【摘要】：芽孢桿菌種類繁多,分布廣泛,其次級代謝產(chǎn)物具有多種生物活性。本研究針對一株來源于石斛的拮抗細菌——賴氨酸芽孢桿菌He14,通過生物活性初篩實驗發(fā)現(xiàn)其發(fā)酵液對植物病原真菌具有拮抗作用。為了研究菌株He14發(fā)酵液的抑菌機理,本研究開展了以下工作:1、將He14液體發(fā)酵后進行抑真菌活性實驗,結(jié)果表明該菌的發(fā)酵液對于常見植物病原真菌和部分動物病原真菌的生長有抑制作用,綜合考慮發(fā)酵液對病原真菌的抑制率和病原真菌的生長速率,篩選出辣椒灰霉病菌作為后期活性跟蹤實驗的指示菌;對菌株He14及其發(fā)酵液進行穩(wěn)定性實驗,發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中的活性物質(zhì)具有遺傳穩(wěn)定性、溫度穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性和紫外穩(wěn)定性。2、分別使用萃取、沉淀、大孔吸附樹脂對發(fā)酵液中的活性成分進行富集,發(fā)現(xiàn)使用大孔吸附樹脂LX-60預(yù)處理發(fā)酵液可最大程度的保留其抑真菌活性成分;通過使用硅膠柱常壓分離、中壓柱分離等方式,進一步對發(fā)酵液粗產(chǎn)物進行分離純化,最終從菌株He14的發(fā)酵液中分離得到10個化合物。通過波譜技術(shù)(MS,~1H-NMR,~(13)C-NMR),并結(jié)合SicFinder Scholar、Antibase數(shù)據(jù)庫和文獻報導(dǎo)的比對結(jié)果確定了5個化合物的結(jié)構(gòu),分別為Triphenylmethanol(化合物1)、Palmitic acid(化合物2)、3,3’-Diindolymethane(化合物4)、Pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione(化合物8)和Phenylacetic acid(化合物10)。3、對分離得到的化合物進行抗真菌活性實驗,發(fā)現(xiàn)化合物8與化合物10對供試病原真菌的生長具有抑制效果�；衔�10對馬鈴薯晚疫病菌的抑制效果較強,對該病原真菌的生長不僅有抑制作用,還對已生長的菌絲有消融作用。另外,通過反復(fù)硅膠柱層析得到的混合物Ⅰ對辣椒灰霉病菌、馬鈴薯晚疫病菌及須毛癬菌的生長有抑制作用。綜上所述,本文研究了拮抗菌株賴氨酸芽孢桿菌He14的抑真菌活性及其發(fā)酵液的穩(wěn)定性,并分離鑒定出兩種具有抑真菌活性的化合物,本研究對分離純化這類化合物提供了優(yōu)化工藝的參考依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R915
【圖文】：

貴州大學(xué) 2019 屆碩士研究生畢業(yè)論文類化合物質(zhì)與氨基酸的化合物或復(fù)合體，是一類重要的抗菌，且以來源于細菌居多。脂肽類化合物的發(fā)現(xiàn)最早人首次從枯草芽孢桿菌株發(fā)現(xiàn)呈晶狀的脂肽結(jié)構(gòu)如圖 1-1，且研究發(fā)現(xiàn)，Surfactin 具有抗病毒、的能力[54]。之后不斷有學(xué)者從芽孢桿菌中分離到脂粉芽孢桿菌 B10-6-1 中分離出脂肽類抗生素 C14 Baycin D，兩種抗生素可用于抑制黃曲霉菌的生長[55]。桿菌發(fā)酵液中的脂肽類物質(zhì)可以抑制大腸桿菌的生

