【摘要】：蓖麻毒素(ricin)是從蓖麻籽中提取的一種植物糖蛋白,屬于RIPs家族,由兩條通過二硫鍵連接的多糖肽鏈RTA與RTB構(gòu)成。Ricin具有毒性強、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、易獲取等特點,嚴重威脅公眾生命安全。Ricin可以快速抑制蛋白質(zhì)合成,在數(shù)小時內(nèi)即可造成細胞和組織損傷,卻無明顯的中毒癥狀,而目前缺乏特異性對抗藥物,因此其中毒救治非常困難。目前,對于ricin中毒患者臨床上多采用催吐、透析等對癥支持療法,但對大劑量中毒或未及時送醫(yī)患者療效不佳。研究目的:Ricin抗毒藥物篩選及抗毒活性評價。研究內(nèi)容:⑴在細胞及動物水平篩選和評價單克隆抗體、Rivax疫苗等大分子抗ricin藥物的抗毒效果;⑵在細胞及動物水平篩選和評價小分子抗ricin藥物的抗毒效果,并采用聯(lián)合用藥的方式評價抗ricin藥物的抗毒效果。研究方法:⑴雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體,ELISA法檢測抗體亞類以及抗體與ricin結(jié)合特點,無細胞系蛋白合成抑制實驗評價抗體對ricin抑制蛋白合成作用的影響,通過細胞實驗與動物實驗評價抗體的抗毒活性;⑵采用動物實驗評價Rivax配伍鋁佐劑和多糖佐劑免疫小鼠后對高劑量ricin中毒的抗毒效果;⑶CCK-8法評價小分子抑制劑與ricin處理后MDCK細胞的存活率,對小分子抑制劑的抗毒活性進行體外評價;研究小分子抑制劑和ricin處理后的小鼠存活率,對小分子抑制劑抗毒活性進行體內(nèi)評價。研究結(jié)果:⑴成功制備了五株單克隆抗體(13-4,13-2-4,8-1-1-8,AB6與S11)。除13-4外,其他單克隆抗體均通過識別ricin不同表位與其結(jié)合,其中8-1-1-8與13-2-4識別RTB鏈,S11識別RTA;無細胞系蛋白合成實驗表明單克隆抗體S11可抑制ricin誘導(dǎo)的蛋白合成抑制作用;細胞實驗顯示單克隆抗體AB6與S11可有效對抗ricin細胞毒性,EC_(50)分別為26.79 ng×mL~(-1)與11.19 ng×mL~(-1);動物實驗顯示AB6與S11可以對抗2倍致死劑量ricin毒性。⑵鋁佐劑與茯苓多糖佐劑PCP-I配伍Rivax免疫小鼠可對抗9倍致死劑量ricin,小鼠存活率分別為90.91%與50%;淫羊藿多糖佐劑G1a配伍Rivax免疫小鼠可對抗3倍致死劑量ricin,小鼠存活率為77.78%。⑶細胞實驗結(jié)果表明,28個小分子抑制劑中,re705c與re706c在同時給藥或預(yù)防給藥時均可對抗ricin細胞毒性;re705c、re706c與ricin同時給藥時,EC_(50)值分別為0.67±0.14μmol×L~(-1)與0.39±0.08μmol×L~(-1);預(yù)防給藥時,EC_(50)值分別為17.53±1.37 nmol×L~(-1)與0.44±0.08μmol×L~(-1);動物實驗表明,中毒前0.5 h給予50 mg×Kg~(-1)的re705c可延長小鼠存活時間。AB6或S11與re705c聯(lián)合用藥可對抗2.5倍致死劑量ricin毒性,AB6或S11單獨用藥時,小鼠存活率分別為30%和60%;聯(lián)用re705c后,小鼠存活率分別為90%與100%。結(jié)論:⑴單克隆抗體AB6與S11可對抗致死劑量的ricin中毒,可作為抗ricin候選藥物進行下一步研究。⑵鋁佐劑與PCP-I多糖佐劑配伍Rivax免疫小鼠可對抗9倍致死劑量的ricin中毒,可作為Rivax抗原的候選疫苗佐劑使用。⑶Re705c可提高中毒細胞的存活率,延長中毒小鼠存活時間,與單克隆抗體AB6聯(lián)合用藥可提高單克隆抗體的抗毒效果。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R965
【圖文】：

前言uscommunis）（圖 1 左），又名蓖麻仁、大麻子、，在我國各地均有栽培。其種子蓖麻籽（圖 1表面有光澤，伴有黑白棕色條紋。具有“綠色石經(jīng)濟價值。蓖麻葉或蓖麻籽是一種傳統(tǒng)中藥，具，可用于各種腫痛。蓖麻籽是工業(yè)用油蓖麻油的后，含有豐富的蛋白質(zhì)，是一種優(yōu)良的綠色飼料求低，可以在鹽堿地沙地等貧瘠土地中生長，用我國的蓖麻種植面積約為 27 萬公頃，蓖麻籽的世界第二1。

測 S11 與 ricin 結(jié)合特點，mean ± SD, n = 3；與 BSA 包被組相比較05；單因素方差分析，SNK 后檢驗。racter of S11 with ricin by ELISA, mean ± SD, n = 3; compare with BS.01,*P < 0.05; one-wayANOVAtest followed by SNK test.

檢測 S11 與 ricin 結(jié)合特點，mean ± SD, n = 3；與 BSA 包被組相比較， 0.05；單因素方差分析，SNK 后檢驗。 character of S11 with ricin by ELISA, mean ± SD, n = 3; compare with BSA < 0.01,*P < 0.05; one-wayANOVAtest followed by SNK test.

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本文編號：2763445