【摘要】：蘇尼替尼(SUN)是一種新型小分子、多靶點(diǎn)的酪氨酸激酶抑制劑(TKI)類藥物,TKI類藥物選擇性抑制過(guò)度激活的酪氨酸激酶,主要用于腫瘤治療[1]。與傳統(tǒng)的細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物相比,此類藥物由于具有靶向性抗腫瘤特征在臨床凸顯優(yōu)勢(shì),成為近年新藥研發(fā)的熱點(diǎn)[2-5]。然而伴隨TKI類藥物的廣泛應(yīng)用,其不良反應(yīng)也逐漸顯露,其中最嚴(yán)重的不良反應(yīng)就是其心臟毒性[6-8],表現(xiàn)為從無(wú)癥的心電圖改變,到左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)降低,最終發(fā)展為充血性心力衰竭(CHF),嚴(yán)重威脅著患者的生命健康。因此,探索該類藥物心臟毒性的分子機(jī)制、尋找特異性毒性防治藥物具有重要意義。酪氨酸激酶抑制劑所導(dǎo)致的心臟毒性的分子機(jī)制目前尚不清楚,可能與其抑制心肌細(xì)胞的多種酪氨酸激酶、進(jìn)而抑制其中介的信號(hào)通路有關(guān)。基于蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)與CHF的密切關(guān)系,本課題組在前期的實(shí)驗(yàn)中觀察了PKC抑制劑對(duì)TKI心肌細(xì)胞毒性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在新生大鼠心肌細(xì)胞PKC抑制劑對(duì)伊馬替尼和蘇尼替尼(SUN)導(dǎo)致的細(xì)胞毒性具有顯著保護(hù)作用,使用亞型選擇性PKC抑制劑發(fā)現(xiàn)這種保護(hù)作用來(lái)自對(duì)新型PKC(n PKC),而不是傳統(tǒng)型PKC(c PKC)的抑制,提示酪氨酸激酶抑制劑類藥物的心臟毒性可能與n PKC活性增高有關(guān),抑制n PKC可能對(duì)TKI引發(fā)的心肌毒性具有保護(hù)作用。為驗(yàn)證我們的上述設(shè)想,本實(shí)驗(yàn)擬在整體動(dòng)物水平觀察選擇性n PKC亞型抑制劑白屈菜紅堿(CHE)對(duì)TKI類藥物蘇尼替尼導(dǎo)致的心臟毒性的影響,預(yù)期為探究酪氨酸激酶抑制劑心臟毒性的分子機(jī)制、尋找特異性防治藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目的:整體動(dòng)物水平給予SUN和不同劑量CHE,觀察CHE對(duì)SUN所致心臟毒性的影響;檢測(cè)心肌各PKC亞型表達(dá)量,探討CHE心肌保護(hù)的分子機(jī)制。方法:健康成年雄性C57小鼠50只,隨機(jī)分為5組,每組10只。(1)組為正常對(duì)照(CON)組:按0.1 ml/10 g灌胃給予清水,同時(shí)按0.1ml/10g腹腔注射生理鹽水;(2)組為蘇尼替尼(SUN)組:按照200 mg/kg/d的劑量灌胃給予蘇尼替尼,同時(shí)0.1 ml/10 g腹腔注射生理鹽水;(3)組為CHE低劑量治療組(SUN+CHE(L)):按照200 mg/kg/d的劑量灌胃給予蘇尼替尼,同時(shí)0.375 mg/kg/d劑量腹腔注射白屈菜紅堿;(4)組為CHE高劑量治療組(SUN+CHE(H))組:按照200 mg/kg/d的劑量灌胃給予蘇尼替尼,同時(shí)0.75 mg/kg/d劑量腹腔注射白屈菜紅堿;(5)組為陽(yáng)性對(duì)照組(SUN+OLM):按照200 mg/kg/d的劑量灌胃給予蘇尼替尼,同時(shí)3mg/kg/d劑量灌胃給予奧美沙坦(OLM,常規(guī)心衰治療藥物)。給藥3周處理、取材,觀測(cè)以下指標(biāo):(1)稱取心臟、肺的重量;(2)取血,制備血清,檢測(cè)血清中肌鈣蛋白(c Tn I)和腦鈉肽(BNP)濃度;(3)取心臟組織,提取線粒體,檢測(cè)心肌細(xì)胞線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV和V活性;(4)取心臟組織做電鏡切片,觀察心肌細(xì)胞內(nèi)線粒體等細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)及變化;(5)取心臟組織做HE染色切片,觀察心肌細(xì)胞組織學(xué)形態(tài)及改變;(6)取心臟組織,提蛋白做western,檢測(cè)各組心肌磷酸化PKC亞型(p-PKCα、p-PKCε以及p-PKCδ)的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Origin Pro 7.5進(jìn)行分析,采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。