本文關(guān)鍵詞：aFGF對(duì)慶大霉素誘導(dǎo)的海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過(guò)建立海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞(AS)的體外培養(yǎng)模型,從細(xì)胞凋亡的模塊探討酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)對(duì)慶大霉素(GM)誘導(dǎo)的海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。方法：SD乳鼠的海馬組織經(jīng)體外分離和純化培養(yǎng),取傳至第三代的星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光法進(jìn)行細(xì)胞鑒定,獲得純度大于95%的星形膠質(zhì)細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將細(xì)胞接種于24孔板內(nèi)：實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為3組：①對(duì)照組：正常培養(yǎng)；②GM組：2 g/LGM作用細(xì)胞24h；③aFGF+GM組：加入4.25μg/L aFGF作用細(xì)胞24h后再加2 g/L GM培養(yǎng)24h。各組分別設(shè)6個(gè)復(fù)孔,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。24h后通過(guò)應(yīng)用TUNEL結(jié)合DAPI核染色法和Annexin V-FITC/PI雙染法反映細(xì)胞凋亡的表達(dá)狀況。結(jié)果：(1)形態(tài)學(xué)觀察：對(duì)照組在光鏡下可見(jiàn)細(xì)胞輪廓清晰,折光性強(qiáng),細(xì)胞胞體發(fā)出較多長(zhǎng)而分支的突起,呈現(xiàn)出形態(tài)多樣的梭形、多邊形交織排列的成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；GM組在光鏡下可見(jiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,部分細(xì)胞出現(xiàn)皺縮成團(tuán),胞體分支的突起連接中斷甚至出現(xiàn)細(xì)胞脫落的現(xiàn)象,喪失了細(xì)胞的完整性結(jié)構(gòu),細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有較多的顆粒和空泡存在；aFGF+GM組在光鏡下可見(jiàn)細(xì)胞突起回縮減弱,皺縮程度減輕,胞體形態(tài)結(jié)構(gòu)也見(jiàn)不同程度的緩解,細(xì)胞聚集成團(tuán)和細(xì)胞脫落現(xiàn)象減少,細(xì)胞輪廓較清晰,突起連接中斷少見(jiàn)且細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顆粒和空泡減少。(2)2g/L GM作用細(xì)胞24h能抑制細(xì)胞生長(zhǎng),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,同時(shí)給予4.25μg/L aFGF處理,星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡率下降,其中損傷組采用TUNEL染色陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)較正常對(duì)照組顯著升高(P0.01)；保護(hù)組用TUNEL染色陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)較損傷組顯著降低(P0.01)；但是,保護(hù)組與正常組之間不具差異性(P0.05)；而通過(guò)Annexin V-FITC/PI雙染法可見(jiàn)：正常對(duì)照組細(xì)胞的總凋亡率為8.37%,損傷組細(xì)胞的總凋亡率28.66%,保護(hù)組細(xì)胞的總凋亡率為25.55%。其中,保護(hù)組細(xì)胞的早期凋亡率與損傷組細(xì)胞的早期凋亡率相比未見(jiàn)區(qū)別,而其晚期凋亡率與損傷組相比有所降低,提示aFGF可能阻礙GM所致星形膠質(zhì)細(xì)胞早期凋亡的進(jìn)一步發(fā)展。結(jié)論：(1)采用“胰蛋白酶消化組織塊分離+傳代純化培養(yǎng)法”對(duì)體外培養(yǎng)大鼠AS進(jìn)行優(yōu)化,成功獲取高純度的星形膠質(zhì)細(xì)胞。(2) aFGF具有減輕慶大霉素所致星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的作用,且提示可能體現(xiàn)在阻礙細(xì)胞早期凋亡的進(jìn)一步發(fā)展。(3) aFGF對(duì)慶大霉素誘導(dǎo)的海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷具有一定的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 慶大霉素 海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞 凋亡 細(xì)胞培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-31
• 1 實(shí)驗(yàn)材料13-22
• 2 實(shí)驗(yàn)方法22-31
• 結(jié)果31-40
• 1 海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況31-32
• 2 加藥處理24h后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化32-34
• 3 星形膠質(zhì)細(xì)胞調(diào)亡的檢測(cè)34-40
• 討論40-48
• 1 原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的分離及純化培養(yǎng)的改進(jìn)41-45
• 2 原代星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷模型的建立45
• 3 星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷保伊作用的調(diào)亡檢測(cè)45-47
• 4 對(duì)今后實(shí)驗(yàn)研究工作的展望47-48
• 小結(jié)48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 英文縮略詞索引53-55
• 綜述55-70
• 參考文獻(xiàn)67-70
• 致謝70-72
• 碩士研究生期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文72

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李春鵬;張曄;夏春林;沈慧;張靜;陸志方;;巢蛋白和階段特異性胚胎抗原-1在大鼠2型星形膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)[J];解剖學(xué)報(bào);2007年02期

2 周曼;楊萬(wàn)超;劉翔;于淼;李文志;;大鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的改進(jìn)及鑒定[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年02期

3 文燦;李淑蓉;蘇炳銀;;離體脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞的純化與鑒定[J];局解手術(shù)學(xué)雜志;2008年01期

4 劉r

本文編號(hào)：305214