前列腺癌(Prostate Cance,PCa)屬于男性泌尿生殖系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一,也是男性癌癥死亡的主要原因。近年來,PCa的發(fā)病率和死亡率不僅在西方國家有所上升,在亞洲人口中也迅速增長。傳統(tǒng)治療PCa的方法主要有激素治療、睪丸切除、放療和化療等方法。手術(shù)切除、化學(xué)治療和放療往往伴隨著許多副作用,如生存率低、耐藥性差、神經(jīng)毒性和血液系統(tǒng)不良事件等。前列腺癌是雄性激素敏感性腫瘤,在癌癥早期,通常使用雄激素剝奪療法治療。然而,隨著時(shí)間的推移,前列腺癌的生長變得不依賴于雄性激素致使雄激素消融治療無效。黃體生成激素釋放激素(LHRH)類似物或睪丸切除術(shù)的雄激素剝奪療法通常最初對(duì)器官受限的前列腺癌有效,但患者不可避免地從雄激素依賴性發(fā)展到抗去勢(shì)和激素難治的表型。目前這些患者主要依賴細(xì)胞毒性藥物,包括長春堿、依托泊苷、紫杉醇、雌莫司汀和米托蒽醌,但是這些藥物治療是有限的,它們的毒性和嚴(yán)重的不良反應(yīng)令人擔(dān)憂。隨著對(duì)前列腺癌病理生理的認(rèn)識(shí),分子靶向治療逐漸成為一種新的治療策略。最近的研究表明,從天然產(chǎn)物中提取的生物活性肽通常具有低毒性和抗癌活性。因此,迫切需要從天然產(chǎn)物中開發(fā)低毒高效的抗前列腺癌肽并闡明其抗癌機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)采用RNA轉(zhuǎn)錄組測序方法,DU145細(xì)胞經(jīng)綠側(cè)花�？鼓[瘤寡肽Anthopleura anjunae oligopeptide(AAP-H,YVPGP)處理后,共有80個(gè)基因的表達(dá)具有顯著性差異,對(duì)這些基因進(jìn)行GO注釋、統(tǒng)計(jì)和KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)有18條通路與對(duì)照組相比具有顯著性差異,其中包括MAPK、PI3K/AKT、mTOR和細(xì)胞凋亡等信號(hào)通路。接下來在體外和體內(nèi)進(jìn)一步研究了AAP-H在人前列腺癌DU-145細(xì)胞中的抗腫瘤作用機(jī)制。結(jié)果表明AAP-H無毒且具有抗腫瘤活性。細(xì)胞周期分析表明AAP-H可以阻滯DU-145細(xì)胞從S期進(jìn)入到G2期。Western Blot(WB)方法從蛋白層面檢測了磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信號(hào)通路在APP-H抗腫瘤機(jī)制中的作用。結(jié)果顯示,AAP-H導(dǎo)致p-AKT(Ser473),p-PI3K(p85)和p-mTOR(Ser2448)蛋白表達(dá)量呈劑量依賴性降低,而t-AKT與未處理的DU-145細(xì)胞相比,t-PI3K水平保持不變。接下來,采用抑制劑LY294002(10μM)或雷帕霉素(20 nM)來抑制DU-145細(xì)胞中的PI3K/AKT/mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,結(jié)果顯示有效減弱了AAP-H誘導(dǎo)的AKT和mTOR的磷酸化。同時(shí),抑制劑的加入進(jìn)一步提高了AAP-H誘導(dǎo)的Cleaved-Caspase-3水平。此外,AAP-H對(duì)腫瘤生長的影響以及PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路在裸鼠模型中的作用同樣如此。免疫組化分析顯示在DU-145異種移植瘤中,磷酸化的AKT,PI3K和mTOR蛋白表達(dá)量下降。WB顯示AAP-H處理導(dǎo)致p-AKT(Ser47),p-PI3K(p85)和p-mTOR(Ser2448)水平的劑量依賴性降低,而t-AKT和t-PI3K水平保持不變。同樣的,AAP-H處理后Bcl-xL水平降低,而Bax水平升高。AAP-H還增加了啟動(dòng)蛋白Caspase 8、9和執(zhí)行蛋白Caspase3、7水平。因此,APP-H對(duì)DU-145細(xì)胞的抗腫瘤機(jī)制可能涉及PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路的調(diào)控途徑,最終通過線粒體和死亡受體途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡。由此,疏水性寡肽(YVPGP)可以作為用于預(yù)防或治療前列腺癌的佐劑。
【學(xué)位單位】：浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

綠側(cè)花�？央� AAP-H 抗前列腺癌的機(jī)制研究A 純度檢測液相圖如液相圖 3-2 所示，RNA 峰集中度越高，降解率越低，圖中 RIN 值 RNA 完整性好，這與 RNA 瓊脂糖凝膠電泳圖結(jié)果一致。圖 3-1 RNA 純度檢測電泳圖Fig.3-1 RNA Purity Detection ElectrophoresisAB

檢測液相圖圖 3-2 所示，RNA 峰集中度越高，降解率越低整性好，這與 RNA 瓊脂糖凝膠電泳圖結(jié)果一圖 3-2 RNA 純度檢測液相圖Fig.3-2 RNA Purity Detection Liquid Phase Diagram圖 3-1 RNA 純度檢測電泳圖Fig.3-1 RNA Purity Detection ElectrophoresisACDB

A 純度檢測液相圖如液相圖 3-2 所示，RNA 峰集中度越高，降解率越低 RNA 完整性好，這與 RNA 瓊脂糖凝膠電泳圖結(jié)果一圖 3-2 RNA 純度檢測液相圖Fig.3-2 RNA Purity Detection Liquid Phase Diagraatmap 結(jié)果分析Fig.3-1 RNA Purity Detection ElectrophoresisACDB

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