目的建立LC-MS/MS法測定Beagle犬血漿中美金剛的質量濃度,并將此方法應用于鹽酸美金剛片在Beagle犬體內的藥動學研究。方法采用蛋白沉淀法處理血漿樣品,以金剛烷胺為內標物質（IS）,采用Grace Altima HP C₁₈（50 mm×2.1 mm,5μm）色譜柱,流動相為體積分數0.1%甲酸水溶液-體積分數0.1%甲酸乙腈溶液,梯度洗脫,流速為0.35 m L·min^-1。離子源為電噴霧電離（ESI）源,采用正離子化方式測定,采用多反應監(jiān)測（multiple reaction monitoring,MRM）模式檢測,用于定量分析的離子反應為m/z 179.8→m/z 162.8（美金剛）,m/z 152.6→m/z 135.7（金剛烷胺,內標物質）。4只健康雄性Beagle犬單次經口給予鹽酸美金剛片25 mg,用Win Nonlin 6.1軟件以非房室模型計算藥動學參數。結果血漿中美金剛線性范圍為0.001⁰.2 mg·L^-1,定量下限為1μg·L^-1,日內和日間... 

【文章來源】：沈陽藥科大學學報. 2016年02期 第144-150頁 北大核心

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【部分圖文】：

美金剛(A)和金剛烷胺(B)的產物離子掃描圖

A—Blankplasma;B—BlankplasmaspikedwithmemantineandIS;C—Aplasmasampleof2hafteranoralofmemantine;Ⅰ—Memantine;Ⅱ—AmantadineFig．3ＲepresentativeMＲMchromatogramsofmemantineandISinBeagledogplasma．圖3血漿中美金剛和金剛烷胺的典型MＲM色譜圖2.5.5提取回收率試驗及基質效應取Beagle犬空白血漿50μL，置于1.5mLEP管中，分別依次加入美金剛低、中和高3個質量濃度質量控制溶液5μL，配制成相當于質量濃度為0.3×10－2、0.08和0.16mg·L－1的血漿質量控制樣品(QC)，除不加乙腈-水(體積比6∶4)外，按“2.2”條方法操作，按“2.3”條測定條件進行LC-MS/MS分析，獲得相應峰面積值A;另取Beagle犬空白血漿50μL，按“2.2”條方法操作，離心后獲得上清液，分別依次加入美金剛低、中和高3個質量濃度控制溶液5μL，按“2.3”條測定條件進行LC-MS/MS分析，獲得相應峰面積值B;另取乙腈-水(體積比6∶4)50μL，分別依次加入美金剛低、中和高3個質量濃度控制溶液5μL，按“2.3”條測定條件進行LC-MS/MS分析，獲得相應峰面積C，每一個質量濃度進行6樣本分析。以A/B×100%(%)計算提取回收率，B/C×100%(%)計算基質效應。結果表明，美金剛低、中、高3個質量濃度的提取回收率分別為(96.8±10.3)%、(94.9±3.9)%和(95.4±1.0)%，內標提取回收第2期劉佳等:LC-MS/MS法測定Beagle犬血漿中美金剛的質量濃度147

烷胺，IS)。美金剛和金剛烷胺的產物離子掃描圖見圖2。Fig．2Productionmassspectraofmemantine(A)andamantadine(IS)(B)圖2美金剛(A)和金剛烷胺(B)的產物離子掃描圖2.5分析方法確證2.5.1專屬性試驗分別取6只Beagle犬空白血漿各50μL，置于1.5mLEP管中，除將內標溶液用乙腈-水(體積比6∶4)代替外，其余按“2.2”條方法操作，按“2.3”條測定條件進行LC-MS/MS分析，獲得空白血漿樣品的色譜圖，如圖3A。分別取6只Beagle犬空白血漿各50μL，置于1.5mLEP管中，加入一定質量濃度的美金剛對照溶液5μL，除不加乙腈-水(體積比6∶4)外，其余按“2.2”條方法操作，按“2.3”條測定條件進行LC-MS/MS分析，獲得相應的色譜圖，如圖3B。美金剛的保留時間為1.95min，內標保留時間為1.51min。取Beagle犬徑口給予鹽酸美金剛片后2h的血漿樣品50μL，按“2.2”條方法操作，按“2.3”條測定條件進行LC-MS/MS分析，獲得相應的色譜圖，如圖3C。結果表明，空白血漿中內源性物質不干擾待測物美金剛與內標物的測定。2.5.2殘留效應試驗按“2.2”條方法操作制備空白血漿樣品和定量上限血漿樣品，按空白血漿樣品、定量上限血漿樣品和空白血漿樣品順序分別進行單樣本分析，交替進樣6次。殘留的美金剛和金剛烷胺(IS)響應值不超過定量下限響應值的20%，結果表明殘留效應對測定的影響可以忽略不計。2.5.3標準曲線的繪制和定量下限的確定取Beagle犬空白血漿50μL，置于1.5mLEP管中，依次加入質量濃度0.01、0.02、0.1、0.5、1.0和2.0mg·L－1美金剛標準工作溶液5μL，配制成相當于質量濃度分別為0.1×10－2、0.2×10－2、0.01、0.05、0.1和0.2mg·L－1的血漿樣品，除不加乙腈-水(體積比6∶4)外，其余按“2.2”條方法操作，按“2.3”?


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