【摘要】：心血管疾病是全球發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一。盡管國家對其投入逐年增加,但死亡率并沒有降低,給人類的健康造成嚴重威脅。動脈粥樣硬化是心血管疾病發(fā)病的主要原因,動脈粥樣硬化的病理過程是一種慢性的炎癥過程,涉及膽固醇沉積物的逐漸積累和動脈壁內(nèi)斑塊的沉積,最終導致動脈管腔狹窄,甚至阻塞。炎癥反應在動脈粥樣硬化發(fā)病過程中起重要作用。臨床上藥物治療是防治此類疾病的重要手段之一,且需終身用藥。但大多數(shù)藥物在靶部位作用時間短,毒副作用大,靶向性差,故其臨床治療效果十分有限。目的:本研究以辛烯基琥珀酸酐對殼聚糖進行修飾改性,合成新型辛烯基琥珀酰化修飾殼聚糖(OSA-CS),構建pH敏感OSA-CS兩親性聚合物納米載體,制備響應于炎癥性病灶酸性微環(huán)境而釋放藥物的納米載藥系統(tǒng),并對納米載藥系統(tǒng)進行抗炎抗氧化活性評價。方法:(1)采用直接�；▽⑿料┗晁狒�(OSA)接枝殼聚糖,合成辛烯基琥珀酰殼聚糖(OSA-CS);用核磁共振氫譜法和紅外光譜法對OSA-CS的結構進行表征;以酸堿滴定法檢測OSA-CS的取代度和溶解性能;采用芘熒光探針法測定其臨界聚集濃度;(2)以溶劑注入法包載姜黃素(CUR)和槲皮素(QUE)制備納米載藥系統(tǒng);采用紫外分光光度法測定納米載藥系統(tǒng)的包封率和載藥量;采用激光粒度測定儀測定其粒徑、多分散系數(shù)和Zeta電位,并以粒徑、多分散系數(shù)和Zeta電位為指標考察了納米載藥系統(tǒng)的藥物載體比和不同pH值條件對納米粒的影響及其穩(wěn)定性;以透射電鏡觀察納米載藥系統(tǒng)的形態(tài);以透析法考察了其體外藥物釋放特性;(3)用CCK-8法檢測細胞毒性和細胞存活率;利用溶血和粘附實驗評價OSA-CS的血液相容性;(4)用DPPH法評價納米載藥系統(tǒng)的抗氧化活性;采用熒光顯微鏡觀察CUR-OSA-CS的細胞攝取情況;以脂多糖(LPS)誘導巨噬細胞為炎癥模型,考察納米載藥系統(tǒng)對活性氧(ROS)的清除能力和對巨噬細胞增殖活性的影響。結果:(1)辛烯基琥珀酸酐接枝殼聚糖,合成OSA-CS,取代度隨辛烯基琥珀酐和殼聚糖的摩爾比的提高而提高,其取代度可達38.89%;與CS相比,取代度為16.9%~27.9%的OSA-CS具有良好的水溶性;OSA-CS的臨界聚集濃度(CAC)為0.027 mg/mL;(2)CUR-OSA-CS和QUE-OSA-CS的載藥量為14.4%、12.1%,包封率為84.3%、90.0%;粒徑為171.7、189.8 nm,多分散系數(shù)(PDI)為0.145、0.181,Zeta電位為-1.57、-1.74 mV;將CUR和QUE以1:1共同包載制備CUR+QUE-OSA-CS,其粒徑為166.6 nm,PDI為0.197,Zeta電位為-1.69 mV,表明載藥納米粒的粒徑較小,且粒徑分布均一;環(huán)境pH對載藥納米粒的粒徑和Zeta電位影響較大,當pH逐漸降到6.0時,納米粒表面電荷由負電位反轉(zhuǎn)為正電位,且PDI顯著增大,粒徑分布出現(xiàn)多峰現(xiàn)象,在透射電鏡下觀察到納米粒子膨脹裂解,顯示出良好的pH敏感性;且CUR-OSA-CS和QUE-OSA-CS的藥物釋放度受釋放介質(zhì)的pH值的影響,在pH 6.0酸性釋放介質(zhì)中具有最高的釋放度,可達到靶向給藥的目的;并且在48 h內(nèi)緩慢釋放藥物,具有良好的緩釋性;在儲存和血清穩(wěn)定性試驗中,載藥納米粒的粒徑均無明顯變化;(3)OSA-CS、CUR-OSA-CS、QUE-OSA-CS的細胞毒性分析顯示無毒性;另外,OSA-CS無溶血性和血小板粘附,表明OSA-CS與殼聚糖相比具有更加優(yōu)良的血液相容性(P0.001);(4)CUR-OSA-CS、Free CUR、QUE-OSA-CS、Free QUE、CUR+QUE-OSA-CS、Free CUR+QUE對DPPH自由基的半抑制濃度IC_(50)分別為3.97、4.98、1.29、1.89、1.95、1.49μg/mL,表明與游離藥物相比,納米載藥系統(tǒng)具有更高的抗氧化能力(P0.05);細胞攝取實驗結果顯示,納米載藥系統(tǒng)比游離藥物具有更高的細胞攝取率(P0.01);而且CUR-OSA-CS、QUE-OSA-CS、CUR+QUE-OSA-CS比游離藥物能更加有效地抑制LPS誘導的巨噬細胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生(P0.01)和LPS誘導的炎癥性細胞增殖(P0.05),尤其發(fā)現(xiàn)包載兩種中藥組分的納米載藥系統(tǒng)具有協(xié)同效應(P0.05),可發(fā)揮更強的抗炎抗氧化作用。結論:本課題制備出兩種中藥組份同時裝載的pH敏感性新型可溶性OSA-CS納米藥物載體,對姜黃素和槲皮素持有較高的包封率和載藥量,粒徑較小,且粒徑分布均一,可充分發(fā)揮兩種藥物聯(lián)合應用時的協(xié)同作用,pH敏感性智能響應靶向遞送又能降低藥物對正常組織細胞的損害,而且OSA-CS可響應環(huán)境pH變化而使藥物緩慢平穩(wěn)釋放,使藥物在靶部位的作用時間得到延長,提高藥物的抗炎抗氧化治療作用,提升藥物的治療效果,降低藥物的毒副作用。上述研究結果為炎癥微環(huán)境pH敏感緩釋靶向制劑的臨床應用提供了重要的實驗數(shù)據(jù)。
【圖文】：

