本文關(guān)鍵詞：蛋白賴氨酸去修飾酶的抑制劑及抑制策略的探索研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蛋白翻譯后修飾越來(lái)越多的被證明參與到了很多細(xì)胞過(guò)程的調(diào)控中,如基因轉(zhuǎn)錄,DNA修復(fù),染色質(zhì)形成,代謝等重要生命過(guò)程。這些修飾主要有賴氨酸側(cè)鏈的Nε-乙�；�/去乙�；�,Nε-甲基化/去甲基化,Nε-泛素化/去泛素化,以及精氨酸側(cè)鏈Nη-甲基化/去甲基化。在這些翻譯后修飾中,修飾與去修飾動(dòng)態(tài)平衡共同維持著細(xì)胞生命過(guò)程的正常進(jìn)行。本論文主要的研究方向是sirtuin催化的蛋白賴氨酸側(cè)鏈的Nε-去�；蚃MJD2/JARID1催化的蛋白賴氨酸Nε-去甲基化這兩種去修飾過(guò)程。Sirtuin催化的去�；磻�(yīng)及JMJD2和JARID1催化的去甲基化反應(yīng)作為潛在的疾病治療靶點(diǎn)(尤其是癌癥的治療),在其催化機(jī)制和抑制劑方面一直都是研究熱點(diǎn)。本論文主要是采用了最新的抑制劑研究策略來(lái)對(duì)這兩種酶進(jìn)行催化機(jī)制和抑制劑研究。在sirtuin抑制劑研究方面,我們采用環(huán)化策略即將直鏈五肽先導(dǎo)化合物6進(jìn)行環(huán)化,采用不同的環(huán)化結(jié)構(gòu)來(lái)評(píng)估環(huán)肽類化合物對(duì)sirtuin活性的抑制力度。我們發(fā)現(xiàn)環(huán)化策略在發(fā)展新型sirtuin抑制劑上是一個(gè)非常有效可行的方法。設(shè)計(jì)的6個(gè)硫乙酰賴氨酸環(huán)肽具有很強(qiáng)的sirtuin抑制效力(nM級(jí)別),其中環(huán)肽sirtuin抑制劑9是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的機(jī)制導(dǎo)向的SIRT1抑制劑(IC50=2.3±0.28nM),而環(huán)肽sirtuin抑制劑10也是發(fā)現(xiàn)的首個(gè)環(huán)肽類強(qiáng)效且選擇性的SIRT2抑制劑(IC50=10.1±1.1nM)。在隨后的SIRT2選擇性抑制劑上的研究發(fā)現(xiàn),環(huán)肽類sirtuin抑制劑13具有強(qiáng)效且選擇性的SIRT2抑制,比SIRT1/3分別強(qiáng)了23.5倍和80.3倍,同時(shí)該環(huán)肽抑制劑在SIRT2抑制性只比環(huán)肽化合物10弱了3.6倍的情況下還克服了硫乙酰賴氨酸的潛在肝毒性。對(duì)于JMJD2和JARID1催化的去甲基化反應(yīng)研究方面,我們成功的建立了一個(gè)基于高效液相色譜法的試管內(nèi)催化去甲基化反應(yīng)程序,該方法能夠幫助我們定量的分析體外JMJD2催化的去甲基化反應(yīng)。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)了一個(gè)能夠被JMJD2C催化去甲基化的模擬底物異丙基鳥(niǎo)氨酸八肽,說(shuō)明了該模擬底物能夠被JMJD2C催化中心識(shí)別,且異丙基鳥(niǎo)氨酸能夠進(jìn)入JMJD2C的結(jié)合口袋被催化反應(yīng)。雖然該模擬底物的底物活性并不高,但為其以后選擇性抑制劑的設(shè)計(jì)能夠提供依據(jù);同時(shí),二氟異丙基鳥(niǎo)氨酸八肽(Probe 1)的JMJD2C測(cè)試結(jié)果說(shuō)明異丙基鳥(niǎo)氨酸電子等排體二氟異丙基鳥(niǎo)氨酸不能有效地被夠JMJD2C處理,兩種可能的解釋是:1)氟原子的強(qiáng)吸電子性擾亂了該異丙基鳥(niǎo)氨酸與結(jié)合口袋的相互作用;2)JMJD2C催化活性中心的結(jié)合口袋空間大小要求極其苛刻。
【關(guān)鍵詞】：去�；� 去甲基化 sirtuin JMJD2 抑制劑
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 縮略詞12-15
• 第一章 緒論（一）15-33
• 1.1 sirtuin催化的去酰化反應(yīng)15-19
• 1.2 人類sirtuin催化的去�；磻�(yīng)的蛋白底物特異性19-21
• 1.3 催化機(jī)制21-28
• 1.3.1 動(dòng)力學(xué)機(jī)制22
• 1.3.2 化學(xué)機(jī)制22-28
• 1.4 人類sirtuin催化的去酰化反應(yīng)的生物學(xué)功能28-29
• 1.5 Sirtuin抑制劑的最新研究進(jìn)展29-32
• 1.6 展望32-33
• 第二章 課題選題目的，依據(jù)及設(shè)計(jì)原理（一）33-38
• 2.1 課題選題目的依據(jù)33
• 2.2 環(huán)化sirtuin抑制劑的設(shè)計(jì)原理及目標(biāo)化合物的設(shè)計(jì)33-38
