞因子的水平(P0.05)。結(jié)論：采用PFC方案按劑量遞增法體內(nèi)誘導(dǎo)S180腹水瘤小鼠獲得的MDR細(xì)胞模型,其耐藥強(qiáng)度在一定的劑量范圍內(nèi)與誘導(dǎo)劑量呈現(xiàn)正相關(guān)性。GBEE體內(nèi)外給藥對(duì)S180MDR細(xì)胞均具有較明顯的逆轉(zhuǎn)作用,其機(jī)制可能與抑制耐藥腫瘤細(xì)胞MDR-1mRNA、 MRP-1mRNA的表達(dá),減少耐藥蛋白合成,并抑制P-gp功能活性而提高化療藥物在耐藥腫瘤細(xì)胞內(nèi)的濃度有關(guān),與提升小鼠血清IL-3、IL-18及IFN-γ等細(xì)胞因子的水平進(jìn)而促進(jìn)了免疫功能也有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：體內(nèi) S180 多藥耐藥 銀杏外種皮提取物 逆轉(zhuǎn)耐藥 P-糖蛋白 多藥耐藥基因-1 多藥耐藥相關(guān)蛋白基因-1 白介素3 白介素18 γ干擾素
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• Abstract4-9
• 符號(hào)說(shuō)明9-10
• 前言10-11
• 1 腫瘤MDR模型建立與中藥及其提取物逆轉(zhuǎn)MDR作用研究進(jìn)展11-19
• 1.1 腫瘤MDR模型的建立方法11-14
• 1.2 中藥及其提取物逆轉(zhuǎn)腫瘤MDR作用的研究進(jìn)展14-19
• 2 技術(shù)路線19-20
• 3 實(shí)驗(yàn)材料20-23
• 3.1 銀杏外種皮提取物20
• 3.2 瘤株與動(dòng)物20
• 3.3 主要儀器20-21
• 3.4 主要藥品與試劑21-23
• 4 實(shí)驗(yàn)方法23-29
• 4.1 體內(nèi)誘導(dǎo)建立S180MDR細(xì)胞株及其驗(yàn)證23-25
• 4.1.1 體內(nèi)誘導(dǎo)建立S180MDR細(xì)胞株23
• 4.1.2 MTT法測(cè)定耐藥倍數(shù)23
• 4.1.3 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ADR積累量23-24
• 4.1.4 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定P-gp功能活性24
• 4.1.5 RT-qPCR法測(cè)定MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表達(dá)量24-25
• 4.2 GBEE體外對(duì)S180MDR細(xì)胞株逆轉(zhuǎn)作用的實(shí)驗(yàn)研究25-28
• 4.2.1 GBEE最佳逆轉(zhuǎn)劑量的篩選25
• 4.2.2 對(duì)S180MDR細(xì)胞逆轉(zhuǎn)指數(shù)的影響25-26
• 4.2.3 對(duì)S180MDR細(xì)胞內(nèi)ADR積累量的影響26
• 4.2.4 對(duì)S180MDR細(xì)胞膜P-gp功能活性的影響26-28
• 4.3 GBEE體內(nèi)對(duì)S180MDR腹水瘤逆轉(zhuǎn)作用的實(shí)驗(yàn)研究28-29
• 4.3.1 S180MDR腹水瘤模型的建立28
• 4.3.2 分組與給藥28
• 4.3.3 檢測(cè)細(xì)胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表達(dá)量28
• 4.3.4 檢測(cè)生存時(shí)間、計(jì)算生命延長(zhǎng)率28-29
• 4.4 GBEE體內(nèi)對(duì)S180MDR實(shí)體瘤逆轉(zhuǎn)作用的實(shí)驗(yàn)研究29
• 4.4.1 S180MDR實(shí)體瘤模型的建立29
• 4.4.2 分組與給藥29
• 4.4.3 檢測(cè)腫瘤質(zhì)量、計(jì)算腫瘤抑制率29
• 4.4.4 檢測(cè)血清中IL-3、IL-18及IFN-γ的水平29
• 5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-43
• 5.1 體內(nèi)建立S180MDR細(xì)胞株的驗(yàn)證29-34
• 5.1.1 細(xì)胞耐藥倍數(shù)29-30
• 5.1.2 細(xì)胞內(nèi)ADR積累量30-31
• 5.1.3 細(xì)胞P-gp功能活性31-32
• 5.1.4 細(xì)胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA的表達(dá)量32-34
• 5.2 GBEE體外對(duì)S180MDR細(xì)胞株的逆轉(zhuǎn)作用34-38
• 5.2.1 對(duì)S180MDR細(xì)胞逆轉(zhuǎn)指數(shù)的影響34
• 5.2.2 對(duì)S180MDR細(xì)胞內(nèi)ADR積累量的影響34-36
• 5.2.3 對(duì)S180MDR細(xì)胞膜上P-gp功能活性的影響36-38
• 5.3 GBEE體內(nèi)對(duì)S180MDR腹水瘤的逆轉(zhuǎn)作用38-40
• 5.3.1 對(duì)S180MDR腹水瘤小鼠生存時(shí)間及生命延長(zhǎng)率的影響38
• 5.3.2 對(duì)S180MDR腹水瘤細(xì)胞MDR-1mRNA、MRP-1mRNA表達(dá)量的影響38-40
• 5.4 GBEE體內(nèi)對(duì)S180MDR實(shí)體瘤的逆轉(zhuǎn)作用40-43
• 5.4.1 對(duì)S180MDR實(shí)體瘤小鼠腫瘤質(zhì)量及腫瘤抑制率的影響40-41
• 5.4.2 對(duì)S180MDR實(shí)體瘤小鼠血清IL-3、IL-18及IFN-γ水平的影響41-43
• 6 討論與總結(jié)43-47
• 6.1 體內(nèi)建立S180MDR模型43-44
• 6.2 GBEE對(duì)S180MDR細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用44-45
• 6.3 GBEE對(duì)S180MDR細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用機(jī)制45-46
• 6.4 總結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-58
• 致謝58-59
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文及科研情況59-60

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 胡碧原;GBEE對(duì)獲得性S180MDR細(xì)胞株逆轉(zhuǎn)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：GBEE對(duì)獲得性S180MDR細(xì)胞株逆轉(zhuǎn)作用的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：331438