性的磷、鉀鹽，供作物吸收利用[61]。張愛民篩選出一株對ium dahliae)、棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani)、棉oxysporum)、小麥赤霉病菌(Fusarium graminearum)和小ulmorum)均有抑菌活性的芽孢桿菌 CX-7，通過高效液相酵液，結(jié)果表明該菌可分泌草酸、酒石酸、檸檬酸和蘋酮類化合物來源于乙�；捅；鶅烧叩木酆�，可作為抗細菌藥、抗抗癌藥、免疫抑制劑和降血脂藥物，具有極大商業(yè)價值。95F26 發(fā)酵液中分離得到化合物 95F26A(如圖 1-2)，經(jīng)鑒物，活性分析表明該化合物對金黃色葡萄球菌、短小芽孢生長具有較明顯的抑制作用[63]。桑建偉等從香蕉植株根部抑制真菌活性的解淀粉芽孢桿菌，該菌的發(fā)酵液n、Difficidin 和 Bacillaene 三類聚酮類化合物[64]。

圖 2-1 賴氨酸芽孢桿菌 He14 發(fā)酵液對供試動植物病原真菌的抑制效果ig. 2-1 Inhibitory effects of Lysinibacillus fusiformis He14 fermentation broth on tespathogenic fungi菌株 He14 的發(fā)酵液除了對白色念珠菌無抑制作用，對其余 6 株植物病 2 株動物病原真菌的生長均有抑制作用。其中，發(fā)酵液對馬鈴薯晚疫病作用最強，抑制率為 100%；對辣椒灰霉菌的拮抗作用稍弱，抑制率為稻紋枯病菌、水稻稻瘟病菌、煙草黑脛病菌、馬鈴薯早疫病菌、須毛癬毛癬菌的抑制率在 50%~75%之間。根據(jù)抑制率和病原真菌的生長速度辣椒灰霉病菌作為菌株 He14 發(fā)酵液后續(xù)活性跟蹤實驗的指示菌。2 He14 發(fā)酵液抑菌活性和菌液干重與時間的關(guān)系考察菌株 He14 不同發(fā)酵時間下發(fā)酵液的抑真菌活性及發(fā)酵液干重情2。

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蘭鑫;顏霞;甄偉;王惠;黃麗麗;;黃瓜內(nèi)生放線菌Hhs.015發(fā)酵液抑菌活性成分的研究[J];河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2015年06期

2 江鎮(zhèn)海;;苯乙酸在農(nóng)藥中的應(yīng)用與市場前景[J];農(nóng)藥市場信息;2015年17期

3 李云龍;;芽孢桿菌發(fā)展史綜述及用途[J];農(nóng)業(yè)開發(fā)與裝備;2015年05期

4 江寧宇;彭飛;方志鍇;吳云丹;陳名洪;謝陽;王海龍;江紅;連云陽;;海洋來源馬杜拉放線菌FIM95-F26產(chǎn)生的芳香聚酮類抗菌活性代謝產(chǎn)物的研究[J];中國抗生素雜志;2015年03期

5 鄒明花;徐長華;張獻全;;3,3’-二吲哚甲烷抑制STAT3通路對人卵巢癌細胞侵襲和遷移的影響[J];腫瘤;2014年11期

6 吳修紅;劉志東;楊恩龍;李夢;狄方;林文慧;;女貞子中主要化學(xué)成分的提取工藝及質(zhì)量控制研究進展[J];中醫(yī)藥學(xué)報;2014年05期

7 楊洪鳳;薛雅蓉;余向陽;劉常宏;;內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌CC09菌株在小麥葉部的定殖能力及其防治白粉病效果研究[J];中國生物防治學(xué)報;2014年04期

8 蘇明麗;盧文華;陳潔;;3’3-二吲哚甲烷聯(lián)合5-氟尿嘧啶對胃癌細胞增殖的影響[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2014年06期

9 曹瓊;倪超超;;蘇云金芽孢桿菌的生物防治安全性研究進展[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2014年11期

10 關(guān)雄;蔡峻;;我國蘇云金桿菌研究60年[J];微生物學(xué)通報;2014年03期

本文編號：2760071