【摘要】：質(zhì)譜(Mass spectrometry,MS)是化合物定性定量分析的常用儀器,具有專屬性強、靈敏度高、分析速度快、無需標記等特點,但其密閉的離子化環(huán)境、復雜的前處理過程等因素使其應(yīng)用受到限制。近年來常壓敞開式離子化技術(shù)(Ambient ionization,AI)發(fā)展迅速,這種技術(shù)在敞開式環(huán)境中直接對樣品中的待測分子離子化,操作簡單、無需樣品前處理,極大地推動了質(zhì)譜在實時、表面、原位、高通量分析等方面中的應(yīng)用。溶出度試驗是評價口服固體制劑工藝一致、體內(nèi)外相關(guān)性的一個重要參數(shù)。特別是對于生物等效性(Bioequivalence,BE)豁免的仿制制劑,體外溶出度的測定顯得尤為重要,但對于一些紫外吸收低、劑量小的制劑而言,建立快速準確的溶出度測定方法十分困難。本論文中我們搭建了紙噴霧離子化(Paper spray ionization,PSI)裝置,首次建立了PSI-MS溶出度檢測方法,可有效的解決不揮發(fā)性鹽與質(zhì)譜不兼容的弊端,不受樣品有無紫外吸收的影響且前處理簡單,適合于低含量制劑的測定。我們以馬來酸依那普利、鹽酸喹那普利、鹽酸貝那普利為待分析物,以相應(yīng)的氘代試劑為內(nèi)標,測定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;用新建的PSI-MS法測定了馬來酸依那普利片的溶出度,測定結(jié)果與液相色譜法一致,說明PSI-MS可用于藥物溶出度的測定,測定時間僅需幾十秒。不是所有的待測藥物都能找到相應(yīng)的氘代試劑,加之氘代試劑價格昂貴,為開發(fā)其普適性,本論文進一步研究了使用非氘代內(nèi)標測定藥物溶出度的可行性。我們選擇與待測樣品化學結(jié)構(gòu)、性質(zhì)相似的非氘代化合物非那雄胺雜質(zhì)Ⅰ替代氘代試劑為內(nèi)標,成功的測定了非那雄胺片的溶出度,測定結(jié)果與HPLC結(jié)果一致,證明了非氘代內(nèi)標的適用性,拓展了PSI-MS在溶出度測定方面的應(yīng)用。Aβ蛋白是阿爾茲海默癥(Alzheimer’s disease,AD)患者腦中老年斑的重要組成部分,被認為是治療AD的潛在靶點,有研究表明人參皂苷可用于延緩AD,推測其作用機理可能是通過人參皂苷與Aβ蛋白非共價相互作用實現(xiàn)的,由于非共價相互作用較弱,目前尚無有效技術(shù)手段測定非共價鍵的結(jié)合,也無法闡明人參皂苷作用機理。冷噴霧離子化技術(shù)(Cold spray ionization,CSI)是在低溫條件下實現(xiàn)離子化,離子化方式更軟,有助于保存溶液中弱的非共價相互作用,有望為非共價藥物-蛋白質(zhì)復合物研究提供有力手段。本論文基于CSI-MS技術(shù)建立了檢測非共價相互作用新方法,首次研究了人參皂苷與Aβ蛋白間非共價相互作用,通過直接及競爭性實驗對人參皂苷與Aβ蛋白結(jié)合化學計量比、配體的結(jié)合基團以及各人參皂苷的相對結(jié)合力進行了測定,從分子水平上闡明了人參皂苷可通過與Aβ蛋白結(jié)合干擾Aβ蛋白的聚集,為非共價相互作用的研究以及阿爾茲海默癥治療藥物的研制提供了很好的檢測手段。
【學位授予單位】：中國食品藥品檢定研究院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R927.1;O657.63
【圖文】：

S40K 型酸度計（瑞士），電子天平（METTLER-TOLEDO），超純水儀（默克密理博公司，Millipore, Bedford, MA），色譜紙（Grade 1，Whatman），鋁片，高壓直流電源。1.2.2 紙噴霧質(zhì)譜裝置系統(tǒng)圖 1-1 為紙噴霧離子源裝置示意圖及實物圖，其結(jié)構(gòu)主要包括用于噴霧的三角形色譜紙、用于支撐色譜紙且能夠?qū)щ姷娜切武X片以及用于產(chǎn)生電噴霧的高壓直流電源。三角形色譜紙尖端角度為 30°，底：5 mm，高：10 mm，電壓：4kv，紙噴霧尖端距質(zhì)譜口的距離約 6 mm。實驗操作主要分為四步，如圖 1-2 所示：一、將 5 μl 待測樣品溶液滴加到三角形紙片上；二、在空氣中自然晾干 10 min；三、紙片后端施加 4 kv 的高壓電，同時滴加 10 μl 的噴霧溶劑；四、樣品分子溶于噴霧溶劑中并在電壓的作用下在色譜紙尖端形成電噴霧，進入質(zhì)譜檢測。

三角形色譜紙尖端角度為 30°，底：5 mm，高：10 mm，電壓：4kv，紙噴霧尖端距質(zhì)譜口的距離約 6 mm。實驗操作主要分為四步，如圖 1-2 所示：一、將 5 μl 待測樣品溶液滴加到三角形紙片上；二、在空氣中自然晾干 10 min；三、紙片后端施加 4 kv 的高壓電，同時滴加 10 μl 的噴霧溶劑；四、樣品分子溶于噴霧溶劑中并在電壓的作用下在色譜紙尖端形成電噴霧，進入質(zhì)譜檢測。圖 1-1. 紙噴霧離子源裝置示意圖和實物圖

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張梅君;王志強;黃學蓀;;固體制劑溶出度的研究進展[J];中國藥業(yè);2009年08期

2 王曉輝;;藥物溶出度的測定方法及其進展[J];天津藥學;2006年02期

本文編號：2715707