【摘要】：眾所周知,藥物在血漿中不同程度地與血漿蛋白結合,其結合程度能夠影響藥物的體內過程(ADME),即機體對藥物的處置過程,進而影響藥物的藥效學行為。因此,藥物蛋白結合率(PPB)可以作為治療藥物監(jiān)測(TDM)及ADME評估的重要參數。然而,PPB監(jiān)測在臨床實踐中并未得到重視,其原因主要是表征PPB的方法仍存在問題,進而限制PPB在臨床TDM中的應用及臨床意義的探究。因此,血漿PPB分析方法的建立及其在非健康條件下的影響因素及臨床意義的探討成為臨床藥師面臨的一個難題。目前分析PPB的方法通常需要兩份血漿樣品在兩個體系中分別采用兩種前處理方法測得游離藥物濃度(C_f)和總濃度(C_t),這就意味著其PPB結果的準確性主要取決于C_f和C_t的分析方法準確性。HFCF-UF法作為直接進樣技術,已成功用于臨床C_f的分析,其結果的準確度及精密度高,可直接代入公式求算PPB。因而,C_t方法的準確性成為PPB結果是否可靠的關鍵。文獻報道C_t的前處理方法多為蛋白沉淀法(PPT)、液液萃取法(LLE)及固相萃取法(SPE)。每種方法皆有各自的優(yōu)缺點。總體而言,C_t的整個分析過程,繁瑣、耗時,多步操作易導致最終結果誤差增大,難以保證C_t及PPB結果的準確性;加之分析C_f和C_t時,因兩份血漿受采集時間及存儲條件不同等因素影響,使得最終PPB測定結果造成偏差,難以在臨床實踐中對患者實施治療藥物的PPB監(jiān)測。為此,本研究利用HFCF-UF技術成功改造了傳統(tǒng)C_t分析方法,建立一種簡單、準確且只需一份血漿樣品即可同時分析C_f、C_t及PPB的樣品前處理方法,為臨床醫(yī)師依據PPB及C_f來進行劑量調整提供可靠的分析平臺。通常在健康生理狀態(tài)下,藥物的PPB在藥-時曲線所對應的整個時間段內保持恒定,此時,C_f與C_t呈良好的相關性,C_t在一定水平上可反映C_f。然而,在非健康狀態(tài)下,如肝腎功能不全、低蛋白血癥等情況,PPB可以發(fā)生改變,進而直接影響C_f,使得藥物療效產生個體差異。在這種情況下,機體中藥物的PPB結合C_f才能反映藥物ADME,為個體化治療提供參考依據。第一部分中空纖維離心超濾法簡單快速分析卡馬西平蛋白結合率及其在治療藥物監(jiān)測中的意義目的:研究建立用同一份血漿樣品簡單、快速、準確分析卡馬西平(CBZ)的C_f、C_t及PPB的樣品前處理方法,初步探索PPB及C_f在臨床TDM中的意義。方法:利用HFCF-UF技術準確測定C_f的基礎上,對傳統(tǒng)C_t分析方法進行改造,并對其中加入的釋放劑種類及加入量進行優(yōu)化,以保證結合藥物完全從蛋白結合位點上脫離下來,從而在同一份血漿樣品中準確分析得到藥物C_f、C_t及PPB。將所建立的方法應用到20名接受CBZ治療的患者中,并對測定結果進行統(tǒng)計學分析。C_f及C_t的分析方法采用HPLC法。結果:C_f和C_t在0.535-21.4μg/mL的濃度范圍內線性關系良好(R~20.999),日內、日間精密度CV%及準確度%bias均小于±3.0%。丙酮作為釋放劑且體積為200μL時,C_t的絕對回收率為100.2-100.8%(CV%2.0%)。臨床初步探索表明,進行CBZ治療的20名臨床患者的PPB平均值為46.3%(10.1%-68.9%),其與健康志愿者的PPB均值(76%)之間存在明顯差異;20名患者的C_f和C_t之間的相關性較差(R~2=0.470)。結論:該樣品前處理方法簡單、快速,成功地在同一份血漿中分析CBZ的C_f及C_t,其結果的準確度及精密度高,從而提高了PPB結果的準確性,為今后臨床醫(yī)師利用C_f和PPB進行劑量調整提供可靠的分析手段。在非健康條件下患者的PPB有較大的變異,因此臨床實踐中應當對PPB進行監(jiān)測,以保證患者用藥的合理性。第二部分多索茶堿蛋白結合率測定方法研究及其在非健康條件下的影響因素及臨床意義初探目的:研究建立準確的多索茶堿(DFL)蛋白結合率測定方法,并初步探討DFL的PPB與患者生理病理條件的關系,為個體化給藥方案的制定提供理論依據。方法:采用HFCF-UF樣品前處理技術結合HPLC法在同一血漿中準確分析DFL的C_f及C_t,并通過公式計算求得PPB。將該方法應用到接受DFL治療的48名患者的PPB測定中,并對PPB結果與患者的性別、年齡、生化指標、疾病狀態(tài)進行相關性分析。結果:該方法的日內、日間精密度CV%及準確度%bias均小于±4.5%,C_t絕對回收率為99.4-100.3%(CV%2.3%);48名患者的PPB平均值為39.6%(3.02%-93.2%),其與健康志愿者的PPB均值(48%)之間存在明顯差異;相關性分析結果表明,患者的白蛋白水平、總膽紅素、直接膽紅素、尿素和肌酐與PPB的相關性良好(P0.05)。結論:該方法成功地在同一份血漿中同時分析DFL的C_f、C_t及PPB,為進一步研究非健康狀態(tài)下PPB的影響因素提供了可靠的分析平臺。臨床初步探索表明,接受DFL治療的48名患者的PPB存在個體間及個體內差異,因此臨床上應對PPB進行監(jiān)測以指導醫(yī)師優(yōu)化用藥劑量。同時PPB易受白蛋白、肝腎功能狀況的影響,因而在制定個體化的給藥方案時,臨床醫(yī)師應充分考慮患者的白蛋白水平及肝腎功能狀況。
【圖文】：

圖 1 Cf分析的樣品前處理過程Fig. 1 The experimental procedure for the analysis of free CBZ by HFCF-UF

圖 1 Cf分析的樣品前處理過程Fig. 1 The experimental procedure for the analysis of free CBZ by HFCF-UF
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R969

【參考文獻】

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本文編號：2699710