concentration,CAC）。芘溶液的配制：稱取 12.0mg 芘，加適量甲醇超聲溶解，得濃度為 6×10-3mM/L 的芘溶液。用 0.5 mL 移液管精密量取 0.25 mL 濃度為 6×10-3mM/mL 的芘溶液，加甲醇定容，得 3×10-5mM/L 的芘甲醇溶液，，4 ℃保存?zhèn)溆�。�?0.2 mL 移液管取 0.2 mL 3×10-5mM/L 的芘甲醇溶液，取適量的 OSA-CS溶液置于上述容量瓶中，得到系列不同濃度的 OSA-CS 溶液（含濃度為 6×10-7mM/L 的芘溶液），37 ℃恒溫震蕩 24h。用熒光分光光度法在激發(fā)波長為 334nm下掃描各樣品在 350~450 nm 的熒光強度，通過 372 nm 和 382 nm 處的熒光強度比值繪制 I372/I382與 LogC 的曲線圖，計算 CAC。2.3 結果與討論2.3.1 OSA-CS 的合成本研究將殼聚糖和辛烯基琥珀酸酐置于均相條件，經(jīng)直接�；ê铣闪薕SA-CS，反應較為完全且后處理簡單。合成反應示意圖如圖 2.1 所示。

2.3.2 結構表征2.3.2.1 核磁共振氫譜分析OSA、CS 和 OSA-CS 的核磁共振氫譜見圖 2.2。由圖 2.2 可知，δ 0.82 處為OSA的甲基(CH3)特征峰，δ1.25處為OSA的 4’,5’,6’,7’位亞甲基(CH2)特征峰，δ1.95 處為 OSA 的 3’位亞甲基(CH2)特征峰，δ2.7 處為 OSA 的 3 位亞甲基(CH2)特征峰，δ=3.0 處為 OSA 的 2 位次甲基(CH)特征峰，δ=5.38 和 5.53 分別為 OSA的 3’和 2’碳碳雙鍵（RCH=CHR）特征峰，在 OSA-CS 的核磁共振氫譜中均能檢測到 OSA 的特征峰
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R943

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本文編號：2703561