運(yùn)用單因素方差分析進(jìn)行組間的數(shù)據(jù)比較,當(dāng)P0.05時(shí),則認(rèn)為組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 CHE對(duì)SUN心臟毒性的影響(1)組織重量改變:給予SUN后小鼠肺組織、心臟的重量并未發(fā)生明顯改變,之后給予CHE和OLM也對(duì)小鼠肺和心臟重量無(wú)明顯影響。(2)血清酶學(xué)指標(biāo):單獨(dú)給予SUN,小鼠血清BNP水平與對(duì)照組相比顯著上升(P0.05),同時(shí)給予不同劑量的CHE和OLM后BNP水平均顯著下降(P0.05),恢復(fù)至對(duì)照組水平;單獨(dú)給予SUN的小鼠血清c Tn I水平顯著下降(P0.01),同時(shí)給予不同劑量CHE和OLM后,c Tn I水平均顯著上升(P0.01),恢復(fù)至對(duì)照組水平。(3)線粒體功能指標(biāo):單獨(dú)給予SUN后,小鼠心肌細(xì)胞線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV和V的活性均顯著下降(P0.01),而在同時(shí)給予CHE和OLM后,這兩種復(fù)合物的活性均顯著升高(P0.01),并且給予了CHE的兩組明顯高于對(duì)照組水平。(4)組織結(jié)構(gòu)學(xué)改變:透射電鏡結(jié)果顯示,在單獨(dú)給予SUN后,小鼠心肌細(xì)胞線粒體出現(xiàn)明顯的脊和膜融合現(xiàn)象,胞質(zhì)輕度水腫;同時(shí)給予CHE和OLM后,線粒體脊和膜融合的現(xiàn)象明顯減輕,高劑量CHE處理動(dòng)物的線粒體外觀完全恢復(fù)至正常。左心室心肌HE染色結(jié)果顯示,單獨(dú)給予SUN后,心肌細(xì)胞間質(zhì)充血明顯,細(xì)胞核輕度增大;在同時(shí)給予了CHE和OLM后,間質(zhì)充血明顯改善。以上結(jié)果表明,在C57小鼠整體水平,CHE對(duì)SUN的心臟毒性具有保護(hù)作用。2心肌PKC亞型表達(dá)變化磷酸化PKC代表激活的PKC,本實(shí)驗(yàn)采用Western檢測(cè)心肌磷酸化PKC亞型含量。結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,SUN組心肌磷酸化PKCε蛋白表達(dá)量顯著升高(P0.05),而磷酸化PKCδ、PKCα表達(dá)量則無(wú)明顯變化;低劑量CHE和OLM對(duì)SUN所致的磷酸化PKCε過(guò)表達(dá)無(wú)明顯影響,高劑量的CHE顯著抑制了磷酸化PKCε的過(guò)表達(dá)(P0.05),使其恢復(fù)至對(duì)照組水平。而CHE和OLM對(duì)磷酸化PKCδ、PKCα蛋白的表達(dá)無(wú)明顯影響。以上結(jié)果提示,SUN引發(fā)小鼠心臟毒性可能與PKCε亞型明顯激活有關(guān),而與PKCδ、PKCα亞型無(wú)明顯關(guān)聯(lián);CHE通過(guò)抑制PKCε過(guò)度激活發(fā)揮心臟保護(hù)作用。結(jié)論:1 CHE可以有效預(yù)防SUN導(dǎo)致的心臟毒性,并且這種預(yù)防作用呈現(xiàn)劑量相關(guān)趨勢(shì),即高劑量的CHE預(yù)防作用更明顯。2 SUN所致的心肌細(xì)胞毒性與PKCε亞型的活化有關(guān),CHE通過(guò)抑制PKCε活性發(fā)揮心肌保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R965
【圖文】：

N 對(duì)血清 BNP 濃度的影響及 CHE、OLM 對(duì)這種影響Effect of SUN alone and in the presence of CHE or OLM trations. CON: control group; SUN: SUN alone; L: SUN+: SUN+CHE (H) group; OLM: SUN+OLM group. N=8, versus control group,#P < 0.05 versus SUN.

UN 對(duì)血清 cTnI 濃度的影響及 CHE、OLM 對(duì)這種影響 Effect of SUN alone and in the presence of CHE or OLM trations. CON: control group; SUN: SUN alone; L: SUN+; H: SUN+CHE (H) group; OLM: SUN+OLM group. N=90.01versus control group,##P < 0.01 versus SUN.

SUN對(duì)線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV活性的影響及CHE、OLM對(duì)這種影響的作用H

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 趙永紅;舒尼替尼、伊馬替尼心臟毒性的生物標(biāo)志物研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2759645