本文關(guān)鍵詞：基于多肽構(gòu)建抗腫瘤靶向藥物的應(yīng)用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的以人非小細胞肺癌A549細胞為研究對象,設(shè)計合成多西紫杉醇偶聯(lián)Hsp90抑制肽靶向藥物,并探討其抗非小細胞肺癌作用,為其臨床轉(zhuǎn)化研究提供理論和實驗依據(jù)。方法采用固相多肽合成方法構(gòu)建多西紫杉醇偶聯(lián)Hsp90抑制肽靶向藥物(DTX-P7),并使用HPLC、質(zhì)譜對DTX-P7進行分析。采用皮下移植造模方法,接種A549細胞8×105/100μl于裸鼠右前肢腋窩皮下制備人非小細胞肺癌裸鼠皮下移植模型。待腫瘤形成且體積達到100 mm3時,將30只裸鼠隨機分成Control組、DTX組、DTX-P7組,給藥劑量按DTX濃度為10 mg/kg,每周給藥1次,共給藥4周。每周2次觀察裸鼠的狀態(tài),測量腫瘤的長徑與短徑,計算出腫瘤體積與相對腫瘤體積,記錄統(tǒng)計裸鼠的體重變化。第5周,處死裸鼠,分離裸鼠右前肢腋窩皮下的腫瘤組織,稱量腫瘤的重量。一部分腫瘤組織置于4%多聚甲醇保存,作石蠟切片,并用HE染色觀察腫瘤組織的病理狀態(tài)。一部分腫瘤組織提取蛋白,探討DTX-P7對Hsp90的表達及細胞自噬相關(guān)蛋白的影響。結(jié)果我們制備并得到了DTX-P7,所用的色譜條件符合實驗要求,質(zhì)譜分析結(jié)果圖中m/z=839.50為[M+H+K]2+峰,對應(yīng)分子量為839.50×2-1.01-39.10=1638.89,與計算單同位素分子量1638.83相符。體內(nèi)動物實驗,各組動物在給藥期間的體重穩(wěn)定無明顯差異,且心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腦等重要器官均未出現(xiàn)肉眼可見的明顯損傷。與Control組、DTX組相比,DTX-P7組裸鼠的相對腫瘤體積、腫瘤重量都有顯著性減小,表明DTX-P7具有顯著的抗非小細胞肺癌作用。與對照組相比,DTX和DTX-P7組的腫瘤組織的HE染色切片出現(xiàn)大量粉紅色淡染并且無細胞結(jié)構(gòu)的腫瘤壞死區(qū)域,DTX-P7組壞死情況比DTX更為嚴重,表明DTX-P7對腫瘤細胞具有很強的殺傷作用。結(jié)論DTX-P7體內(nèi)對非小細胞肺癌有顯著的治療作用,有望成為一種新穎的肺癌治療候選藥物。目的以人膠質(zhì)瘤U251細胞為研究對象,制備靶向肽-細胞穿膜肽雙修飾的PLGA紫杉醇納米粒并探討其對膠質(zhì)瘤的治療作用。方法運用噬菌體展示技術(shù)進行三輪淘選,篩選出與能人膠質(zhì)瘤U251細胞特異性結(jié)合的多肽,通過免疫組化的方法驗證其靶向性。用可生物降解的PLGA作為載體材料,采用界面沉淀法制備PLGA紫杉醇納米粒。然后通過酰胺縮合反應(yīng)將靶向肽HC、細胞穿膜肽TAT連于納米粒表面,制備靶向肽-細胞穿膜肽雙修飾的PLGA紫杉醇納米粒,并對其進行表征,用動態(tài)光散射儀測定粒徑、Zeta電位,高效液相色譜測定載藥量,透射電子顯微鏡觀察形貌等。通過體外藥物釋放實驗探討靶向肽-細胞穿膜肽雙修飾的PLGA紫杉醇納米粒對藥物釋放的影響,并通過細胞增殖實驗探討其對人膠質(zhì)瘤U251細胞的細胞毒性作用。結(jié)果我們篩選出能與U251細胞特異性結(jié)合的多肽HC,用免疫組化方法驗證得到其靶向性良好,可以作為靶向肽。所制備的靶向肽-細胞穿膜肽雙修飾的PLGA紫杉醇納米粒的粒徑分布比較集中,平均粒徑為350.5±31.8 nm,多分散系數(shù)為0.224±0.034,Zeta電位值為-31.9±5.0 mV,載藥量為6.49%,納米�；境蚀笮≥^均勻的類圓球形。在紫杉醇濃度相同的1-100 nM范圍內(nèi),靶向肽-細胞穿膜肽雙修飾的PLGA紫杉醇納米粒對細胞的殺傷作用優(yōu)于傳統(tǒng)藥物紫杉醇。結(jié)論篩選得到的靶向肽特異性良好,制備的靶向肽-細胞穿膜肽雙修飾的PLGA紫杉醇納米粒性質(zhì)穩(wěn)定,具有一定的緩釋作用,在細胞水平對膠質(zhì)瘤細胞有殺傷作用,為進一步實驗提供了思路。
【關(guān)鍵詞】：多西紫杉醇 多西紫杉醇偶聯(lián)Hsp90抑制肽靶向藥物 非小細胞肺癌 紫杉醇 納米粒 靶向肽 細胞穿膜肽 膠質(zhì)瘤
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 縮略詞表4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 第一部分 多西紫杉醇偶聯(lián)Hsp90抑制肽靶向藥物抗非小細胞肺癌作用研究11-30
• 前言11-14
• 材料與方法14-22
• 實驗結(jié)果22-28
• 討論28-29
• 小結(jié)29-30
• 第二部分 靶向肽-細胞穿膜肽雙修飾的PLGA紫杉醇納米藥物構(gòu)建及膠質(zhì)瘤治療初步研究30-55
• 前言30-32
• 材料與方法32-42
• 實驗結(jié)果42-51
• 討論51-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻55-60
• 綜述60-66
• 參考文獻63-66
• 個人簡介66-67
• 致謝67-68

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：307400