• 2.2.1 設(shè)計(jì)原理33-36
• 2.2.2 目標(biāo)化合物的設(shè)計(jì)36-38
• 第三章 硫乙酰賴氨酸環(huán)肽合成，純化，及生物活性測(cè)試38-64
• 3.1 實(shí)驗(yàn)部分38-56
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器38
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑38-40
• 3.1.3 sirtuin生物測(cè)試試劑40
• 3.1.4 化合物的合成40-51
• 3.1.5 硫乙酰賴氨酸環(huán)肽的生物活性測(cè)試51-56
• 3.2 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采集處理56-61
• 3.2.1 化合物 6-12 的純化，質(zhì)譜表征56-57
• 3.2.2 化合物 6-12 的SIRT1/2/3 生物測(cè)試數(shù)據(jù)采集及處理57-61
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論61-62
• 3.4 本章小結(jié)62-64
• 第四章 SIRT2/SIRT3選擇性的環(huán)肽抑制劑的合成，純化，生物活性測(cè)試64-83
• 4.1 實(shí)驗(yàn)部分64-79
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器64
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑64-65
• 4.1.3 生物活性測(cè)試試劑65
• 4.1.4 化合物合成65-77
• 4.1.5 環(huán)肽化合物 13-16 的生物活性抑制測(cè)試77-79
• 4.2 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采集處理79-81
• 4.2.1 化合物 13-16 的純化，質(zhì)譜，液相，，表征79-80
• 4.2.2 環(huán)肽化合物13的SIRT1/2/3 生物測(cè)試數(shù)據(jù)處理80
• 4.2.3 環(huán)肽化合物14的SIRT1/2/3 生物測(cè)試數(shù)據(jù)處理80-81
• 4.2.4 化合物15的SIRT1/2/3 生物測(cè)試數(shù)據(jù)處理81
• 4.2.5 化合物16的SIRT1/2/3 生物測(cè)試數(shù)據(jù)處理81
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論81-83
• 第五章 環(huán)肽類sirtuin抑制劑研究小結(jié)83-84
• 第六章 緒論（二）84-96
• 6.1 前言84-85
• 6.2 去甲基化酶的催化機(jī)制85-87
• 6.2.1 動(dòng)力學(xué)機(jī)制85-86
• 6.2.2 化學(xué)機(jī)制86-87
• 6.3 去甲基化酶JMJD2和JARID1的底物特異性87-90
• 6.4 去甲基化酶JMJD2和JARID1的生物功能90-92
• 6.5 去甲基化酶JMJD2和JARID1的抑制劑研究92-94
• 6.6 展望94-96
• 第七章 課題選題目的及設(shè)計(jì)原理（二）96-98
• 7.1 課題選題目的96
• 7.2 JMJD2C模擬底物化學(xué)探針設(shè)計(jì)及其原理96-98
• 第八章 甲基化賴氨酸多肽類似物的合成，純化及生物活性測(cè)試98-114
• 8.1 實(shí)驗(yàn)部分98-114
• 8.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器98
• 8.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑98-99
• 8.1.3 JMJD2C生物測(cè)試試劑99-100
• 8.1.4 化合物合成及其質(zhì)譜表征100-104
• 8.1.5 建立JMJD2C的酶學(xué)生物測(cè)試方案104-108
• 8.1.6 Substrate mimic和probe1的JMJD2C測(cè)試108-112
• 8.1.7 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論112-114
• 第九章 JMJD2/JARID1底物模擬及化學(xué)探針研究小結(jié)114-115
• 參考文獻(xiàn)115-129
• 致謝129-130
• 附錄A130-152
• 已發(fā)表文章152

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本文編號(hào)：319931